微生物檢驗概述

考點：

臨床微生物學(xué)檢驗的目的與要求

標(biāo)本采集與運(yùn)送

微生物學(xué)檢查方法

臨床微生物實驗室安全措施和質(zhì)量保證

【內(nèi)容講解】

一、臨床微生物學(xué)檢驗的目的

1.為臨床感染性疾病的診斷提供病原學(xué)依據(jù)。

2.為臨床感染性疾病的治療提供參考用藥的信息。

3.為醫(yī)院感染提供病原微生物及其耐藥性動態(tài)信息.

4.改進(jìn)或更新臨床微生物學(xué)檢驗的方法。

二、臨床微生物學(xué)檢驗的要求

1.快速、準(zhǔn)確地提出檢驗報告。

2.檢驗人員必須有較豐富的微生物學(xué)基礎(chǔ)知識和熟練、正確的操作技能，必須養(yǎng)成有菌觀點和無菌操

作的習(xí)慣。

3.臨床微生物學(xué)檢驗必須進(jìn)行全面質(zhì)量控制，并參加和接受質(zhì)量控制考核。

4.重視實驗室消毒滅菌工作。

三、診斷試驗的選擇原則

1.選擇有鑒定價值的試驗

要對兩種細(xì)菌進(jìn)行鑒定，須選擇一項兩種菌呈現(xiàn)截然不同結(jié)果的試驗，即一種菌呈現(xiàn)陽性(陽性反應(yīng)

的菌株陽性率須大于90%)，另一種菌為陰性(陰性反應(yīng)的菌株陽性率應(yīng)小于10%),這項試驗才有鑒定價

值。否則，就沒有鑒定價值。

2.選擇簡易、快速、方便的試驗

(1)鑒定一種細(xì)菌可能有多種特異的方法，沒有必要逐一進(jìn)行試驗，只選擇其中一或兩種達(dá)到目的即

可，多選無意義。如金黃色葡萄球菌凝固酶試驗、耐熱DNA酶試驗、甘露醇分解試驗均陽性，只選較簡單

的凝固酶試驗就足夠了。

(2)選擇操作簡便、快速的方法。

(3)選用復(fù)合培養(yǎng)基，一次操作可同時看幾個生化反應(yīng)，如克氏雙糖鐵(KIA),動力靛基質(zhì)胭酶(MIU)

等。

3.綜合考慮試驗的敏感性和特異性

敏感性=所有陽性結(jié)果數(shù)/所有感染病人數(shù)，試驗敏感性越高，假陰性結(jié)果就越少。特異性=陰性結(jié)果

總數(shù)/未感染病人數(shù)，特異性越高，假陽性結(jié)果越少。試驗的敏感性和特異性是相互聯(lián)系的，試驗的敏感

性增加，會使特異性下降，反之亦然。

四、標(biāo)本的采集和運(yùn)送

標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結(jié)果的正誤，是確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提。

(-)標(biāo)本采集的一般原則

1.早期采集：病程早期、急性期或癥狀典型時，而且必須在使用抗生素或其他抗菌藥物之前采集。

2.無菌采集：應(yīng)無外源性污染。

在采集無菌標(biāo)本時，應(yīng)注意對局部及周圍皮膚的消毒；對于與外界相通的腔道，應(yīng)由底部取活組織檢

查；對于從正常菌群寄生部位（如口腔）采集的標(biāo)本，應(yīng)明確檢查的目的菌，在進(jìn)行分離培養(yǎng)時，采用特殊

選擇性培養(yǎng)基。

3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

4.采集適量標(biāo)本：采集量不應(yīng)過少，而且要有代表性，同時有些標(biāo)本還要注意在不同時間采集不同部

位標(biāo)本。

5.安全采集：采集標(biāo)本時不僅要防止皮膚和黏膜正常菌群對標(biāo)本的污染。同時也要注意安全，防止傳

播和自身感染。

（二）標(biāo)本的處理

一些對環(huán)境敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢，而其他所

有的標(biāo)本采集后最好在2h之內(nèi)送到實驗室。若不能及時送檢，標(biāo)本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存，如尸檢組織、

支氣管洗液、心包液、痰、尿等標(biāo)本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中。腦脊液、滑膜液等則要在25℃保存。一般情況

下，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時間不應(yīng)超過24h。

病人標(biāo)本中可能含有大量致病菌，不管標(biāo)本運(yùn)送距離遠(yuǎn)近，都必須注意安全防護(hù)。標(biāo)本切勿污染容器

的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出。對于烈性傳染病標(biāo)本運(yùn)送時更要特別

