細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗

解讀編輯ppt主要內(nèi)容1.細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本在采集、運送中的本卷須知2.抗菌藥物藥敏感試驗中藥物選擇的規(guī)那么3.幾個問題的解讀編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的選擇和采集要求1.防止來自寄生菌的污染，應(yīng)當(dāng)保證每份標(biāo)本代表感染過程。健康宿主在感染的許多部位也可出現(xiàn)的正常菌叢，主要來自皮膚和呼吸道，它假設(shè)過早、過度生長，會掩蓋真正的病原菌，干擾培養(yǎng)結(jié)果解釋。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)2.選擇正確的解剖部位、適宜時間、符合規(guī)程的技術(shù)。3.活組織或針筒抽取是厭氧菌培養(yǎng)首選采集標(biāo)本方法，但絕不可冷凍，寧可在室溫中保存。4.采集足夠量標(biāo)本，標(biāo)本缺乏可能產(chǎn)生假陰性結(jié)果。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的運送要求1、常規(guī)性細(xì)菌學(xué)檢驗，要及時送到細(xì)菌室，延遲運送影響病原菌檢出。2、如疑似對低溫敏感的淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌感染標(biāo)本應(yīng)立即處理。如：腦脊液、生殖道、眼睛、內(nèi)耳標(biāo)本，并且絕不可以冷藏。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)血液培養(yǎng)血培養(yǎng)的臨床指征患者出現(xiàn)以下一種或同時具備幾種臨床表現(xiàn)時可作為血培養(yǎng)的重要指征：①發(fā)熱〔≥38℃〕或低溫〔≤36℃〕②寒戰(zhàn)；③白細(xì)胞增多〔>10.0×109/L，特別是有“核左移〞時〕；④粒細(xì)胞減少〔<1.0×109/L〕；⑤血小板減少；編輯ppt⑥皮膚、黏膜出血，常見于溶血性鏈球菌感染的菌血癥；⑦肝脾腫大；關(guān)節(jié)疼痛；C反響蛋白、內(nèi)毒素、降鈣素原升高等。老年菌血癥患者可能不發(fā)熱或體溫不低，如伴有身體不適、肌痛或卒中，可能是感染性心內(nèi)膜炎的重要指征。編輯ppt血培養(yǎng)的次數(shù)：美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會〔CLSI〕建議：疑心菌血癥的成人患者：采集2~3套血培養(yǎng)標(biāo)本,只做單一的血培養(yǎng)是不允許的，結(jié)果很難解釋。嬰幼兒患者：采集兩次血培養(yǎng)標(biāo)本〔不同部位〕采血培養(yǎng)2~5天內(nèi)，無需重復(fù)采集，因為治療后的2~5天內(nèi)感染菌不會馬上消失。研究證明：血培養(yǎng)只做一套的陽性檢出率為65%，做2套和3套檢出率分別為80%和95%。編輯ppt采血量：成人患者建議5-10ml/瓶。嬰幼兒患者建議每瓶不少于2ml〔采血量不超過總血量的1%〕。編輯ppt重新審視血培養(yǎng)編輯ppt不同部位感染敗血癥發(fā)生率編輯ppt實驗室類型: 美國私立大醫(yī)院微生物實驗室

醫(yī)院病床數(shù): 800beds

微生物標(biāo)本量: 600個標(biāo)本/天

血培養(yǎng)標(biāo)本量: 150瓶/天

血培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)采樣: 3套瓶/24小時

陽性結(jié)果: 10-30株需氧或兼性厭氧菌/天,2株厭氧菌/月

BacT/ALERT3D240 7臺編輯ppt

實驗室類型: 美國大型獨立實驗室

標(biāo)本來源: 14家中型醫(yī)院和一些小診所

微生物標(biāo)本量: 8000個標(biāo)本/天

血培養(yǎng)標(biāo)本量: 1400瓶/天

陽性結(jié)果: 75-100個陽性結(jié)果/天

BacT/ALERT3D240 30臺(5列,每列6臺)編輯ppt1370瓶/2021年7月26日美國，亞特蘭大，埃默里大學(xué)附屬一院，1100床位平均400人次/天美國，亞特蘭大，埃默里大學(xué)附屬二院，900床位編輯ppt2024/1/24Dr.HUBijie15JohnHopinksHospital香港大學(xué)瑪麗醫(yī)院每天接受血培養(yǎng)標(biāo)本300－400份！編輯ppt同樣規(guī)模醫(yī)院的血培養(yǎng)數(shù)國內(nèi)多數(shù)三甲綜合醫(yī)院30~50瓶/天臺灣大學(xué)附設(shè)醫(yī)院300瓶左右/天香港瑪麗醫(yī)院300—400瓶/天編輯ppt中國某三甲醫(yī)院

