本試劑僅供研究使用標本：血清或血漿使用目的：本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本癌胚鐵蛋白（CEF）含量。試驗原理：CEF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知CEF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將CEF和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CEF的濃度呈比例關(guān)系。Theperformanceofkit:1sensitivity:minimumdetectionconcentrationislessthan1standard.LiCEFarityofdilution.SampleliCEFarregressionandtheexpectedconcentrationcorrelationcoefficientRvalueis0.990.2:nospecificreactionwithothercytokiCEFs.3repeaCEFility:plate,platebetweenthecoefficientsofvariationwerelessthan10%.試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制96/48份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型標準品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型生物素標記的抗CEF抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型自備材料1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1．試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清－－－－-操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿－－－－-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液－－-1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿－－－－-將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保存－－－－－－如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9．在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。人癌胚鐵蛋白（CEF）ELISA試劑盒性能1.靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值