抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（藥敏試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)三內(nèi)容簡(jiǎn)介藥物選擇及報(bào)告K-B法操作方法報(bào)告方式影響因素稀釋法Etest聯(lián)合藥敏試驗(yàn)2010年CLSI更新內(nèi)容簡(jiǎn)介目的指導(dǎo)臨床醫(yī)生針對(duì)各類臨床感染患者選擇最佳抗菌藥物一定區(qū)域內(nèi)積累對(duì)公共衛(wèi)生有關(guān)的重要耐藥的微生物流行病學(xué)資料根據(jù)細(xì)菌對(duì)藥物敏感譜進(jìn)行菌種鑒定藥敏試驗(yàn)原理把含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試細(xì)菌的瓊脂平板上紙片中藥物吸收瓊脂水分溶解后通過(guò)彌散作用形成遞減的濃度梯度紙片擴(kuò)散法紙片周圍一定距離范圍內(nèi)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)受抑制，從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即抑菌環(huán)。抑菌環(huán)大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度抑菌環(huán)大小除與細(xì)菌的敏感性有關(guān)外還與其它諸因素相關(guān)。定量測(cè)定抗菌藥物活性抗菌藥物與肉湯或瓊脂培養(yǎng)基混合稀釋后種入試驗(yàn)細(xì)菌，孵育過(guò)夜。以能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC）將MIC與機(jī)體血清或體液中可獲得藥物濃度相比較來(lái)確定恰當(dāng)?shù)呐R床療效稀釋法

MIC的對(duì)數(shù)與抑菌環(huán)直徑關(guān)系——近似線性負(fù)相關(guān)

菌種代表藥物苯唑西林葡萄球菌屬所有β-內(nèi)酰胺類包括酶抑制劑復(fù)合藥和碳青霉烯類四環(huán)素除葡萄球菌和不動(dòng)桿菌以外的所有菌屬多西環(huán)素、米諾環(huán)素、金霉素、地美環(huán)素、土霉素、美他環(huán)素紅霉素革蘭陽(yáng)性球菌羅紅霉素、克拉霉素、阿齊霉素、地紅霉素藥敏試驗(yàn)中常用試驗(yàn)藥及其代表的藥物所有菌屬試驗(yàn)藥物林可霉素克林霉素青霉素G葡萄球菌屬淋病奈瑟菌苯氧甲基青霉素、苯氧乙基青霉素、氨芐西林、阿莫西林、巴氨西林、氨環(huán)己西林、海他西林、羧芐西林、美洛西林、阿洛西林、替卡西林、哌拉西林頭孢噻吩腸桿菌科

頭孢匹林、頭孢拉啶、頭孢氨芐、頭孢克羅、頭孢羥氨芐氨芐西林所有菌屬阿莫西林、巴氨西林、氨環(huán)己西林、海他西林磺胺異惡唑所有菌屬所有磺胺類萘啶酸（敏感）腸桿菌科所有喹諾酮類敏感頭孢噻吩/頭孢唑啉（敏感）腸桿菌科所有頭孢菌素敏感萬(wàn)古霉素革蘭陽(yáng)性桿菌替考拉寧氨芐西林腸球菌屬青霉素試驗(yàn)方法—紙片擴(kuò)散法改良Kirby-Bauer法(K-B法)培養(yǎng)基非苛氧菌用Mueller-Hinton（M-H）瓊脂藥物紙片直徑6mm紙片，每片吸水量約20μl菌液比濁管0.5號(hào)麥?zhǔn)希∕cFarland）標(biāo)準(zhǔn)比濁管，菌液濃度為1.5×108/ml質(zhì)控菌株大腸桿菌試驗(yàn)材料操作方法菌液制備挑取已純化的4~5個(gè)菌落制備菌懸液

挑選瓊脂平板上3~5個(gè)形態(tài)特征一致的菌落，用接種環(huán)接觸每個(gè)菌落頂部轉(zhuǎn)移至4~5mL適宜的液體培養(yǎng)基中（如胰酶消化大豆胨肉湯）生長(zhǎng)法