微生物送檢標(biāo)本分布〔3200床位〕

〔40,000標(biāo)本/年〕編輯ppt血培養(yǎng)儀

血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶應(yīng)室溫放置，不要放入冰箱冷藏。編輯ppt編輯pptVITEK2細(xì)菌鑒定儀編輯ppt生物平安柜編輯ppt二氧化碳培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)血培養(yǎng)的皮膚消毒程序血培養(yǎng)抽血時要嚴(yán)格執(zhí)行以下3步法：〔1〕75%乙醇擦拭靜脈部位待30S以上；〔2〕1%—2%碘酊作用30S或10%碘伏60S，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達3cm以上；〔3〕75%乙醇脫碘，對碘過敏的患者，用75%乙醇消毒60S，待乙醇揮發(fā)枯燥后采血。血培養(yǎng)瓶口應(yīng)以75%酒精的消毒劑處理。

編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)腦脊液1、CSF采集后，置于無菌試管中，培養(yǎng)標(biāo)本絕不能冷藏，每種檢驗需要最小量：細(xì)菌培養(yǎng)≧1ml，真菌≧2ml，抗酸桿≧2ml。2、CSF的收集：第一管做細(xì)菌培養(yǎng)，第二管做生化或免疫學(xué)檢查，第三管做常規(guī)檢查。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)尿液1、最好留取早晨清潔中段尿清晨起床后用肥皂水清洗會陰部，女性用手分開大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿10—20ml直接排入專用的無菌管中，立即送檢。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)2、滯留導(dǎo)管采集尿標(biāo)本用75%酒精消毒導(dǎo)管口，用針筒抽取5—10ml尿，置于無菌容器中送實驗室，滯留導(dǎo)管會使膀胱帶有細(xì)菌，盡可能不采用。尿標(biāo)本采集后，常規(guī)是2h內(nèi)送交細(xì)菌室，4℃冷藏的尿標(biāo)本，不超過24h。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)下呼吸道標(biāo)本標(biāo)本的來源有多種：痰、支氣管肺泡灌洗液、肺穿刺液等。尤其是痰標(biāo)本，采集痰標(biāo)本前，先要檢查口腔和咽部是否有感染灶〔如口腔念珠菌病〕，以免對標(biāo)本造成污染。讓病人先用洗必泰漱口液漱口，然后生理鹽水反復(fù)漱口后，取深部痰。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)糞便標(biāo)本1.常規(guī)性培養(yǎng)：直接留置糞便標(biāo)本于清潔、枯燥廣口容器中送檢。2.直腸拭子：無菌拭子插入肛門2-4cm，在肛門括約肌處柔和地旋轉(zhuǎn)拭子，可在拭子上明顯見到糞便，立即送到細(xì)菌室，患者不能自行采集；除嬰兒患者外，不推薦用拭子做常規(guī)性病原菌培養(yǎng)。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)眼、耳、鼻、喉標(biāo)本耳、鼻、咽部的細(xì)菌感染病原菌一般來源于口腔?？谇恢屑扔行柩蹙灿袇捬蹙?，故其周圍組織器官的感染不僅考慮是需氧菌，也須檢查厭氧菌；采集耳、鼻、咽拭子時易被正常菌群污染，應(yīng)在采集標(biāo)本時注意。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)

