DB3302/T063—2016DB3302/T063—2016壇紫菜人工育苗技術規(guī)范范圍本標準規(guī)定了壇紫菜人工育苗的術語與定義、育苗設施、育苗前準備、果孢子接種、自由絲狀體接種、貝殼絲狀體培養(yǎng)、采殼孢子苗、低溫保藏等技術要求。本標準適用于將培養(yǎng)的壇紫菜自由絲狀體或種菜的果孢子接種到貝殼上，以及在自然光條件下培育貝殼絲狀體并將殼孢子采集到苗網上的過程。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質標準NY5362無公害食品海水養(yǎng)殖產地環(huán)境條件NY/T394-2013綠色食品肥料使用準則NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質術語和定義下列術語和定義適用于本標準。果孢子壇紫菜葉狀體上的一種孢子，圓形，直徑10μm～13μm。由果胞受精后多次分裂成為果孢子囊，果孢子囊產生果孢子。絲狀體呈纖絲狀，伸出于菌體外，由鞭毛蛋白緊密排列并纏繞而成的中空管狀結構。紫菜生活史中的有性世代，即小紫菜。自由絲狀體果孢子在培養(yǎng)液或者瓊脂培養(yǎng)基等不能鉆殼的條件下，萌發(fā)成為的游離絲狀體。貝殼絲狀體由果孢子或自由絲狀體切段附著在貝殼上萌發(fā)并鉆進貝殼生長而成，呈細長不規(guī)則分枝的單列絲狀體，隨生長發(fā)育其形態(tài)發(fā)生變化，主要包括絲狀藻絲、孢子囊枝形成、殼孢子囊成熟和殼孢子放散等階段。絲狀藻絲貝殼絲狀體發(fā)育的前期階段，藻絲直徑為2μm～5μm，色素體為帶狀或塊狀。絲狀藻絲繼續(xù)生長形成孢子囊枝。孢子囊枝由絲狀藻絲生長而成，側枝形成的較粗絲狀體，細胞內有一個星狀色素體，細胞長度為寬度的2倍～3倍，成熟時長寬約相等。殼孢子囊由孢子囊枝的細胞生長發(fā)育而成，當雙分細胞出現(xiàn)，孢子囊枝轉變?yōu)闅ゆ咦幽摇ゆ咦与p分細胞逐漸成熟為殼孢子，殼孢子在一定條件下放散、萌發(fā)形成紫菜葉狀體。柏蘭尼液按照1%硝酸4份、85%～95%酒精3份、0.5%鉻酸3份混合而成；通過柏蘭尼液的去鈣溶殼，從貝殼中分離出絲狀體，便于鏡檢。壇紫菜人工育苗壇紫菜人工育苗包括育苗的基本設施、技術要求、操作方法和苗網的運輸方法。寧波市壇紫菜育苗標準化模式圖參見附錄A。育苗設施選址育苗場應建在遠離河口、周圍無污染、海水獲取方便、交通便利的沿海地區(qū)，產地環(huán)境應符合NY5362要求。水質要求pH值7.8～8.4、鹽度21～32、溶解氧不低于5mg/L、其他理化指標應符合GB11607和NY5052要求。育苗室高度與朝向育苗室層高2.5m～4.0m，座北朝南、東西走向。天窗和邊窗育苗室開天窗和邊窗作為采光設施，天窗總面積約占屋面的1/8～1/4，邊窗數(shù)量(總寬度)占南北墻長度1/2～1/4。天窗和邊窗的內側要配置白色、黑色窗簾，內墻涂刷石灰水和涂料。玻璃鋼頂?shù)慕Y構，內部需要配置保溫板，頂與池之間配置黑色的遮陽網。育苗池育苗池長方形，面積不少于15m2，與育苗室平行或垂直。吊掛培育池深0.6m～0.7m，平面培育池深0.3m～0.4m。池底應有2‰～3‰的坡度，排水口處設0.5m×0.5m×0.1m～0.2m的凹井。配置相應的進排水管，進排水管可用PE管或PVC管。供水設施蓄水池應有黑暗遮蓋物。貯水量是育苗池水體的2倍以上，一般高位設置，隔成2只以上，配有排污設施。育苗前準備育苗池處理新池用海水換水浸泡一個月以上，使浸泡水pH值低于8.5，舊池洗刷干凈方可使用。海水處理抽取潮面0.5m以下的海水，經黑暗沉淀72h以上作為育苗用的清潔海水。附著基選擇選用殼長4cm～10cm的文蛤殼，或殼長8cm～15cm的扇貝殼，或牡蠣殼；以新殼為宜。處理充分浸泡，剔除殘留物，用淡水洗凈曬干備用。吊掛培育時，將附著基穿孔成串，文蛤殼每串7對～9對，扇貝殼每串5對～7對，總長度40cm～55cm，每平方米育苗池文蛤殼吊掛70串～80串，扇貝殼吊掛50串～60串。