《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》關鍵點

中華醫(yī)學會檢驗中心聯(lián)絡國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第1頁一、

特點概述1．《全國艾滋病檢測技術規(guī)范（年版）》是參考國際標準ISO/DIS15189-、ISO/DIS15190-和GuidelinesforUsingHIVTestingTechnologiesinSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/.16UNAIDS/01.22EISBN9713-92-063-7對〈全國艾滋病檢測技術規(guī)范(試行)〉進行全方面修訂而成，與國際檢測技術和策略緊密接軌。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第2頁2.對原有章節(jié)修改和完善：樣品采集和處理，HIV抗體檢測（目標、關鍵點、方法及結(jié)果匯報）,HIVP24抗原檢測（方法、結(jié)果匯報和解釋），艾滋病檢測試驗室安全防護等。3.配合VCT(自愿咨詢檢測)和當前防治工作需求，新增了以下內(nèi)容:HIV抗體檢測替換策略，嬰幼兒HIV感染診療，HIVRNA定量測定（病毒載量測定），CD4+/CD8+T淋巴細胞檢測，職業(yè)暴露預防和補充試驗室意外事故緊急處理辦法。4.按技術規(guī)范要求，對每章內(nèi)容均標明了“范圍”和“規(guī)范性引用文件”。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第3頁一、

對原有章節(jié)修改和完善：1.樣品采集和處理

（1）要求了樣品采集和處理適用范圍：用于艾滋病病毒（HIV）檢測血清、血漿和全血樣品采集和處理方法，適合用于HIV抗體檢測、抗原檢測、核酸檢測、CD4+/CD8+T淋巴細胞測定和HIV分離培養(yǎng)。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第4頁（2）應依據(jù)試驗要求選取適當抗凝劑：如CD4+/CD8+T淋巴細胞測定可選取K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選取K3EDTA或枸櫞酸鈉。（3）樣品保留

用于CD4+/CD8+T淋巴細胞測定樣品不能長久保留，樣品采集時間超出48h則不可檢測。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第5頁（4）樣品運輸應采取WHO提出三級包裝系統(tǒng)：第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應置于帶蓋試管內(nèi)，試管上應有顯著標識，標明樣品編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應附有送檢單，送檢單應與樣品分開放置。第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，能夠裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋容器內(nèi)，容器材料要易于消毒處理。第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第6頁（5）樣品接收打開標本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應在生物安全柜中戴手套進行。同時應戴口罩、防護眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。假如污染過重或者認為樣品不能被接收，則應將樣品安全廢棄。并要將樣品情況馬上通知送樣人。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第7頁2．HIV抗體檢測（1）HIV抗體檢測要求了HIV抗體檢測方法、檢測程序、檢測匯報及檢測策略；其適用范圍為：各級各類醫(yī)療機構(gòu)、疾病預防控制機構(gòu)、檢驗檢疫機構(gòu)、采供血機構(gòu)及衛(wèi)生保健機構(gòu)。可作為對HIV感染者/AIDS病人診療、匯報和處理試驗室依據(jù)。并要求了規(guī)范性引用文件。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第8頁（2）HIV抗體檢測試驗室應符合《全國艾滋病檢測工作規(guī)范（1997年版）》中對檢測試驗室人員、建筑設施和設備等條件要求。應符合《試驗室生物安全通用要求》（GB19489-）對II級生物安全試驗室（BSL-2）各項要求。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第9頁（3）HIV抗體檢測目標和關鍵點HIV抗體檢測目標：HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診療、血液篩查。以監(jiān)測為目標檢測是為了解不一樣人群HIV感染率及其改變趨勢而進行檢測，檢測人群包含各類高危人群和普通人群。以診療為目標檢測是為了確定個體HIV感染情況而進行檢測，包含臨床檢測和自愿咨詢檢測、術前檢測、依據(jù)特殊需要進行體檢等。以血液篩查為目標檢測是為了預防輸血傳輸HIV而進行檢測，包含獻血員篩查和原料血漿篩查。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第10頁HIV抗體檢測關鍵點：篩查試驗陽性不能出陽性匯報。嚴格恪守試驗室標準操作程序（SOP）。嚴格按照試劑盒說明書操作。注意預防樣品間交叉污染。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第11頁（4）HIV抗體檢測篩查方法慣用篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）快速檢測（RT）及其它檢測 伴隨對HIV感染者和AIDS病人抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療進展，及對無癥狀HIV感染者提供自愿咨詢檢測（VCT）迫切需求，簡便、快速HIV檢測方法被廣泛應用。慣用主要有以下幾個：全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第12頁①明膠顆粒凝集試驗（PA）：PA是HIV血清抗體檢測一個簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（普通為室溫）。當待檢樣品含有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應，依據(jù)明膠顆粒在孔中凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊同意；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏PA試劑（SERODIA-HIV-1/2）可初步區(qū)分HIV-1型和HIV-2型，當前我國還未引進。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第13頁②斑點EIA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應時間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第14頁③斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：與斑點EIA相同，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)分在于不用酶標識抗體，而代之以紅色膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾（或?qū)游觯┓ㄗ鳛橄礈旆椒?。試劑穩(wěn)定，可室溫長久保留。試驗時不需任何設備，快速、簡便、特異性很好，敏感性約相當于中度敏感ELISA，適合用于應急檢測、門診急診個體檢測。當前已經(jīng)有在國內(nèi)被SFDA同意注冊國外進口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品。普通可在10

