明確培養(yǎng)基配置原理；掌握配制培養(yǎng)基普通方法和步驟；了解高壓蒸氣滅菌基本原理、應(yīng)用范圍及高壓蒸氣滅菌操作方法；學(xué)習(xí)棉塞制作等基本操作技術(shù)。目標(biāo)要求：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第1頁

基本原理：培養(yǎng)基中含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作為凝固劑，瓊脂在96℃時(shí)溶化，40℃時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第2頁牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方

牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g水1000mlpH7.4～7.6微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第3頁試驗(yàn)器材

溶液或試劑牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂，lmol/LNaOHlmol/LHCl。儀器或其它用具試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高壓蒸氣滅菌鍋，pH試紙，棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第4頁操作步驟1．稱量

按培養(yǎng)基配方百分比依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。2．溶化

在上述燒杯中先加入少于所需要水量，用玻棒攪勻，然后在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第5頁

在未調(diào)pH前，先用pH試紙測量培養(yǎng)基原始pH，假如偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmol／LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmol／LHCl進(jìn)行調(diào)整。3．調(diào)pH微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第6頁4．過濾

用濾紙或多層紗布過濾。普通無特殊要求情況下，這一步能夠省去（本試驗(yàn)勿需過濾）。

5．分裝

按試驗(yàn)要求，可將配制培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝試管，其裝量不超出管高1／5，滅菌后制成斜面。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第7頁6．加塞

在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并確保有良好通氣性能。7．包扎

在棉塞外包一層牛皮紙，以預(yù)防滅菌時(shí)冷凝水潤濕棉塞，其外再用繩子扎好。注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第8頁8．滅菌

將上述培養(yǎng)基以0.103MPa121℃，20min高壓蒸氣滅菌。

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第9頁二、馬丁氏培養(yǎng)基制備

基本原理：是一個(gè)用來分離真菌選擇性培養(yǎng)基。此培養(yǎng)基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉紅和鏈霉素等組成。其中葡萄糖作為碳源，蛋白胨作為氮源，KH2PO4、MgSO4·7H2O作為無機(jī)鹽，為微生物提供鉀、磷、鎂離子。這種培養(yǎng)基特點(diǎn)是培養(yǎng)基中加人孟加拉紅和鏈霉素能有效抑制細(xì)菌和放線菌生長，而對真菌無抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上能夠得到優(yōu)勢生長，從而到達(dá)分離真菌目標(biāo)。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第10頁馬丁氏培養(yǎng)基配方KH2PO41gMgSO4·7H2O0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g瓊脂15~20g水1000mlpH自然臨用時(shí)以無菌操作在100ml培養(yǎng)基中加入l％鏈霉素0.3ml，使其終濃度為30μg/ml。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第11頁試驗(yàn)器材

溶液或試劑

KH2PO4，MgSO4·7H2O，蛋白胨，葡萄糖，瓊脂，鏈霉素（1％水溶液）。

儀器或其它用具

試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高蒸氣滅菌鍋等。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第12頁操作步驟稱量溶化加塞包扎滅菌微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第13頁三、高壓蒸氣滅菌

基本原理：

高壓蒸氣滅菌是將待滅菌物品放在一個(gè)密閉加熱滅菌鍋內(nèi)，經(jīng)過加熱，使滅菌鍋隔套間水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)因?yàn)檎魵獠荒芤绯?，而增加了滅菌器?nèi)壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃溫度。造成菌體蛋白質(zhì)凝固變性而到達(dá)滅菌目標(biāo)。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第14頁在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣排除是否完全極為主要，因?yàn)榭諝馀蛎泬捍笥谒魵馀蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸氣溫度低于飽和蒸氣溫度。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第15頁試驗(yàn)器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基馬丁氏培養(yǎng)基培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、移液管手提式高壓蒸氣滅菌鍋等。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第16頁操作步驟1.將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量水，使水面與三角擱架相平為宜。2.放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。3.加蓋，并將蓋上排氣軟管插入內(nèi)層鍋排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱方式同時(shí)旋緊相正確兩個(gè)螺栓。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基制備和消毒滅菌第17頁4.用煤氣加熱，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需