題組層級快練（四十二）（2015?重慶）某課題組為解決本地奶牛產(chǎn)奶量低的問題，弓I進(jìn)了具高產(chǎn)奶基因但對本地適應(yīng)性差的純種公牛。（1） 擬進(jìn)行如下雜交：古A（具高產(chǎn)奶基因的純種）X^B（具適宜本地生長基因的純種）?C

選擇B作為母本，原因之一是胚胎能在母體內(nèi)正常 。若C中的母牛表現(xiàn)為適宜本地生長，但產(chǎn)奶量并不提高，說明高產(chǎn)奶是 性狀。為獲得產(chǎn)奶量高且適宜本地生長的母牛，根據(jù)現(xiàn)有類型，最佳雜交組合是 ，后代中出現(xiàn)這種母牛的概率是 （假設(shè)兩對基因分別位于不同對常染色體上）。（2） 用以上最佳組合，按以下流程可加速獲得優(yōu)良個體。供體公牛供精①> 供外 >胚胎 胚胎移植 A優(yōu)良供體母牛供卵受精±n#到堂體母牛個體③④⑤精子要具有受精能力，需對其進(jìn)行 處理；卵子的成熟在過程 中完成。在過程④的培養(yǎng)基中含有葡萄糖，其作用是 。為篩選出具有優(yōu)良性狀的母牛，過程⑤前應(yīng)鑒定胚胎的 。子代母牛的優(yōu)良性狀與過程 的基因重組有關(guān)。（3）為了提高已有胚胎的利用率，可采取 技術(shù)。解析（1）由于胚胎能在母體內(nèi)進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育，所以可選擇適宜當(dāng)?shù)厣L的純種牛做母本。用純種高產(chǎn)奶牛與適宜當(dāng)?shù)厣L的純種牛雜交，獲得了C牛，表現(xiàn)為適宜當(dāng)?shù)厣L，但產(chǎn)奶量并沒提高，這說明不適宜當(dāng)?shù)厣L是隱性性狀，適宜當(dāng)?shù)厣L是顯性性狀，高產(chǎn)奶是隱性性狀，低產(chǎn)奶是顯性性狀。由于控制奶牛的產(chǎn)奶量的基因和對本地的適應(yīng)性的基因分別位于不同的染色體上，說明他們在遺傳時遵循基因的自由組合定律，若控制奶牛的產(chǎn)奶量的等位基因為A和a,對本地的適應(yīng)性的等位基因為B和b,可推知雄牛A的基因型為aabb,雌牛B為AABB,C為AaBb,可見要獲得產(chǎn)奶量高且適宜當(dāng)?shù)厣L的母牛(aaB_),最佳的實驗組合為$AX^C，此時后代出現(xiàn)所需牛(aaBb)的概率為1/4X1/2=1/8O精子需獲能后才具備受精的能力；由于排卵時排出的卵子只發(fā)育到減數(shù)MII,而減數(shù)第二次分裂形成卵細(xì)胞是在受精過程中完成的，即卵子的成熟是在體外受精過程中完成；在胚胎培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基中的葡萄糖能為胚胎發(fā)育過程提供能量；為了篩選出具有優(yōu)良性狀的母牛,在胚胎移植之前需對胚胎的性別、高產(chǎn)奶和適宜生長的基因進(jìn)行鑒定；母牛在減數(shù)分裂過程中發(fā)生基因重組,產(chǎn)生具有優(yōu)良性狀基因的卵細(xì)胞,子代母牛的優(yōu)良性狀與此有關(guān)。通過胚胎分割技術(shù)可產(chǎn)生遺傳性狀相同的多個胚胎,從而提高胚胎的利用率。答案(1)生長發(fā)育或胚胎發(fā)育隱性 $AX早C1/8獲能或增強(qiáng)活力③供能性別、高產(chǎn)奶和適宜生長的基因②胚胎分割(2013?山東)科學(xué)家通過誘導(dǎo)黑鼠體細(xì)胞去分化獲得誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(iPS),繼而利用IPS細(xì)胞培育出與黑鼠遺傳特性相同的克隆鼠，流程如下：從黑鼠體內(nèi)獲得體細(xì)胞后，對其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱為 ，培養(yǎng)的細(xì)胞在貼壁成長至充滿培養(yǎng)皿底時停止分裂，這種現(xiàn)象稱為圖中2細(xì)胞胚胎可用人工方法從灰鼠輸卵管內(nèi)獲得，該過程稱為 ，也可從灰鼠體內(nèi)取出卵子，通過 后進(jìn)行早期胚胎培養(yǎng)獲得。圖中重組囊胚通過 技術(shù)移入白鼠子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育，暫不移入的胚胎可使用 方法保存。小鼠胚胎干細(xì)胞(ES)可由囊胚的 分離培養(yǎng)獲得，iPS與ES細(xì)胞同樣具有發(fā)育全能性，有望在對人類iPS細(xì)胞進(jìn)行定向 后用于疾病的細(xì)胞治療。解析(1)原代培養(yǎng)指將動物組織用酶處理成單個細(xì)胞后進(jìn)行的初次培養(yǎng)。接觸抑制指貼壁的細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖的現(xiàn)象。將早期胚胎從母體子宮中沖洗出來的方法叫沖卵。⑶暫不進(jìn)行胚胎移植的胚胎可放入-196°C的液氮中冷凍保存。胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，是由早期胚胎或原始性腺分離出來的一類細(xì)胞。iPS與ES細(xì)胞一樣，可通過誘導(dǎo)定向分化修補某些功能異常的細(xì)胞來治療疾病。答案(1)原代培養(yǎng)接觸抑制沖卵體外受精胚胎移植冷凍(或低溫)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞誘導(dǎo)分化3．慢性病人常出現(xiàn)白蛋白值偏低的狀況(比如慢性肝病、慢性腎病、腫瘤等)，缺乏白蛋白人就容易出現(xiàn)浮腫。人體的白蛋白正常值在每