30min內(nèi)判讀結(jié)果。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第15頁④艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可防止靜脈穿刺。但樣品預處理時間長且售價較高。以唾液為樣品測定HIV抗體ELISA、免疫印跡法（WB）試劑美國FDA已同意。⑤其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測（HomeAccessSystem）等。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第16頁尿液HIV抗體檢測1996年美國FDA首次同意HIV-1尿液ELISA試劑，我國也正在研制尿液HIV抗體檢測試劑。主要適合用于靜脈注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群大面積流行病學調(diào)查、監(jiān)測。篩查陽性者仍需采血做確認試驗才能確定。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第17頁（5）HIV抗體篩查檢測中初篩和復檢試驗檢測和匯報方法

依據(jù)檢測目標選取符合要求篩查試劑對樣品進行初篩和重復檢測（復檢）。初篩試驗：以第三代ELISA（雙抗原夾心法）為例。

備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清后，按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護要求進行篩查檢測。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第18頁試驗結(jié)果①陰性對照（NC），HIV-1陽性對照（PC1），HIV-2陽性對照（PC2）NC必須＜0.25方可用，排除NC≥0.25值，計算NC平均值。NC界限范圍：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。②符合以下條件試驗成立：兩個以上NC可用（＜0.25）。PC1-NC均值≥0.4，PC2-NC均值≥0.4③Cutoff值=陰性對照均值+0.100小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第19頁4）匯報：對HIV抗體篩查試驗，呈陰性反應者可出具“HIV抗體陰性”匯報（可用附表1）；對初篩試驗呈陽性反應者不能出陽性匯報，可出具“HIV抗體待復查”匯報（附表1）。如需送上級試驗室進行復測或確認，需要填寫“HIV抗體復測送檢單”（附表2），經(jīng)1名檢驗人員和1名含有中級以上技術職稱人員審核簽字。送當?shù)匕滩『Y查中心試驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認試驗室，或在本試驗室復檢后直接送確認試驗室。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第20頁復檢試驗：對初篩呈陽性反應樣品用原有試劑和另外一個不一樣原理或不一樣廠家篩查試劑重復檢測。如兩種試劑復測均呈陰性反應，則匯報HIV抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確認試驗室進行確認。