置35℃孵育2-6h用無(wú)菌生理鹽水或肉湯校正，使其濁度至0.5號(hào)麥?zhǔn)瞎?/p>

從孵育16-24h的非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上用接種環(huán)挑取單個(gè)新鮮菌落，懸浮于生理鹽水或肉湯中震蕩混勻與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景調(diào)整其濁度相當(dāng)于0.5號(hào)麥?zhǔn)瞎?。直接調(diào)制菌懸液法生長(zhǎng)法的簡(jiǎn)便替代法用無(wú)菌棉拭子蘸取菌液在管壁上方旋轉(zhuǎn)擠壓幾次去掉過(guò)多水分用拭子涂布整個(gè)培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60°最后沿平皿周邊繞兩圈以保證涂布均勻平板接種制備好的菌液必須在15min內(nèi)使用貼紙片前可將培養(yǎng)皿蓋半開(kāi)3-5min以使表面過(guò)多水分被吸收但不超過(guò)15min將接種好的平板敞開(kāi)蓋子倒置在室溫下干燥3-5min使平板上的水分被瓊脂完全吸收。用鑷子取紙片一張貼在瓊脂平板表面，輕壓使其與瓊脂完全接觸。紙片中心間距≥24mm,紙片中心距平皿邊緣≥15mm。直徑90mm的平板最好貼6張。加貼紙片15min內(nèi)將平板倒置放溫箱孵育。紙片一旦貼下就不可再挪動(dòng)位置，因紙片中的藥物已擴(kuò)散到瓊脂中。需要時(shí)應(yīng)在適當(dāng)?shù)牡胤劫N新紙片注意

必須用35℃孵箱（苛氧菌藥敏平板應(yīng)置于5%CO2環(huán)境）箱內(nèi)平板最好單獨(dú)擺放，不超過(guò)兩個(gè)疊在一起，否則中間的平板因達(dá)不到孵箱溫度而產(chǎn)生預(yù)擴(kuò)散的作用。孵育平板孵育規(guī)定時(shí)間（一般為18-24h）后讀取結(jié)果，葡萄球菌和腸球菌必須孵育24h以檢測(cè)苯唑西林和萬(wàn)古霉素的耐藥性。孵育16-18h后檢查每一塊平板如果劃線滿意，接種物準(zhǔn)確無(wú)誤，抑菌圈應(yīng)為正圓形，菌落應(yīng)融合生長(zhǎng)出現(xiàn)明顯單個(gè)菌落表示接種量太少重復(fù)試驗(yàn)可用直尺或游標(biāo)卡尺，讀取最接近的整毫米數(shù)測(cè)量時(shí)應(yīng)將尺子置于倒置的平板上，置平板在黑色無(wú)反射光背景上方幾厘米處并用反射光照明。含血的藥敏瓊脂應(yīng)移去平板蓋后用反射光照明平板，于表面上方測(cè)量抑菌環(huán)。抑菌環(huán)直徑測(cè)量測(cè)量抑菌環(huán)直徑時(shí)抑菌環(huán)邊緣以見(jiàn)不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限，測(cè)量的是完全抑制的區(qū)域直徑（包括紙片直徑）按抑菌環(huán)直徑判斷細(xì)菌的敏感性，應(yīng)依據(jù)CLSI的解釋標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告細(xì)菌對(duì)測(cè)試藥物敏感、中介、耐藥。在清楚抑菌環(huán)內(nèi)有獨(dú)立的菌落生長(zhǎng)提示接種的菌落不純，需要重新分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)抗菌藥物選擇出的高頻突變耐藥株結(jié)果判斷變形桿菌屬的菌株可擴(kuò)散到某些抗菌藥物的抑菌環(huán)內(nèi)，故在明顯抑菌環(huán)內(nèi)有薄膜狀爬行生長(zhǎng)可以忽略。鏈球菌應(yīng)檢測(cè)其生長(zhǎng)抑制圈而非溶血抑制圈。對(duì)于甲氧芐啶和磺胺，拮抗物使細(xì)菌輕微生長(zhǎng)故抑菌圈直徑應(yīng)忽略細(xì)微生長(zhǎng)的菌落。來(lái)自血瓊脂菌落可能帶有足夠的甲氧芐啶或磺胺拮抗物，在SXT抑菌圈內(nèi)細(xì)菌可沿敏感菌株周圍產(chǎn)生模糊生長(zhǎng)。檢測(cè)苯唑西林和萬(wàn)古霉素對(duì)葡萄球菌和腸球菌的抑菌環(huán)需要用透射光（平板對(duì)著光源），抑菌環(huán)的邊緣用放大鏡才可發(fā)現(xiàn)小菌落可以忽略。在紙片周圍的抑菌環(huán)內(nèi)有任何可辨的菌落或生長(zhǎng)薄膜（包括針尖樣菌落）提示耐藥。報(bào)告方式敏感