100mL血液中含有3.8－4.8克，如果比正常值低很多時就需要注射人白蛋白，所以臨床上對白蛋白需求量很大。下圖是利用嶗山奶山羊乳腺生物反應(yīng)器制備藥用白蛋白的流程圖：要實現(xiàn)①超數(shù)排卵，應(yīng)在嶗山奶山羊A發(fā)情周期的某一階段用 處理，然后在恰當(dāng)時期采集卵子。通過②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，要對精子進(jìn)行獲能處理，對羊的精子常用化學(xué)誘導(dǎo)法，即用一定濃度的 誘導(dǎo)精子獲能。若我們已知白蛋白基因的堿基序列，一般采用 獲取目的基因。要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)，完整的基因表達(dá)載體要包括目的基因、 、 、標(biāo)記基因等部分。過程④需將重組質(zhì)粒用 方法注入受精卵的雄原核內(nèi)，在顯微鏡下判斷是否完成受精作用的標(biāo)志是 (4)對移植前的胚胎進(jìn)行性別鑒定時，宜取囊胚期的(4)對移植前的胚胎進(jìn)行性別鑒定時，宜取囊胚期的 細(xì)胞進(jìn)行鑒定，一般采用SRY－PCR方法，選擇出現(xiàn)陰性反應(yīng)的 (性別)胚胎進(jìn)行移植。⑸為了使胚胎移植能成功，需要對代孕奶山羊C進(jìn)行 理,使之與供體的生理狀況保持相同。解析(1)要實現(xiàn)超數(shù)排卵，應(yīng)對供體羊發(fā)情的某個時期用促性腺激素處理，這樣可以避免性激素引起的反饋抑制；精子獲能應(yīng)放在肝素或鈣離子載體A23187溶液中進(jìn)行?；蚬こ痰氖荏w細(xì)胞是動物細(xì)胞，采用顯微注射方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入；在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙觀察到兩個極體標(biāo)志著受精作用的完成，雌雄原核融合形成受精卵，標(biāo)志著受精過程結(jié)束。⑷選用滋養(yǎng)層細(xì)胞，采用SRY-PCR方法鑒定性別，出現(xiàn)陽性反應(yīng)者，胚胎為雄性，出現(xiàn)陰性反應(yīng)者，胚胎為雌性。選用雌性移植是因為雌性山羊乳腺可以產(chǎn)乳，制備藥用白蛋白，雄性不能。保證受體與供體的生理狀況保持相同應(yīng)該進(jìn)行同期發(fā)情處理。答案(1)促性腺激素'肝素或鈣離子載體A23187溶液(填對一空給分)PCR擴(kuò)增'乳腺蛋白基因的啟動子'終止子顯微注射'在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙是否觀察到兩個極體滋養(yǎng)層'雌性(5)同期發(fā)情4．閱讀如下材料，回答下列問題：資料I：馬鈴薯是世界近兩億人民的主要食物。但病毒侵染后導(dǎo)致產(chǎn)量大幅下降，故而培育脫毒或抗毒的馬鈴薯品種是提高產(chǎn)量的有效方法。資料II：人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。馬鈴薯莖尖病毒極少甚至無病毒，因此可將馬鈴薯莖尖培養(yǎng)成脫毒苗。此過程說明植物細(xì)胞具有 。為獲得抗病毒的馬鈴薯植株，往往采用 技術(shù)，將目的基因轉(zhuǎn)移到馬鈴薯體內(nèi)，其導(dǎo)入常使用 法，該方法是先將目的基因插入到相應(yīng)菌Ti質(zhì)粒的 上，最終進(jìn)入植物細(xì)胞并插入到植物細(xì)胞的 上。制備單克隆抗體過程中要用到 技術(shù)。最終篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點是 。⑸為了更多地生產(chǎn)出人HCG,可將相關(guān)的人的基因轉(zhuǎn)入牛受精卵中。有人構(gòu)思采用胚胎分割技術(shù)，獲得更多相同的轉(zhuǎn)基因牛，應(yīng)選擇 時期的胚胎。解析(1)馬鈴薯莖尖能培養(yǎng)成脫毒苗的原因是植物細(xì)胞具有全能性。將病毒基因轉(zhuǎn)移到馬鈴薯體內(nèi)的技術(shù)手段是基因工程，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T-DNA能進(jìn)行轉(zhuǎn)移。最終插入植物細(xì)胞的染色體DNA上。單克隆抗體的制備首先要將免疫的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，然后培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，故用到動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。雜交瘤細(xì)胞的特點是既能無限增殖又能產(chǎn)生專一性抗體。胚胎分割選用桑椹胚或囊胚。答案(1)全能性基因工程(或轉(zhuǎn)基因)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T－DNA染色體DNA動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合既能無限增殖又能產(chǎn)生專一性抗體桑椹胚或囊胚5．轉(zhuǎn)基因克隆豬已經(jīng)在我國培育成功。研究小組首先從豬胎兒皮膚中分離出纖維細(xì)胞，進(jìn)行體外培育。通過電穿孔的方法將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入纖維細(xì)胞，經(jīng)篩選后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞克隆。