第第頁土壤β-木糖苷酶（Solid-β-xylosidase,S-β-XYS）測定試劑盒說明書土壤β木糖苷酶（Solidβxylosidase,SβXYS）測定試劑盒說明書微量法100T/48S注意：正式測定之前選擇23個預期差異大的樣本做預測定。測定意義：β木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶，產物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價值。測定原理：SβXYS催化對硝基苯酚βD木糖苷產生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算SβXYS活性。自備實驗用品及儀器：天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。試劑組成和配制：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。粗酶液提?。杭s0.1g鮮土或風干土樣，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測。測定操作表：1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至405nm。2、操作表對照管測定管樣本（μL）4040試劑一（μL）10試劑二（μL）8070混勻，45℃水浴20min試劑三（μL）8080混勻，靜置5min，405nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管A對照管。每個測定管設一個對照管。β木糖苷酶活性計算公式：a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。酶活定義：每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。β木糖苷酶活性（μmol/d/g土樣）=(ΔA0.0011)÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=16.33×(ΔA0.0011)÷WV樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min=1/72d；b.用96孔板測定的計算公式如下標準曲線：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA酶活定義：每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。β木糖苷酶活性（μmol/d/g土樣）=(ΔA0.0011)÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=32.66×(ΔA0.0011)÷WV樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min=1/72