對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第21頁（6）HIV抗體確認試驗結(jié)果匯報確認試驗由確認試驗室依據(jù)檢測結(jié)果出具“HIV抗體確認檢測匯報單”（附表3），匯報HIV抗體陽性（+）、HIV抗體陰性（-）及HIV抗體不確定（±）。符合HIV-1抗體陽性判斷標準，匯報“HIV-1抗體陽性（+）”，并按要求做好檢測后咨詢、保密和疫情匯報工作。符合HIV抗體陰性判斷標準，匯報“HIV抗體陰性（-）”。假如近期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀等情況，為排除因“窗口期”而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，提議高危行為后3個月時再做抗體檢測。也可進行HIV-1P24抗原或HIV核酸檢測，作為輔助診療。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第22頁符合HIV抗體不確定判斷標準，匯報“HIV抗體不確定（±）”，在備注中應注明“3個月后復檢”，同時進行以下處理：1)隨訪復檢：每3個月隨訪復檢1次，連續(xù)2次，共6個月。假如檢測時暴露時間已超出3個月，則在3個月后隨訪1次即可。將前后2份樣品同時檢測，仍呈不確定或陰性則匯報HIV抗體陰性，假如在隨訪期間發(fā)生帶型進展，符合HIV抗體陽性判定標準則匯報HIV-1或HIV-2抗體陽性。2)必要時可做HIV-1P24抗原或HIV核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診療依據(jù)，確認匯報要依據(jù)血清學隨訪結(jié)果。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第23頁省艾滋病確認中心試驗室難以確認樣品，送國家艾滋病參比試驗室確認。同一受檢對象樣品在不一樣試驗室得到不一致確實認結(jié)果時，由國家艾滋病參比試驗室和艾滋病確認試驗室審評及技術指導教授組給予仲裁。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第24頁3．HIVP24抗原檢測要求了P24抗原檢測方法、適用范圍和規(guī)范性引用文件。（1）適用范圍：HIV-1抗體不確定或窗口期輔助診療。HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期輔助判別診療。第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應，但HIV-1抗體確認陰性者輔助診療。監(jiān)測病程進展和抗病毒治療效果。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第25頁（2）HIVP24抗原檢測方法P24抗原檢測通常是采取ELISA夾心法，已知抗體包被固相反應板孔底，加入待測血清，若血清中含有P24抗標準與包被抗體形成抗原-抗體復合物，再加入酶（HRP）標識HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標儀上讀結(jié)果。為了提升檢測血清中P24抗原敏感性，需先將血清中免疫復合物解離后再進行測定，當前已發(fā)展了ICDP24抗原（immun-complexdisassociate，免疫復合物解離，ICD）測定試劑，用于HIV-1P24抗原測定。即使將復合物解離，敏感性提升，也只能在大約50%無癥狀感染者中檢出P24抗原。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第26頁4）結(jié)果匯報和解釋HIV-1P24抗原陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗確認，若陽性標本OD值比中和反應前降低50%以上，才確定為HIVP24抗原結(jié)果陽性。HIV-1P24抗原陽性僅作為HIV感染窗口期輔助診療依據(jù)，不能據(jù)此確診。HIV-1P24抗原檢測敏感性為30

