關于艾滋病檢測原理和技術規(guī)范2024/4/32一、艾滋病與艾滋病病毒第2頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/33（有A～E多個亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多個亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。第3頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/34艾滋病病毒感染后，可嚴重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導致各種嚴重的、難以治愈的機會性感染或腫瘤，最終導致死亡，病死率可達100％。第4頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/35HIV-1M組HIV-1O組HIV-2非洲中部和東部美國、歐洲、南美洲、非洲和亞洲南美洲、印度、贊比亞、中國非洲中部和東部泰國、中非、印度巴西、羅馬尼亞、喀麥隆加蓬、蘇聯、尼日利亞、烏干達、塞內加爾、贊比亞喀麥隆、扎伊爾、中非塞浦路斯扎伊爾喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進化與地區(qū)分布：西非、印度HIVABCDEFGHIJO1O2O3O4ABCDE第5頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/36基因亞型與感染途徑的關系第6頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/37感染分期臨床分期維持時間感染標志物傳染性原發(fā)感染潛伏期潛伏期2-4周抗體陰性(窗口期)傳染危險性高原發(fā)感染癥狀期急性HIV感染1-2周傳染危險性高慢性感染潛伏期無癥狀HIV感染2－15年(平均8-10年)抗體陽性有傳染性臨床發(fā)病期艾滋病0－3年(平均1-2年)抗體陽性抗原陽性傳染性強艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程第7頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/38二、艾滋病檢測的原理及方法第8頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/39臨床診斷感染監(jiān)測耐藥監(jiān)測治療評價干預評估抗體檢測抗體檢測核酸定性CD4檢測新感染檢測CD4檢測核酸定量核酸定量病毒分離基因測序核酸定性核酸定量各種檢測技術為艾滋病防治工作提供廣泛的技術支持平臺第9頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/310檢驗標志物檢驗目的檢驗方法HIV(1+2)抗體篩查試驗金標法、硒標法快速診斷試驗明膠顆粒凝集試驗(PA)

微孔板法酶聯免疫試驗（ELISA）第三代：雙抗原夾心法第四代：增加檢測P24抗原確證試驗蛋白印跡法(WB)

手工/儀器病毒抗原早期診斷酶聯免疫試驗檢測P24抗原病毒核酸臨床診斷治療評價定性試驗

檢測DNA定量試驗

即病毒載量，檢測RNACD4流式細胞儀法檢測CD4+T淋巴細胞艾滋病實驗診斷方法第10頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/311診斷試劑窗口期特點金標法、硒標法5周35天敏感性低，容易漏檢明膠顆粒凝集試驗(PA)5周35天特異性較好，敏感性不足ELISA（國產第三代）3周多20～25天普及，穩(wěn)定性欠佳ELISA（進口第三代）3周18～22天較為成熟，穩(wěn)定性好ELISA（進口第四代）2周多16～17天假陽性率偏高核酸檢測1周多10～12天不用于常規(guī)診斷各種診斷試劑特性第11頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/312硒標法金標法HIV抗體篩查試驗第12頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/313明膠顆粒凝集試驗（Particleagglutinationtest，PA）

第13頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/314PA的操作和結果判斷第14頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/3155

450/630nm下測定OD值混勻，加蓋，37℃溫育洗板3

加入底物第二次特異性結合4

加入終止液1

加入樣品洗板2

加入酶標記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結合酶聯免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）第15頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/316快速法可否單獨使用？《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測規(guī)范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本；兩種快速試劑均為陽性時，可以篩查出98%以上的陽性樣本；兩種快速試劑結果不一致時，可用ELISA復檢；單獨使用或兩種同時使用時，特異性差別無顯著意義。第16頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/317■

針對各種病毒蛋白的特異抗體■

區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■

檢測HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗WesternBlot免疫印跡法第17頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/318基因名稱代號功能基因產物片段HIV-1HIV-2結構基因外膜蛋白基因env合成外膜蛋白gp160gp120gp41gp140gp105

gp36

核蛋白基因gag合成核蛋白p55p24p18

p56p26p16

逆轉錄酶基因pol合成逆轉錄酶p65p51p31

p68p53p34調節(jié)基因反式激活因子tat加速病毒蛋白合成毒力蛋白表達調節(jié)基因rev促進整合的病毒選擇性地產生調節(jié)蛋白或毒粒成份負調節(jié)因子nef減緩基因轉錄，使停止繁殖而處于潛伏狀態(tài)毒粒感染性因子vif促進病毒感染另一個細胞HIV的主要基因及其產物

