微生物的分離純化目錄/Contents01菌種分離與純化技術(shù)簡介物理消毒滅菌法稀釋涂布平板法0203平板劃線分離法菌種分離與純化技術(shù)簡介

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化,微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落,通常是由一個細(xì)胞繁殖而成的集合體。01菌種分離與純化技術(shù)簡介貼標(biāo)簽：打開平皿包扎紙，在平皿上蓋邊緣貼好標(biāo)簽紙或者用記號筆注明菌種、接種時間、操作者等信息。11bcda制備平板倒平皿：左手持平皿，開口位置過火，右手持三角瓶，向平皿內(nèi)傾注15-20mL培養(yǎng)基。取三角瓶：在酒精燈無菌區(qū)用右手將棉塞擰松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精燈火焰旁。凝固：倒好的平皿輕輕晃動一下，置于水平操作臺上凝固，凝固中不能移動。02稀釋涂布平板法取6支盛有9mL無菌水的試管排列于試管架上，依次標(biāo)上10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6字樣。以1ml無菌吸管按無菌操作從樣品管中吸取1mL菌液于10-1試管中，然后用另一吸管在10-1試管中來回吹吸三次，使其混合均勻，制成10-1稀釋液。再用此吸管從10-1管中吸取1mL稀釋液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀釋液。梯度稀釋02稀釋涂布平板法接種：用一支1mL無菌吸管從高稀釋度開始分別吸取各個低度稀釋液0.1mL至相應(yīng)的無菌平皿內(nèi)。11bcda接種涂布涂布：左手少許打開皿蓋，用涂布棒把培養(yǎng)基上的菌懸液均勻涂布開。將涂抹好的平板放于操作臺上20-30min，使菌液滲入培養(yǎng)基內(nèi)。燒涂布棒：右手拿涂布棒，在酒精燈上灼燒并冷卻。涂布棒滅菌：灼燒涂布棒滅菌。02稀釋涂布平板法培養(yǎng)b.清理臺面：整理試驗臺面，實(shí)驗器具滅菌、清洗歸位。a.培養(yǎng)：將接種好的平皿按照微生物最佳培養(yǎng)溫度倒置放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。02稀釋涂布平板法挑取單菌落02稀釋涂布平板法將培養(yǎng)后長出的單個菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述3種培養(yǎng)基斜面上,分別置于28℃和37℃溫室培養(yǎng)。若發(fā)現(xiàn)有雜菌，需再一次進(jìn)行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。貼標(biāo)簽：打開平皿包扎紙，在平皿上蓋邊緣貼好標(biāo)簽紙或者用記號筆注明菌種、接種時間、操作者等信息。11bcda制備平板倒平皿：左手持平皿，開口位置過火，右手持三角瓶，向平皿內(nèi)傾注15-20mL培養(yǎng)基。取三角瓶：在酒精燈無菌區(qū)用右手將棉塞擰松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精燈火焰旁。凝固：倒好的平皿輕輕晃動一下，置于水平操作臺上凝固，凝固中不能移動。02平板劃線分離法取菌：用右手的小指和手掌取下管塞，試管口緩緩過火滅菌2-3次，接種環(huán)伸入試管，先使環(huán)接觸管內(nèi)壁，冷卻。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。將試管口通過火焰，并塞上棉塞。cb接種環(huán)滅菌：右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分均灼燒滅菌，重復(fù)灼燒2-3次。a準(zhǔn)備菌懸液：將菌懸液試管搖勻，擰松試管棉塞。平板劃線03平板劃線分離法e接種環(huán)滅菌：在酒精燈火焰上再次灼燒接種環(huán)滅菌。d平板劃線：左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌液的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，進(jìn)行連續(xù)或分區(qū)劃線，蓋上皿蓋。平板劃線03平板劃線分離法圖4-15平板劃線法示意圖培養(yǎng)b.清理臺面：整理試驗臺面，實(shí)驗器具滅菌、清洗歸位。a.培養(yǎng)：將接種好的平皿按照微生物最佳培養(yǎng)溫度倒置放于電熱恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。03平板劃線分離法挑取單菌落03平板劃線分離法將培養(yǎng)后長出的單個菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述3種培養(yǎng)基