90％，低于病毒載量測定。HIV-1P24抗原陰性結(jié)果只表示在本試驗中無反應，不能排除HIV感染。嬰幼兒經(jīng)過胎盤或哺乳從母親取得HIV抗體不能用于診療是否經(jīng)母嬰傳輸感染HIV。嬰幼兒體內(nèi)從母親得到HIV抗體連續(xù)存在時間最長不超出18個月。在18月齡以前能夠用各種不一樣非抗體依賴性檢驗方法對新生兒HIV感染進行輔助診療，包含：HIVP24抗原檢測、病毒分離培養(yǎng)、RNA或DNA測定。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第27頁4．艾滋病檢測試驗室安全防護規(guī)要求了全國各級各類艾滋病試驗室安全防護，規(guī)范性引用文件（1）試驗室生物安全級別1）艾滋病血清學檢測艾滋病血清學檢測（包含篩查和確認試驗室）、免疫學和核酸檢測應在符合Ⅱ級生物安全試驗室（BSL-2）要求艾滋病檢測試驗室中進行。2）HIV分離、研究HIV分離、細胞培養(yǎng)及研究工作應在Ⅲ級生物安全試驗室（BSL-3）中進行。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第28頁（2）試驗室管理要求1）建立安全制度①試驗室儀器設備、建筑和設施安全性應符合《試驗室生物安全通用要求》GB19489-和本《規(guī)范》要求。②依據(jù)本《規(guī)范》制訂本試驗室安全工作制度或安全標準操作程序（S-SOP），該制度或程序應適合用于現(xiàn)有試驗條件，并與試驗室其它要求相一致。③不論是否發(fā)生意外事故，每年都要對安全工作制度或安全標準操作程序及其實施情況進行檢驗和修訂，并有統(tǒng)計。④制訂意外事故處理預案。建立意外事故登記和匯報制度。⑤試驗室主任負責組織對突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進行調(diào)查、登記、處理和匯報。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第29頁2）人員培訓和管理①向管理人員和全部檢測人員提供并完成與工作相關充分有效技術培訓。強化全員安全培訓和“普遍性防護標準”安全意識。全部工作人員必須經(jīng)過HIV檢測技術和省級以上艾滋病試驗室安全培訓，包含上崗培訓和復訓，并接收試驗室管理人員監(jiān)督。試驗室安全責任人要對工作和環(huán)境安全負責，全部工作人員都有責任保護自己和他人安全。②必須通知新上崗人員試驗室工作潛在危險，進行安全教育，直至有能力后方可單獨工作。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第30頁③試驗室主任應了解全部工作人員。在安排工作區(qū)域時，要依據(jù)人員工作種類和所包括生物材料，對試驗室環(huán)境做好安全檢驗。④新調(diào)入人員、外來合作、進修和學習人員在進入試驗室之前必須經(jīng)過試驗室主任同意。非試驗室人員和非試驗室物品不得進入試驗室。⑤嚴格執(zhí)行試驗室工作人員年度采血檢測HIV抗體和立案制度，工作人員血清應長久保留。試驗室工作人員從事工作前必須進行HIV抗體和乙肝、丙肝等肝炎病毒標識物檢測；注射乙肝疫苗；每六個月-1年進行1次HIV抗體檢測，并保留血清樣品。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第31頁3）建立嚴格保密制度并定時檢驗①與HIV/AIDS相關檢測項目標全部資料均應嚴格保密，包含送檢單與檢測統(tǒng)計保管、匯報單發(fā)放和工作人員年度采血檢測等。②艾滋病檢測試驗室全部些人員應含有高度保密意識。不可對無關人員透露檢測結(jié)果。③保密制度納入年度考評，發(fā)覺問題及時處理并依據(jù)情況修訂保密制度。4）嚴格質(zhì)量管理①按要求做好安全操作管理以及檢測試劑選擇、檢測工作室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評。②對全部檢測匯報嚴格把關，杜絕漏報、誤報現(xiàn)象發(fā)生。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第32頁5）對存放試劑和有毒物區(qū)域監(jiān)控①冷藏柜、冰箱、培養(yǎng)箱和存放生物試劑、化學危險品、放射性物質(zhì)容器置于工作人員視線之外地點時應上鎖。②應設有專門儲存陽性血清、質(zhì)控品低溫冰柜和/或血清庫毒種庫，并應上鎖，專員管理。各級試驗室血清庫/毒種庫設置按相關要求執(zhí)行。6）建立應付突發(fā)事件辦法①在緊急預案中要包含在緊急事件發(fā)生時通知試驗室主任、設備管理員、試驗室工作人員和設備安全員。②試驗室主任和設備安全員要遵照相關要求，匯報、調(diào)查和處理突發(fā)事件以及可能發(fā)生意外職業(yè)暴露。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第33頁（3）廢棄物處置和消毒1）廢棄物處置：①廢棄物處置應符合《試驗室生物安全通用要求》（GB19489-）。②從艾滋病試驗室出來全部廢棄物，包含不再需要樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應視為感染性廢棄物，應置于專用密封防漏容器中，安全運至消毒室，并在高壓消毒后再進行處理或廢棄。2）HIV慣用消毒方法物理消毒方法：①高壓蒸汽消毒，121℃，保持15

20min;②干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2

3h。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第34頁HIV慣用化學消毒方法：HIV最慣用化學消毒劑是0.5%次氯酸鈉、70%乙醇和2%戊二醛，保持10

30min。①廢棄物缸：0.5%次氯酸鈉。②生物安全柜工作臺面和儀器表面：70%乙醇。③溢出物：0.5%次氯酸鈉。④污染臺面和器具：40%甲醛水溶液，也能夠用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第35頁一、

配合VCT(自愿咨詢檢測)和當前防治

工作需求，

新增相關內(nèi)容:

1.HIV抗體檢測替換策略除常規(guī)檢測程序以外，能夠依據(jù)不一樣目標，對HIV流行強度不一樣地域和不一樣人群采取不一樣替換策略，見表1。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第36頁全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第37頁（1）替換策略Ⅰ（全國HIV感染疫情匯報檢測策略）檢測程序及結(jié)果匯報①先用一個篩查試劑檢測，出現(xiàn)陰性反應則匯報“HIV抗體陰性（-）”。出現(xiàn)陽性反應則用兩種不一樣原理或不一樣廠家試劑復測（其中包含進口第三代ELISA試劑）。②兩種試劑復測均為陽性，且其中第三代ELISA試劑復測樣品OD值與臨界值（Cutoff）比值（S/CO）≥6.0者可作陽性考慮，上報疫情（附表4）。兩種試劑復測結(jié)果均為陽性，但第三代ELISA試劑復測S/CO比值在1.0