嚴(yán)格，必須按規(guī)定包裝，由專人運(yùn)送。

厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送。

五、微生物學(xué)檢查

微生物學(xué)檢查方法

方法鑒定類型速度

直接鏡檢初步診斷5?lOmin

免疫熒光（直接法）快速診斷1?2h

乳膠凝集快速診斷15~30min

對流免疫電泳快速診斷2h

氣-液相色譜鑒定1.5?2h

DNA探針快速診斷、鑒定1?3天

PCR快速診斷數(shù)小時

微量鑒定系統(tǒng)鑒定3?6h

常規(guī)法確定診斷數(shù)天或以上

標(biāo)本

微

生

物

學(xué)

檢

驗

鑒

定

程

序

微生物學(xué)檢驗技術(shù)：

1.形態(tài)學(xué)檢查

2.分離培養(yǎng)技術(shù)

3.生物化學(xué)試驗

4.血清學(xué)試驗

5.動物試驗

6.免疫檢測技術(shù)

7.發(fā)光分析技術(shù)

8.宜試驗（檢測內(nèi)毒素）

9.分子生物學(xué)技術(shù)

免疫檢測技術(shù)：

微生物學(xué)中常用的免疫檢測技術(shù)包括

凝集反應(yīng)

沉淀反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗

免疫熒光技術(shù)

前免疫測定

皮膚反應(yīng)

發(fā)光分析技術(shù)：

依賴酶或化學(xué)反應(yīng)釋放能量引起發(fā)光物質(zhì)（如魯米諾、熒光素等）發(fā)光的檢測方法。

具有操作簡便、快速、敏感度高、無污染特點。

根據(jù)發(fā)光原理，主要分為生物及化學(xué)發(fā)光兩種方法。

邕試驗（檢測內(nèi)毒素）：

基本原理是內(nèi)毒素在堿性金屬離子存在下激活賞試劑中凝固酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂?，凝固酶使存在于賞試

劑中的凝固蛋白原生成凝固蛋白，產(chǎn)生凝膠。凝膠的形成速度及其堅固程度與內(nèi)毒素濃度有關(guān)。邕試驗陽

性表明有革蘭染色陰性菌或內(nèi)毒素血癥,也可用于生物制品或注射液的內(nèi)毒素污染檢測。

分子生物學(xué)技術(shù)：

對生物體的基因組DNA片段及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，進(jìn)而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷?；?/p>

因診斷技術(shù)可克服病原微生物的傳統(tǒng)檢測方法靈敏度低、特異性低及速度慢等不足之處，并可用于流行病

學(xué)的大量現(xiàn)場篩查工作。

六、臨床微生物實驗室安全措施和質(zhì)量保證

（-）實驗室感染來源

1.在檢驗操作過程中可能產(chǎn)生危險的微生物氣溶膠。

2.接觸感染材料或使之附著于衣服帶出室外以及其他偶然事故如菌液滴落于物體表面，注射時不慎刺

破皮膚等。

（二）感染性廢棄物的處理

1.任何污染材料未經(jīng)消毒不能拿出實驗室。

2.液體廢棄物必須收集在防漏、未破的容器內(nèi)，經(jīng)高濃度的化學(xué)消毒劑處理。

3.對剩余標(biāo)本、接種過的培養(yǎng)基、菌種等丟棄前均需適當(dāng)消毒。

4.動物房的廢物在處理前及動物籠被清洗前均需消毒，最好經(jīng)高壓蒸氣滅菌。

5.對于任何有污染的銳器如針頭、注射器、玻片等在處理前不要用手接觸。

（三）微生物實驗室的室內(nèi)質(zhì)控

1.對細(xì)菌檢驗人員的要求；

2.操作手冊；

3.儀器設(shè)備的功能監(jiān)測；

4.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制；

5.試劑、染色液以及抗生素的質(zhì)量控制；

6.標(biāo)本檢驗的質(zhì)量控制；

7.標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存及室內(nèi)質(zhì)量的全面控制。

標(biāo)本采集的一般原則有

A、早期采集

B、無菌采集

C、根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

D、采集適量標(biāo)本

E、安全采集

2[答疑編號502383060101]

【正確答案】ABCDE

關(guān)于標(biāo)本處理的說法錯誤的是

A、標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢

B、痰、尿等標(biāo)本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中