（HIV標志物）第18頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/319ss-RNA第19頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/320全自動免疫印跡儀第20頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/321HIV抗體陽性診斷標準：■2條env（gp160/gp120+gp41）■1條env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉錄酶（pol）第21頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/322篩查試驗：診斷出陰性樣本，并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復檢1（試劑A）：對陽性/可疑樣本排除操作誤差。復檢2（試劑B）：對陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗：診斷出陽性樣本。篩查試驗和確證試驗的作用第22頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/323臨床分期流行病學臨床表現實驗室診斷潛伏期有明確感染史HIV進入血液未能檢出任何標記物急性HIV感染有明確感染史上呼吸道感染癥狀頸、腋等淋巴結腫大頭疼、皮疹、肝脾腫大后期抗-HIV陽轉少數病例P24陽性CD4/CD8>1外周血WBC及淋巴細胞總數先降后回無癥狀HIV感染有明確感染史呈潛伏感染狀態(tài)無任何癥狀及體征但免疫系統(tǒng)逐漸被破壞抗-HIV陽性，P24陰性CD4/CD8>1，CD4總數正常艾滋病有明確感染史全身淋巴結腫大持續(xù)低熱>1個月慢性腹瀉>4-5次/日3個月內體重下降>10%免疫功能低下多種機會性感染、腫瘤抗-HIV陽性，P24陽性CD4/CD8<1CD4總數正常<200/mm3（或200-500）外周血WBC、Hb下降有相關感染的病原學、腫瘤病理學依據HIV/AIDS

診斷標準

（GB16000-1995）第23頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/324AIDS指征性疾病

（美國CDC,1993,抗-HIV陽性及其中一種疾病即可診斷）氣管、支氣管、肺、食道的念珠菌病除肝、脾、淋巴結以外的CMV感染彌漫性或肺外的鳥外分支桿菌病并發(fā)失明的CMV性視網膜炎彌漫性或肺外的其它分支桿菌感染HSV所致的慢性口腔、呼吸道、食道炎癥彌漫性或肺外的組織胞漿菌病侵潤性宮頸癌彌漫性或肺外的球孢子菌病卡波濟肉瘤肺外隱球菌病伯基特淋巴瘤肺部或肺外的結核病免疫母細胞型淋巴瘤原發(fā)性肺炎原發(fā)性腦淋巴瘤卡氏肺囊蟲肺炎進行性多發(fā)性腦白質病慢性腸道隱孢子病（病程>1個月）腦弓形體病慢性腸道孢子球蟲?。ú〕?gt;1個月）HIV相關腦病反復發(fā)生的沙門氏菌敗血癥HIV相關的消瘦綜合征第24頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/325HIV！HIV？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個月、18個月追蹤檢測陰性者為陰性，18個月仍陽性者為陽性。第25頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/326三、艾滋病檢測技術規(guī)范第26頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/327主要內容：

樣品采集和處理

檢測方法（HIV抗體、病毒核酸、病毒載量、CD4、HIV抗原檢測）

安全防護、職業(yè)暴露質量管理（質量保證、質量控制、質量評價）實驗室質量考評

HIV診斷試劑質量評估第27頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/328篩查試驗（試劑A）陽性／可疑均陰性均陽性陰性重復檢測（試劑A+B）陰性陽性確證試驗篩查實驗室一陰一陽確證實驗室復核檢測（試劑A/B/C）陽性／可疑陰性篩查報告（陰性）確認報告（陰性）確認報告（陽性）第28頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/329檢測方法檢測結果檢驗報告處理篩查試驗陰性HIV抗體陰性陰性告知陽性HIV抗體待復查上送確證確證試驗陰性HIV抗體陰性（-）陰性告知陽性HIV抗體陽性（+）陽性告知，個案調查不確定HIV抗體不確定（±）告知，3個月后復查共2次HIV抗體檢測結果處理規(guī)范第29頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/330HIV待確證樣品HIV陽性確證報告原件感染者確認報告原件確認報告復印件備案篩查實驗室所在單位篩查實驗室所在單位確證實驗室篩查實驗室艾滋病樣本確證、報告流程：第30頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/331認真填寫各類表格（最好能打?。?，及時上報。第31頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/332各篩查實驗室每月5日前上報上月檢測數據：第32頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/333四、艾滋病檢測的質量控制第33頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/334

行政支持

重視、投入、理解

實驗室規(guī)范化建設

規(guī)范、制度、程序

人員要求

資質條件、培訓和輪訓質量保證（QA）質量控制（QC）

室內質控

質控圖的建立和應用

檢驗期間核查

試劑對照、外部質控品對照、平行雙樣結果關聯性（不同方法、不同實驗室結果、人群特征等）可實時校驗：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質量評價（EQA）

實驗室室間質量考評第34頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/335■

建立各項規(guī)章制度和操作程序，定期檢查；■人員定期接受培訓和復訓，培養(yǎng)良好的業(yè)務素質；對HIV實驗室的10項基本要求第35頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/336■儀器設備運作正常，定期檢定和校準，妥善維護；■樣品流轉有序，記錄詳細，保存規(guī)范；■采用合格試劑，經常核查試劑質量，正確保存和使用；■環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄；■嚴格按照規(guī)范和試劑說明書操作；■建立各類質量記錄表格，資料保存完整，溯源性強；■堅持開展室內質控，參加室間比對和能力驗證；■安全防護、廢物處理措施落實，建立人員健康監(jiān)護檔案。第36頁,共40頁，2024年2月25日，星期天2024/4/337■每個實驗室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、雙抗原夾心、兩步法）?！龅谝淮魏Y查試驗推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應急試驗或復核試驗。■按政府招標目錄采購，保存供應商的資質證明文件，試劑批批檢報告?！龅怯浽噭┎少徍褪褂们闆r，注意保存條件并實行監(jiān)控?！鲈噭┖蜆悠窇珠_存放，過期試劑必須及時處理