關于蛋白質的沉淀反應實驗一、目的要求：了解沉淀蛋白質的幾種方法及其實用意義第2頁,共16頁，2024年2月25日，星期天二、實驗原理：在水溶液中的蛋白質分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質顆粒可因失去電荷和脫水，甚至變性，則以固體形式從溶液中析出，這個過程稱為蛋白質的沉淀反應。第3頁,共16頁，2024年2月25日，星期天蛋白質的沉淀反應可分為兩類。（1）可逆的沉淀反應蛋白質雖然沉淀析出，但蛋白質分子的結構尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質而不變性。屬于這類反應的有；蛋白質的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質。提純蛋白質時，常利用此類反應。第4頁,共16頁，2024年2月25日，星期天（2）不可逆沉淀反應此時蛋白質分子內部結構發(fā)生重大改變，蛋白質常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱、重金屬鹽、過酸、過堿、震蕩、超聲波或某些有機酸都能使蛋白質發(fā)生不可逆沉淀反應。蛋白質變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質也未必都已變性第5頁,共16頁，2024年2月25日，星期天三、實驗材料與設備：（一）材料5ml鮮雞蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌后用4-8層紗布過濾，新鮮配制。第6頁,共16頁，2024年2月25日，星期天（二）試劑蛋白質溶液取10ml蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌均勻后，用紗布過濾濃蛋白溶液雞蛋清稀釋2倍（1:1）方法同上飽和硫酸銨，2%硝酸銀，0.5%醋酸鉛溶液濃鹽酸，濃硫酸，濃硝酸，1%硫酸銅，0.1%醋酸，10%醋酸，飽和氯化鈉溶液，10%NaOH溶液，1%醋酸10%鞣酸，飽和苦味酸溶液，0.01%NaOH第7頁,共16頁，2024年2月25日，星期天（三）設備水浴鍋濾紙，漏斗吸管試管及試管架玻棒第8頁,共16頁，2024年2月25日，星期天四、實驗步驟：（一）蛋白質的可逆沉淀蛋白質的鹽析過濾2ml蛋白質濃溶液等體積飽和濃硫酸溶液沉淀清夜硫酸銨粉末沉淀加水觀察現(xiàn)象第9頁,共16頁，2024年2月25日，星期天（二）蛋白質的不可逆沉淀

1.重金屬離子沉淀蛋白質重金屬離子與蛋白質結合成不溶于水的復合物。取3支試管，加入蛋白質溶液1mL，加入0.01%NaOH，再加2%硝酸銀溶液1滴、0.5%乙酸鉛1滴和1%硫酸銅1滴，振蕩試管，觀察生成沉淀的顏色和量。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？第10頁,共16頁，2024年2月25日，星期天2.強酸沉淀蛋白質取3支試管，各加入10滴蛋白質溶液，分別沿管壁加入等量濃鹽酸，濃硫酸和濃硝酸10滴。觀察兩溶液界面處白色環(huán)狀蛋白質沉淀的生成。然后搖動試管，蛋白質沉淀應在過量的鹽酸和硫酸中溶解，在含硝酸的試管中蛋白質沉淀不會溶解。（磷酸不能使蛋白質沉淀，無機酸沉淀蛋白質的原因可能是蛋白質顆粒脫水的結果，過量的無機酸可使沉淀在溶解）第11頁,共16頁，2024年2月25日，星期天3生物堿試劑沉淀蛋白質取2支試管，各加2ml蛋白質溶液，加1%的醋酸4~5滴，分別滴加鞣酸和苦味酸溶液數(shù)滴，觀察結果。第12頁,共16頁，2024年2月25日，星期天4.加熱沉淀蛋白質

第13頁,共16頁，2024年2月25日，星期天注意事項實驗要求各種試劑的濃度和加入量必須相當準確。作業(yè)列表說明各實驗的顏色變化，說明原因。第14頁,共16頁，2024年2月25日，星期天思考題:1.為什么蛋清可作為重金屬中毒的解毒劑2、在等電點時，蛋白質溶液為什么容易發(fā)生沉淀？3.在蛋白質的可逆沉