第第頁干凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測如何操作干凈區(qū)干凈等級劃分為：級：指高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)，如：灌裝、放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域。通常用層流操作臺（罩）來維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。B級：指無菌配制和灌裝等高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)所處的背景區(qū)域。C級和D級：指生產(chǎn)無菌藥品過程中緊要程度較次的干凈操作區(qū)。另外還有一些諸如CNC，百級、千級、之類的概念，這里不做打開討論。目錄一溫濕度二靜壓差三噪音四照度五沉降菌六浮游菌一、溫濕度標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：干凈區(qū)的溫度和相對濕度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應(yīng)。無特殊要求時(shí)，干凈區(qū)溫度為18℃～26℃，相對濕度掌控在45%～65%。有特殊要求車間依據(jù)工藝掌控。溫度察看：檢查溫濕度計(jì)是否完整，視線正對溫濕度計(jì)水平讀取顯示的數(shù)據(jù)，需要記錄的應(yīng)立刻填入表格中。濕度察看：視線正對濕度表，準(zhǔn)確讀數(shù)。需記錄的應(yīng)立刻填入表格中。需要加水的濕度計(jì)，在察看前應(yīng)檢查在蓄水腔內(nèi)是否有水，無水則需加入適量水，再察看濕度。干凈區(qū)的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。設(shè)備計(jì)量人員每年至少組織校驗(yàn)一次監(jiān)控系統(tǒng)的儀器設(shè)備。二、靜壓差標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：干凈區(qū)與非干凈區(qū)之間、不同等級干凈區(qū)之間的壓差應(yīng)不低于10帕斯卡，相同干凈度等級不同功能的操作間之間應(yīng)保持2—3帕的壓差梯度，以防止污染和交叉污染。產(chǎn)塵房間與相鄰房間呈相對負(fù)壓。干凈區(qū)的靜壓差以微壓差計(jì)顯示，每日至少記錄兩次，上午一次，下午一次。（包含干凈區(qū)與室外，不同干凈級別間及全部有壓測試時(shí)全部的空調(diào)系統(tǒng)和層流系統(tǒng)應(yīng)處于連續(xù)的正常運(yùn)行狀態(tài)。干凈室全部的門應(yīng)關(guān)閉，測試時(shí)不允許有人穿越房間。當(dāng)發(fā)現(xiàn)監(jiān)測結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍時(shí)，應(yīng)立刻檢查原因，必需時(shí)對空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整。三、噪音標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：干凈區(qū)噪音不得高于70分貝。干凈區(qū)的噪音檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等更改的時(shí)候應(yīng)在更改結(jié)束后重新檢測噪音。檢測方法:檢測點(diǎn)布置，當(dāng)面積50m2時(shí)，僅測房間中心一個(gè)點(diǎn)；當(dāng)房間面積較大時(shí)，每加添50m2加添一個(gè)點(diǎn)，測點(diǎn)距在1.2m。四、照度標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：干凈區(qū)重要操作間照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均勻度不應(yīng)小于0.7.干凈區(qū)的照度檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等更改的時(shí)候應(yīng)在更改結(jié)束后重新檢測照度。檢測要求：室內(nèi)照度測度必需在室溫已趨穩(wěn)定，光源光輸出趨于穩(wěn)定后進(jìn)行（對熒光燈必需有100h）。檢測方法:測點(diǎn)平面離地面0.85m，按間距1—2m布點(diǎn)，測點(diǎn)距墻面1m。其要求基本與干凈度的測定位置要求相同。記錄實(shí)測照度值并計(jì)算總的平均照度。照度測量一般僅測定除局部照明之外的一般照明。五、沉降菌5.1方法概述本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適合的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定干凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定干凈區(qū)的干凈度。5.2使用的儀器和設(shè)備高壓消毒鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格依照操作規(guī)程進(jìn)行。恒溫培養(yǎng)箱：必需定期對培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。培養(yǎng)皿:一般采用90mm15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min。培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。5.3測試步驟采樣：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。培養(yǎng):在30～35℃培養(yǎng)，時(shí)間為5天。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基自身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可辨別時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。5.4測試狀態(tài)沉降菌測試前，被測試干凈區(qū)的溫濕度須實(shí)現(xiàn)規(guī)定的要求，靜壓差必需掌控在規(guī)定值內(nèi)。沉降菌測試前，被測試干凈區(qū)已經(jīng)過消毒。測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必需符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。5.5測試人員測試人員必需穿著符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2個(gè)人。5.6測試時(shí)間對單向流，如級凈化房間內(nèi)及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。5.7沉降菌采樣點(diǎn)采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置：最少采樣點(diǎn)數(shù)目：沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。在滿足最少測點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2.表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目表2最少培養(yǎng)皿數(shù)5.8采樣點(diǎn)的布置工作區(qū)測試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處加添測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避開采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。5.9結(jié)果計(jì)算用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見下式：式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。結(jié)果評定：用平均菌落數(shù)推斷干凈室的空氣中的微生物。干凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必需符合所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。見表3.若某干凈區(qū)的菌落數(shù)超出評定標(biāo)準(zhǔn)，則必需對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必需合格。重新測試仍不合格，按“干凈室環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程”進(jìn)行超標(biāo)調(diào)查。5.10注意事項(xiàng)測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。采取一切措施防止人為對樣本的污染。對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作認(rèn)真的記錄。由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿后面或正面認(rèn)真察看，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊沿生長的菌落，必需時(shí)用顯微鏡辨別。采樣前應(yīng)認(rèn)真檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。六、浮游菌6.1取樣前準(zhǔn)備工作依據(jù)檢測區(qū)域的取樣點(diǎn)數(shù)，依照《培養(yǎng)基配制、滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。在超凈工作臺內(nèi)，以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出干凈區(qū)。將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)。取出逐個(gè)檢查，確認(rèn)無菌落數(shù)后即可使用。6.2采樣將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與Q人員取樣。6.3儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（90mm15mm）、培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）、恒溫培養(yǎng)箱6.4儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求浮游菌采樣器必必需有流量計(jì)和定時(shí)器。應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進(jìn)行操作。采樣器必需按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性，檢驗(yàn)項(xiàng)目有：定時(shí)器，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速，流量計(jì)。每次測試前應(yīng)先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調(diào)整流量計(jì)和定時(shí)器?？諝獠蓸恿恳罁?jù)需要選定，已知采樣器的流量（L/min）,設(shè)定采樣時(shí)間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。采樣口必需用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的料子制造，采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑，采樣管的長度應(yīng)依據(jù)測定點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。6.5測試方法測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必需嚴(yán)格消毒。采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒劑滅菌。用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。采樣口及采樣管使用前必需高溫滅菌，如用消毒劑對采樣管的外壁、內(nèi)壁進(jìn)行消毒，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應(yīng)穿著與被測干凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。6.6采樣程序儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)整采樣品縫隙高度。置采樣器于采樣點(diǎn)后，開啟采樣器、轉(zhuǎn)動定時(shí)器，依據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。6.7測試狀態(tài)浮游菌測試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。測試狀態(tài)為靜態(tài)測試，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。6.8測試人員測試人員必需穿著符和被測環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。6.9測試時(shí)間對單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。對非單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。最少采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置，最小采樣量，見下表:工作區(qū)測點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右，送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處加添測點(diǎn)。每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。對于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。采樣時(shí)，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。6.10培養(yǎng)取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5—10倍放大鏡檢查，是否遺