基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介在生物、醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介測(cè)序的應(yīng)用基因組DNA測(cè)序cDNA測(cè)序未知序列測(cè)序已知序列再測(cè)序基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介雙脫氧鏈終止法的原理Sanger雙脫氧鏈終止法的最大特點(diǎn)是引入了雙脫氧核苷三磷酸（2ˊ,3ˊ-ddNTP）作為鏈終止劑。ddNTP可以在DNA聚合酶的作用下和多核苷酸鏈的3ˊ羥基形成磷酸二酯鍵，但卻不能再與下一個(gè)核苷酸縮合，結(jié)果使得多核苷酸鏈的延伸終止?；蚍治黾夹g(shù)簡(jiǎn)介雙脫氧鏈終止法測(cè)序的主要步驟擴(kuò)增待測(cè)DNA片段，使其變性，獲得單鏈DNA模板。選擇一條與DNA單鏈互補(bǔ)的短鏈引物，將引物用放射性同位素標(biāo)記。引物先同單鏈模板復(fù)性。在四個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)DNA單鏈模板、互補(bǔ)引物分子、四種的dNTP、DNA聚合酶(Klenow酶)以及不同的ddNTP進(jìn)行聚合反應(yīng)?；蚍治黾夹g(shù)簡(jiǎn)介基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介雙脫氧鏈終止法測(cè)序與PCR的區(qū)別?測(cè)序只用一條引物，PCR需要兩條引物?測(cè)序產(chǎn)物線性增長(zhǎng)，PCR產(chǎn)物指數(shù)增長(zhǎng)?測(cè)序需要dNTP和ddNTP，PCR只用dNTP?測(cè)序產(chǎn)物是一系列長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基的片段，PCR產(chǎn)物只有一條帶基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介

1、商品化測(cè)序試劑盒-熒光染料標(biāo)記

ABIPRISMBigDyev3.1和v1.1試劑盒2、自動(dòng)化測(cè)序儀

ABIPRISM

310、3100和3730全自動(dòng)遺傳分析儀

雙脫氧鏈終止法的發(fā)展基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介BigDyev3.1試劑盒的反應(yīng)體系及條件反應(yīng)體系：

單鏈DNA模板引物DNA聚合酶Mg2+4種dNTP(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)

4種不同的熒光標(biāo)記的ddNTP(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)循環(huán)條件：

96℃1min→(96℃10s→50℃5s→60℃4min)×25個(gè)循環(huán)→4℃保溫基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介ABIPrism310GeneticAnalyzercapillarySyringewithpolymersolutionAutosamplertrayOutletbuffer+Injectionelectrode-Inletbuffer基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介AutosamplerTraySampleVialsElectrodeCapillarySeeTechnologysectionformoreinformationonCE電進(jìn)樣及電泳基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介熒光激發(fā)和檢測(cè)基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介影響測(cè)序質(zhì)量的因素測(cè)序成功的前提：PCR本身是成功的PCR產(chǎn)物一定要經(jīng)過(guò)純化后再測(cè)序測(cè)序引物比PCR引物靠后一些(Nestedprimers)在測(cè)序反應(yīng)過(guò)程中反應(yīng)體積不要有波動(dòng)（蒸發(fā)）選擇合適的測(cè)序產(chǎn)物純化方法基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介SNP篩查單核苷酸多態(tài)(SNP)是基因組中最為豐富的遺傳多態(tài)，是決定個(gè)體差異的最主要的遺傳基礎(chǔ)。多態(tài)形式主要包括單堿基替代、插入或缺失，一般也包括微小片斷插入/缺失。由于很多SNP位點(diǎn)本身就是功能多態(tài)位點(diǎn)，使得SNP在疾病易感基因的相關(guān)性研究中有著廣泛的應(yīng)用?；蚍治黾夹g(shù)簡(jiǎn)介SNaPshot?MultiplexSystem基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介SNaPshot試劑盒的反應(yīng)體系及條件反應(yīng)體系：

單鏈DNA模板引物DNA聚合酶Mg2+

4種不同的熒光標(biāo)記的ddNTP

循環(huán)條件：

(96℃10sec→50℃5sec→60℃30sec)×25循環(huán)→4℃保溫基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介方法特點(diǎn)

分型準(zhǔn)確：該技術(shù)也稱小測(cè)序技術(shù)，其準(zhǔn)確度僅亞于直接測(cè)序。多位點(diǎn)同時(shí)檢測(cè)：可以同時(shí)檢測(cè)達(dá)12個(gè)位點(diǎn)，而Taqman一次僅能檢測(cè)一個(gè)。不受樣本量的限制:而Taqman對(duì)少量樣本不適合。

基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介注意事項(xiàng)

1．同一反應(yīng)管中，不同位點(diǎn)的引物長(zhǎng)度必須不同，最好能相差4-6個(gè)堿基。2．引物與模板互補(bǔ)部分（有效引物）的Tm值至少要50℃。3．為了改變引物的長(zhǎng)度，區(qū)分不同的位點(diǎn)，可以在引物的5’端加poly(dT)、poly(dA)、poly(dC)或者poly(dGACT)尾巴。這四種尾巴理論上不容易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，并且都經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。小心：poly(dT)有可能與真核基因3’端的poly(dA)尾巴互補(bǔ)。4．在引物設(shè)計(jì)的時(shí)候，如果+鏈DNA的序列不理想，難以設(shè)計(jì)出最佳引物，請(qǐng)使用-鏈DNA設(shè)計(jì)引物。基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介微衛(wèi)星多態(tài)(STR)分析微衛(wèi)衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)是一種短核苷酸串連重復(fù)多態(tài)（shorttandomrepeat,STR）,重復(fù)單元通常為2-5bp,由于這種重復(fù)序列在DNA復(fù)制過(guò)程中不穩(wěn)定，所以突變很高，從而導(dǎo)致這種標(biāo)記位點(diǎn)的多態(tài)性很強(qiáng)，雜合度很高，正因?yàn)檫@種特點(diǎn)，微衛(wèi)星多態(tài)在遺傳分析中有著廣泛的應(yīng)用.

基因分析技術(shù)簡(jiǎn)介熒光——引物熒光——PCR產(chǎn)物熒光激發(fā)與檢測(cè)識(shí)別記錄結(jié)果PCR電泳數(shù)據(jù)處理STR分析