眼結(jié)膜標(biāo)本：預(yù)先沾濕拭子，在結(jié)膜上滾動采集標(biāo)本。標(biāo)本在15min內(nèi)送到細(xì)菌室。眼角膜標(biāo)本：用刮勺在潰瘍或創(chuàng)傷邊緣刮取碎屑，直接接種在培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)和涂片?？谇谎什繕?biāo)本：先用一個拭子擦去潰瘍或創(chuàng)面淺表分泌物，第二個拭子采集潰瘍邊緣或底部，常規(guī)培養(yǎng)1h內(nèi)送到細(xì)菌室。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)患有外耳炎患者：需要深部耳拭子，因為淺表拭子可能遺漏鏈球菌引起的蜂窩織炎。鼻標(biāo)本：用一根無菌拭子，伸進一側(cè)鼻孔約2.5cm，與鼻黏膜接觸，輕輕地旋轉(zhuǎn)拭子，蘸取黏膜上分泌物，緩慢抽出，直接送檢。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)膿液及創(chuàng)傷分泌物標(biāo)本開放膿腫：用無菌鹽水或75%酒精擦去外表滲出物，用拭子深入潰瘍基底部或邊緣部，采集二個拭子*，分別做培養(yǎng)和革蘭染色。閉鎖膿腫：用注射器抽取膿液，刺入無菌橡皮塞中送檢。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)無菌體液無菌體液是指除血液、骨髓和腦脊液外的羊膜液、后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑膜液。留取標(biāo)本時，為防止無菌體液凝固，在無菌容器內(nèi)預(yù)先參加滅菌肝素0.5mg〔可抗凝5ml標(biāo)本〕，再注入各種穿刺液，輕輕混合?！卜悄撔缘臒o菌體液、腦脊液，最好用血培養(yǎng)瓶增菌培養(yǎng)〕編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)生殖系統(tǒng)標(biāo)本陰道、子宮頸陷凹、子宮內(nèi)膜、生殖道創(chuàng)傷、前庭大腺、羊水膜及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。淋病奈瑟菌檢查時，不管男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深取樣送檢，要防止受陰道分泌物污染拭子。編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)

目前，我院細(xì)菌室常規(guī)培養(yǎng)均為有氧培養(yǎng)，可以做的有：普通細(xì)菌培養(yǎng)、臨床常見真菌的培養(yǎng)、支原體培養(yǎng)。*由于以上原因，對培養(yǎng)結(jié)果，要結(jié)合臨床情況進行解釋。*編輯ppt抗菌藥物敏感試驗

我國微生物實驗室常規(guī)試驗的藥物，普遍采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會〔CLSI〕制定的藥敏試驗指南。藥物的選擇考慮了臨床有效性、耐藥的流行情況、藥品的價格、美國食品和藥物管理局〔FDA〕的意見、當(dāng)前大多數(shù)人的意見，加上特定刊物文獻描述。*編輯ppt

青霉素敏感的葡萄球菌對其它青霉素類、頭孢類和FDA批準(zhǔn)可用于葡萄球菌感染的碳青霉烯類均敏感。

青霉素耐藥，苯唑西林敏感的菌株對不耐β-內(nèi)酰氨酶的青霉素耐藥，但對耐β-內(nèi)酰氨酶的青霉素、加有β-內(nèi)酰氨酶抑制劑的青霉素、相關(guān)的頭孢類和碳青霉烯類敏感。編輯ppt

苯唑西林耐藥的葡萄球菌對現(xiàn)今所有的β-內(nèi)酰氨類抗生素耐藥。因此，針對金黃色葡萄球菌，對β-內(nèi)酰氨類耐藥情況只需對青霉素和苯唑西林做藥敏。編輯ppt抗菌藥物敏感試驗抗菌藥物敏感試驗方法：1、測量含藥紙片周圍抑菌圈直徑大小的K—B紙片瓊脂擴散法；2、測量藥物最小抑菌濃度〔MIC〕的瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。編輯ppt抗菌藥物敏感試驗MIC值代表的是某株細(xì)菌實際的對某種藥物的敏感程度，它的作用就是我們可以通過MIC值來計算使治療取得成功的給藥量。對于確定的某個部位的感染而言，如果別離菌的MIC值較低，我們使用較低的藥量即可到達治療效果，而如果測定出來的MIC值過高，那么意味著我們需要使用更多藥量才能到達治療效果。編輯ppt抗菌藥物敏感試驗

MIC對于制訂給藥頻率也是至關(guān)重要的，如果MIC測定值低，那么就意味著相同給藥量的情況下，維持有效濃度的時間就越長，給藥頻率就可以適當(dāng)降低；而如果MIC測定值高，那么為了維持血藥濃度在有效濃度以上，我們就必須縮短給藥間隔，增加給藥頻率，或者增加每次的給藥量以提高血藥濃度。編輯ppt抗菌藥物敏感試驗MIC在真菌感染臨床治療中的指導(dǎo)意義在臨床應(yīng)用中，按日劑量與MIC的比值大于50的劑量用于嚴(yán)重真菌感染，日劑量與MIC值比值為25的劑量用于一般真菌感染。編輯ppt體外藥敏試驗的局限性1、CLSI藥敏標(biāo)準(zhǔn)制定中的局限性CLSI的藥敏標(biāo)準(zhǔn)都是按血藥濃度為根底制定的。目前CLSI還沒有對局部感染的藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)。面對局部感染時，按CLSI的指南制定的標(biāo)準(zhǔn)來判斷敏感性，體外藥敏結(jié)果和體內(nèi)療效可能不一致。編輯ppt體外藥敏試驗的局限性2、體外藥敏試驗不能反響病原菌和藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化。不同的患者感染的病原菌不同、病原菌的數(shù)量不同、藥物與血漿蛋白結(jié)合率不同等，這些因素都會影響藥物在體內(nèi)的抗菌活性。編輯ppt體外藥敏試驗的局限性3、未找到真正的感染菌