平面培育貝殼呈魚鱗狀單層排列，每平方米鋪放貝殼600只～1000只。器具配備水泵、大小適中的容器、水勺、量杯、噴壺、溫度計、海水比重計、顯微鏡、計數(shù)器、吸管、載玻片等器具。種菜采集人工培育的種菜成熟即可選采，野生的種菜在清明節(jié)前后選采。要求種菜藻體健壯，具有光澤，沒有硅藻附著，肉眼可見葉片邊緣有明顯深紫紅色斑塊。顯微鏡檢查見成熟的果孢子囊群。處理和保藏新鮮種菜用海水洗凈、脫水、陰干即可使用。保藏種菜應預先將挑選的種菜用海水洗凈、脫水、陰干，待藻體出現(xiàn)鹽霜時，再裝入聚乙烯袋，密封包裝，貼上標簽放入冷庫或冰柜保存，溫度控制在–24℃～-18℃，保藏備用。自由絲狀體要求采用生長正常，光澤與顏色正常，無硅藻、藍藻等其他生物附著的自由絲狀體。果孢子接種采果孢子選擇清明前后的晴天上午，將陰干的種菜放入容器內加入海水攪拌刺激。海水與種菜重量比例不低于10︰1。低溫保藏的種菜，需室溫自然解凍，用海水清洗1遍～2遍，然后再放入海水中攪拌，刺激放散，吸取水樣，鏡檢果孢子的放散數(shù)量和質量。1h～2h后，取出種菜，用4層～6層紗布或80目～120目篩絹過濾果孢子水。檢測每毫升果孢子水中的果孢子數(shù)，并計算各池需要的果孢子水量。種菜可重復陰干使用。接種果孢子投放數(shù)量按育苗池水體計算，密度為每毫升300個～500個，用噴壺將孢子水均勻噴灑至準備好貝殼的池水中。自由絲狀體接種方法在4月～6月，將自由絲狀體用搗碎機點切，切段長度為200μm～400μm，均勻撒播在平鋪的貝殼上，遮光3天?？刂扑?.2m～0.3m。培育15天后，鏡檢，形成明顯藻落后，可洗刷換水或掛起來吊育。密度接種的密度為:3段/mm2～5段/mm2。貝殼絲狀體培養(yǎng)培養(yǎng)期從接種果孢子或者自由絲狀體到9月份采殼孢子苗。培養(yǎng)條件水溫水溫為22℃～29℃，夏季連續(xù)高溫期間，可采取加大水體、白天防暴曬、晚上開窗等措施調控溫度；孢子囊枝形成后，應注意保溫，防止水溫劇烈變化。光照根據發(fā)育期進行光照的調節(jié)，避免直射光照，見表1。絲狀體生長發(fā)育對光照的要求果孢子萌發(fā)期絲狀藻絲期孢子囊枝期殼孢子囊期光照時間h光強lux光照時間h光強lux光照時間h光強lux光照時間h光強lux自然日照1000～150012以上300012～81000～150010～8500～1000施肥視海水水質肥廋、換水情況和培育階段而定，一般保持育苗水中NO3-N濃度為5mg/L～15mg/L，PO4-P濃度為0.5mg/L～10mg/L，施用的肥料應符合NY/T394-2013要求。不同時期施肥量見表2。不同時期施肥量單位為mg/L肥料果孢子萌發(fā)期絲狀藻絲期孢子囊枝期殼孢子囊形成期氮肥（NO3-N）510～1550磷肥（PO4-P）0.511015管理換水果孢子采苗后4天～5天進行全池換水；以后視水質情況而定，換水時使貝殼保持一定濕度。洗刷采苗后25天～30天進行第一次洗刷，以后視貝殼上雜藻、污物附著情況，確定洗刷。采取人工洗刷，或水泵直接沖洗吊育貝殼絲狀體，洗刷貝殼同時徹底清洗育苗池，并調整貝殼受光位置。生態(tài)調控在育苗池引進活體橈足類，以每個貝殼表面有2個～5個為宜。通過橈足類攝食硅藻等雜藻，可減少洗殼的強度與次數(shù)。到孢子囊枝形成期，采用水泵沖洗，一并將硅藻與橈足類洗去，進入促熟期。光照調節(jié)利用天窗與邊窗的窗簾及遮陽網調節(jié)光線，在殼孢子放散前一個月進行縮光。光照條件應符合表1要求。絲狀體檢查方法前期可在低倍顯微鏡下直接檢查貝殼上的絲狀體，后期需取碎殼置容器中，用柏蘭尼液溶殼后取絲狀體鏡檢。內容絲狀藻絲密度和形態(tài)、孢子囊枝出現(xiàn)的時間和數(shù)量、殼孢子形成的時間和數(shù)量、雜藻及病害。記錄池水理化因子：光照、溫度、營養(yǎng)鹽、鹽度、pH、換水、施肥；貝殼絲狀體狀況：色澤、藻絲長度、藻絲生長發(fā)育階段及色澤變化、藻絲密度分布和病害等情況。