經(jīng)后續(xù)一些工作，再將重組胚胎移入代孕母豬體內(nèi)，最終獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬。請回答：在對纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的 ，以防止培養(yǎng)過程的污染，此外，應(yīng)定期更換 ，防止 對細(xì)胞自身造成危害。篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時，需要利用基因表達(dá)載體中 的作用。在進(jìn)行體細(xì)胞克隆前，先要從屠宰場收集豬卵巢，采集 ，并在體外培養(yǎng)成熟。然后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞核注入到 中，再經(jīng)過一系列過程獲得含有目的基因的重組胚胎。為了 ，可以對處于 階段的胚胎進(jìn)行均等分割。將重組胚胎移入到受體子宮中，由于受體子宮不會對外來胚胎發(fā)生 ，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因此，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因克隆豬。解析在對纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過程的污染，此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時，需要利用基因表達(dá)載體中標(biāo)記基因的作用。通過對囊胚或桑椹胚時期的胚胎進(jìn)行胚胎分割，可提高對重組胚胎的利用率。由于受體子宮不會對外來胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因次，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育。答案(1)抗生素培養(yǎng)液細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累標(biāo)記基因(3)卵母細(xì)胞去核卵母細(xì)胞提高重組胚胎的利用率桑椹胚或囊胚免疫排斥反應(yīng)6．根據(jù)下列有關(guān)胚胎工程的示意圖，分析回答：為使A羊超數(shù)排卵，向其注射 激素，選擇 期的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精；體外受精前要對B細(xì)胞進(jìn)行 理,常用的方法是 法。將早期胚胎移入D羊子宮內(nèi)的技術(shù)叫 ，D羊被稱為 (填“供體”或“受體”)；為使D羊的生理狀況更適合完成該技術(shù)操作，要對D羊進(jìn)行 處理以提高成功率。從早期胚胎分離出的ES細(xì)胞可誘導(dǎo)分化出不同的組織細(xì)胞，這是因為從功能上ES細(xì)胞具有 ；若取囊胚階段的胚胎進(jìn)行胚胎分割，要注意將 均等分割；早期胚胎培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中除營養(yǎng)成分外，還需加入 。解析本題考查胚胎工程。(1)注射促性腺激素能夠使A羊超數(shù)排卵,發(fā)育到減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細(xì)胞才能夠進(jìn)行受精作用；精子受精作用前需經(jīng)過獲能處理，常用的方法是化學(xué)誘導(dǎo)法。將早期胚胎移入D羊子宮內(nèi)的技術(shù)叫做胚胎移植，D羊是受體；為了提高成功率，要對D羊進(jìn)行同期發(fā)情處理。ES細(xì)胞具有發(fā)育的全能性；胚胎分割時要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割；培養(yǎng)早期胚胎時培養(yǎng)液中需要加入動物血清。答案(1)促性腺MII中獲能化學(xué)誘導(dǎo)胚胎移植受體同期發(fā)情發(fā)育的全能性內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(動物)血清7．下圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請分析回答：(1)構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是： ，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、 、 、終止子和復(fù)制原點等。⑵圖中載體上的Neo基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素(對細(xì)胞有毒害作用)，添加G418的目的是圖中所用的胚胎干細(xì)胞來自于 。圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的 位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素進(jìn)行 處理?？梢允褂?方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。解析(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時，需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。完整的