有菌部位標(biāo)本，如痰、咽試子、尿液等，在培養(yǎng)出細(xì)菌時都面臨判斷該細(xì)菌是致病菌、定植菌或污染菌的問題，而這些標(biāo)本的采集很難不污染攜帶菌。可想而知，用定植菌或污染菌的藥敏結(jié)果去治療感染菌，是不可能獲得一致結(jié)果的。編輯ppt抗菌藥物敏感試驗多重耐藥菌的監(jiān)測：1、衛(wèi)生部文件；*2、多重耐藥菌的管理制度；*編輯ppt抗菌藥物敏感試驗臨床上重要的多重耐藥菌株例如1.

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌〔MRSA〕：即對甲氧西林〔現(xiàn)在多用苯唑西林〕耐藥的金黃色葡萄球菌。它對青霉素類抗生素，包括青霉素類、頭孢類、以及含有β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合藥物如阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦等產(chǎn)生抵抗力。編輯pptMRSA萬古耐藥VRSA編輯ppt抗菌藥物敏感試驗MRSA的治療：由于醫(yī)院獲得性MRSA的別離率高，幾乎都是多重耐藥，對疑似重度MRSA感染患者，首先經(jīng)驗性選擇抗MRSA藥物治療，再根據(jù)藥敏結(jié)果調(diào)整到相應(yīng)敏感的藥物。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染防治專家共識。*編輯ppt抗菌藥物敏感試驗2.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶〔ESBLs〕：細(xì)菌在持續(xù)的各種β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的選擇壓力下,被誘導(dǎo)產(chǎn)生活潑的及不斷變異的β-內(nèi)酰胺酶,擴展了其耐受第三、四代頭孢菌素,以及氨曲南等單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的能力,這些新的β-內(nèi)酰胺酶被稱為ESBLs。編輯pptESBLs多重耐藥編輯ppt抗菌藥物敏感試驗

ESBLs的治療：

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌感染防治專家共識*編輯ppt抗菌藥物敏感試驗3、耐萬古霉素的腸球菌〔VRE〕腸球菌在使用糖肽類抗菌藥物〔萬古霉素〕治療過程中，其自身代謝和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使細(xì)菌對糖肽類〔萬古霉素〕抗菌藥物敏感性下降，甚至出現(xiàn)敏感性完全喪失，即為臨床的VRE感染。

編輯pptVRE編輯ppt抗菌藥物敏感試驗

VRE可分為VanA、VanB、VanC、VanD、VanE和VanG不同表型和基因型，不同分型決定了對萬古霉素和替考拉寧的不同耐藥性。vanA基因，特征為對萬古霉素和替考拉寧高度耐藥；vanB基因，特征為萬古霉素呈現(xiàn)不同程度耐藥，而對替考拉寧敏感。VRE耐藥基因可轉(zhuǎn)移給金黃色葡萄球菌等其他陽性菌。耐萬古霉素腸球菌感染防治專家共識：*編輯ppt幾個問題的解讀1、涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？涂片鏡檢是報告所有可見的細(xì)菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些細(xì)菌需要在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長。編輯ppt幾個問題的解讀

2、取的明顯就是膿液標(biāo)本，為何鑒定報告為無菌生長？我們做的是普通的有氧培養(yǎng)，膿液中可能為厭氧菌或L-型細(xì)菌感染?？赡芗?xì)菌被大量的中性粒細(xì)胞吞噬。編輯ppt幾個問題的解讀3、今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？取材是否標(biāo)準(zhǔn)。如痰標(biāo)本，口咽部的定植細(xì)菌比較多，選用優(yōu)勢菌做鑒定和藥敏試驗，就可能導(dǎo)致兩次不一樣。編輯ppt幾個問題的解讀4、是否能將所用的藥都做藥敏試驗?沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗〔需要藥物在體