成熟率孢子囊枝中雙分細胞數(shù)量的百分率為成熟率，成熟率達30%以上為殼孢子囊形成階段（成熟率%=雙分細胞對數(shù)/殼孢子囊細胞總數(shù)×100%）。病害防治適時換水。防止池水溫、光照、鹽度變化過大。洗刷與調節(jié)光照時，保持貝殼濕潤。采殼孢子苗采苗時間8月底到9月中旬，海區(qū)水溫穩(wěn)定在28℃以下，最適宜為23℃～25℃，具體時間視天氣、海況條件及采苗準備情況（如每枚貝殼孢子日放散量達10萬個以上）而定。過早或過遲采苗均直接影響紫菜的生長、病爛和產量。網簾由維尼龍繩或維尼龍和聚乙烯混合繩制成。殼孢子采苗刺激用降溫或流水刺激，促使貝殼上的殼孢子同步放散。采苗將育苗室光線調至3000Lux以上。在上午7時前，將網簾與貝殼相間均勻鋪至采苗池中。5m2～6m2采苗池面積鋪放180m2網簾。采苗時需有人工潑水或水泵沖水，保持水體流動。應經常翻動、拉勻，并對調上下的網簾。附苗用200目篩絹附苗，殼孢子以15個/mm2～25個/mm2為宜；網線散頭單絲附苗，殼孢子以3個/mm～5個/mm為宜；網簾上殼孢子附著密度在1個/mm單絲～2個/mm單絲，苗簾即可出池。出池后，直接下海培育或冷藏保存。苗網運輸殼孢子網簾可車運、船運，避免網簾大量重疊，避免直射光，途中適當淋灑海水。低溫保藏殼孢子網簾在干燥與密封的條件下放置在–24℃～–18℃的冷庫中冷藏備用，以綜合利用育苗室的空間，避免不良的生長時期，待條件適宜時下海培育成為幼苗。

（資料性附錄）1下自由絲狀體培養(yǎng)期采殼孢子苗采殼孢子苗1.采苗時間:8月底9月中旬，海區(qū)水溫穩(wěn)定在28℃以下，最適宜為23℃～25℃，具體時間視天氣、海況條件及采苗準備情況（如每枚貝殼孢子日放散量達10萬個以上）而定。過早或過遲采苗均直接影響紫菜的生長、病爛和產量。2.附著基:維尼龍繩或維尼龍和聚乙烯混合繩制成的網簾。3.刺激方法:用降溫或流水刺激，促使貝殼上的殼孢子同步放散。4.采苗方法:將育苗室光線調至3000Lux以上。在上午7時前，將網簾與貝殼相間均勻鋪至采苗池中。5m2～6m2育苗面積鋪放180m2網簾。采苗時需有人工潑水或水泵沖水，保持水體流動。應經常翻動、拉勻，并對調上下的網簾。5.附苗密度:用200目篩絹附苗，殼孢子為（15～25）個每平方毫米為宜；網線散頭單絲附苗，殼孢子以（3～5）個每毫米為宜；網簾上殼孢子附著密度在（1～2）個每毫米單絲，苗簾即可出池。6.出池:苗簾出池后，直接下海培育或冷藏保存。A.1寧波市壇紫菜育苗標準化模式圖中上12下中上11下中上10下貝殼絲狀體培育中上9下貝殼絲狀體培育1．時期：從接種貝殼到采殼孢子苗。2.水溫:22℃～29℃，夏季連續(xù)高溫期間，可采取加大水體、白天防暴曬、晚上開窗等措施；殼孢子囊枝形成后，應注意保溫，防止水溫劇烈變化。3.根據發(fā)育期進行光照的調節(jié)，避免直射光照。利用天窗與邊窗的窗簾及遮陽網調節(jié)光線，縮光是在殼孢子放散前一個月進行。4.施肥：視清潔海水水質肥廋、換水情況和培育階段而定，一般保持育苗水中NO3-N濃度為5mg/L～15mg/L，PO4-P濃度為0.5mg/L～10mg/L，5.換水：果孢子采苗后4天～5天進行全池換水；以后視水質情況而定，換水時使貝殼保持一定濕度。6.洗刷：果孢子采苗后25天～30天進行第一次洗刷，在殼孢子囊形成前視貝殼上雜藻、污物附著情況而確定。洗刷貝殼同時徹底清洗育苗池、換水，并調整貝殼受光位置。中采殼孢子苗上8下貝殼絲狀體培育期中接種貝殼上7下中上6下中上5下接種貝殼1.果孢子接種貝殼:選擇清明前后的晴天上午，將陰干的種菜放入容器內加入清潔海水攪拌刺激。清潔海水與種菜重量比例不低于10︰1。低溫保藏的種菜，需室溫自然解凍，用清潔海水清洗1遍～2遍，然后再放入清潔海水中刺激放散。攪拌刺激，吸取水樣鏡檢果孢子的放散數(shù)量和質量。1h～2h后，取出種菜，用4層～6層紗布或篩絹過濾孢子水，檢測每毫升孢子水中的果孢子數(shù)，并計算各池需要的孢子水量。