ICS65.120

B46

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T1384.2—2011

飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定

Determinationofstrain/tetracycline/aureomycininfeed

DB13/T1384.2—2011

飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：50μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T6682－1992，neqIS03696：1987）

3原理

試樣提取液經(jīng)離心后，上清液用OasisHLB固相萃取柱和陰離子交換柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

儀測定，外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1甲醇：色譜純。

4.2乙腈：色譜純。

4.3鹽酸。

4.40.4mol/L鹽酸溶液：準(zhǔn)確量取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。

4.5草酸。

4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶

中。

4.7甲酸。

4.8甲酸溶液：準(zhǔn)確量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻即可。

4.9土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥95％。

4.10土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：0.1mg/mL。準(zhǔn)確稱取適量的土霉素、四環(huán)素、

金霉素、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用甲醇配成0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。

4.11土霉素、四環(huán)素、金霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要吸取適量土霉素、四環(huán)素、金

霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用空白樣品提取液稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)

工作溶液在4℃保存，可使用三天。

4.12OasisHLB固相萃取柱或相當(dāng)者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水

預(yù)處理，保持柱體濕潤。

1

DB13/T1384.2—2011

5儀器

5.1液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源。

5.2分析天平：感量0.lmg和lmg各一臺。

5.3旋渦混勻器。

5.4固相萃取儀。

5.5高速離心機(jī)。

5.6具塞錐形瓶：50mL。

5.7離心管：50mL，5mL。

5.8氮吹儀。

5.9旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

6試樣的制備

6.1提取

準(zhǔn)確稱取3.0g樣品（準(zhǔn)確至0.01g），置于50mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，

加入鹽酸溶液（4.4）30mL，旋渦混勻1min，超聲20min，移至50mL離心管中，5000r/min離心10

min，取上清液，待凈化。

6.2凈化

取10mL上清液與40mL水稀釋混勻，再移入下接OasisHLB柱的貯液器中。溶液以小于1.0mL/min

的流速過柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，減壓抽干20min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗

脫，收集洗脫液于40℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,用1.0mL流動相溶解殘?jiān)?2000r/min離心10min，經(jīng)0.45

μm有機(jī)濾膜過濾后，待測。

7測定步驟

7.1測定

7.1.1液相色譜條件

色譜柱：InertsilC8，3.5μm，150mm×2.1mm（i.d）或相當(dāng)者；

流動相：乙腈＋甲醇＋0.4％甲酸溶液（18＋4＋78）；

流速：0.2mL/mim；

柱溫：25℃；

進(jìn)樣量：20μL。

7.1.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；

電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優(yōu)化至最佳值；

定性離子對、定量離子對見表1。

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DB13/T1384.2—2011

表1三種四環(huán)素族抗生素定性離子對、定量離子對

土霉素四環(huán)素金霉素

461/426445/410479/444

定性離子對/（m/z）461/443445/154479/154

461/381445/428479/462

定量離子對/m/z）461/426445/410479/444

7.1.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定

用土霉素、四環(huán)素、金霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，工作溶液溶度為

橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中土霉素、四環(huán)素、金霉素的響

應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)總離子流圖見附錄A。

7.2平行試驗(yàn)

按以上步驟，對同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測定。

7.3空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按上述步驟同時完成空白試驗(yàn)。

8結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

V1000

X=c??.............................................(1)

m1000

式中：

X——試樣中被測組分殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

C——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；

M——樣品溶液所代表最終試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

注：計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。

9精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20％。

3

DB13/T1384.2—2011

AA

附錄A

（資料性附錄）

三種四環(huán)素族抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖

1——土霉素，3.31min

2——四環(huán)素，3.92min

3——金霉素，8.02min

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DB13/T1384.2—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、河北醫(yī)科大學(xué)、

北京出入境檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、楊立學(xué)、盧曉宇、呂品、沈磊、米振杰、賈茜、李

志平、馬春玲、張敬軒、高振同、武英利。

I

DB13/T1384.8—2011

AA

附錄A

（資料性附錄）

氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖

表A.1氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖

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