菌株能被使用推薦劑量在感染部位達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制常規(guī)報(bào)告中介被測(cè)菌株對(duì)該藥物的MIC接近于血液、組織中通?？蛇_(dá)到的濃度而治療反應(yīng)率可能低于敏感株。意味著可通過(guò)提高劑量或在藥物被生理濃集的部位發(fā)揮臨床效力。被測(cè)菌不能被該抗菌藥物的常用劑量在組織或血液內(nèi)達(dá)到的濃度所抑制其MIC落在某些范圍內(nèi)提示該菌可能存在特定的耐藥機(jī)制（如β-內(nèi)酰胺酶）而且治療研究表明其臨床療效不可靠。耐藥當(dāng)藥物對(duì)菌株的MIC高于或抑菌圈直徑低于敏感折點(diǎn)時(shí)報(bào)告為非敏感。非敏感并不意味著菌株攜帶某種耐藥機(jī)制。由于耐藥菌株缺失或稀少因而僅確立了敏感性解釋標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于“不敏感”菌株，鑒定和藥敏結(jié)果需再次確認(rèn)。不敏感（NS）M100-S20定義解釋性報(bào)告

某些菌種或菌群對(duì)抗菌藥物的選擇和報(bào)告有特殊要求大腸埃希菌和克雷伯菌屬中產(chǎn)ESBLs菌株應(yīng)報(bào)告對(duì)所有青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南耐藥。對(duì)沙門(mén)菌屬和志賀菌屬的分離株只有氨芐西林、一種喹諾酮類藥物和磺胺異惡唑/甲氧芐啶可用于常規(guī)試驗(yàn)和報(bào)告第一、二代頭孢菌素和氨基糖甙類藥物體外可能有活性但臨床無(wú)效故不應(yīng)報(bào)告敏感沙門(mén)菌屬的腸道外分離株應(yīng)測(cè)試并報(bào)告氯霉素和一種三代頭孢菌素的敏感性腸球菌對(duì)頭孢菌素類、氨基糖甙類、磺胺甲惡唑/甲氧芐啶和克林霉素在體外可能有活性但臨床耐藥，不能報(bào)告敏感。MRS應(yīng)報(bào)告耐受所有β-內(nèi)酰胺類藥物（包括其復(fù)合藥）從威脅生命的感染（腦膜炎、菌血癥、會(huì)厭炎和面部蜂窩組織炎）患者的血和腦脊液中分離的流感嗜血桿菌常規(guī)應(yīng)報(bào)告氨芐西林、一種三代頭孢菌素和氯霉素的藥敏結(jié)果?！熬妗?/p>

下列抗生素/微生物組合，在體外可出現(xiàn)活性但在臨床上無(wú)效，不應(yīng)報(bào)告敏感細(xì)菌不作為敏感報(bào)告的抗微生物藥產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌青霉素類、頭孢菌素類和氨曲南沙門(mén)菌屬、志賀菌屬Ⅰ、Ⅱ代頭孢菌素、頭霉素和氨基糖苷類苯唑西林耐藥葡萄球菌屬所有青霉素類，頭孢菌素類、β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑、碳青霉烯類腸球菌屬氨基糖苷類(除外高濃度)、頭