5.9之間，或兩種試劑復測結(jié)果呈一陰一陽，應深入作確認試驗，按照確認試驗標準判斷結(jié)果（圖3）。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第38頁圖3替換策略Ⅰ（HIV感染疫情匯報檢測策略）檢測流程

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第39頁2）替換策略Ⅱ（HIV感染高流行地域高危人群VCT檢測策略）應在確認中心試驗室和確認試驗室或以上試驗室指定篩查試驗室進行，用高質(zhì)量篩查試劑檢測及判斷結(jié)果（見6.2.2）。使用該策略判斷結(jié)果，陽性匯報須由確認中心試驗室和確認試驗室或以上試驗室認可篩查試驗室出具。檢測程序及結(jié)果匯報：①先用第一個篩查試劑（ELISA-1）檢測，出現(xiàn)陰性反應匯報HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性反應則匯報“HIV抗體待復查”，并用第一個和第二種酶聯(lián)試劑（ELISA-1和ELISA-2）復檢。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第40頁②兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陰性則匯報HIV抗體陰性；兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性，且S/CO比值均大于或等于6.0者，用第三種篩查試劑（高特異性篩查試劑）檢測，假如第三種試劑檢測結(jié)果為陽性，在符合使用該策略條件地域和人群中能夠出具“HIV-1抗體陽性（+）”匯報，使用“HIV抗體替換策略檢測匯報單”（附表5）。③以下情況均需做確認試驗，按照確認試驗結(jié)果出匯報：兩種ELISA試劑檢測結(jié)果一陰一陽、兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性但一個或二種S/CO在1.0～5.9之間、第三種篩查試劑檢測結(jié)果為可疑或陰性。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第41頁圖4替換策略Ⅱ（高危人群VCT檢測策略）檢測流程全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第42頁3）替換策略Ⅲ（高流行地域普通人群及其它地域各類人群VCT檢測策略，圖5）檢測程序及結(jié)果匯報：①先用一個高敏感性篩查試劑檢測，出現(xiàn)陰性反應匯報HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性則用第二種篩查試劑（高特異性）復檢。②第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（另一個高特異性試劑）檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢，提議深入做確認試驗，按確認試驗結(jié)果匯報。③第三種篩查試劑檢測為陰性則匯報HIV抗體陰性；第三種試劑檢測為陽性按疑似陽性咨詢，提議深入做確認試驗，按確認試驗結(jié)果匯報。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第43頁圖5替換策略Ⅲ（普通人群VCT策略）檢測及結(jié)果匯報流程圖全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第44頁2.嬰幼兒HIV感染診療（依據(jù)替換策略制訂）嬰兒隨訪和檢測服務流程納入當?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng)嬰兒9~12月齡進行HIV抗體檢測視為HIV抗體（-）常規(guī)兒童保健18月齡時再進行HIV抗體檢測結(jié)果（+）用另一個檢測試劑再次檢測結(jié)果（-）結(jié)果（+）結(jié)果（-）對HIV（+）產(chǎn)婦進行咨詢，指導人工喂養(yǎng)全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第45頁2.嬰幼兒HIV感染診療（依據(jù)替換策略制訂）嬰兒隨訪和檢測服務流程全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第46頁3．HIVRNA定量測定（病毒載量測定）（1）試驗室功效分區(qū)試驗室標準上應分為4個獨立工作區(qū)1）試劑準備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)，并設在不一樣房間。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)。各區(qū)功效是：①試劑準備區(qū)：擴增試劑配制、分裝和保留。②樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保留和加樣。③擴增區(qū)：核酸擴增。④擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物測定、結(jié)果分析、登記及匯報。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第47頁2）擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開，須使用不一樣房間，兩區(qū)之間最好有一定間隔。3）使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少許試劑配制。4）在滿足以下操作和清潔處理要求前提下樣品處理區(qū)和試劑準備區(qū)可設在同一房間內(nèi)：①在生物安全柜內(nèi)操作。②每個試驗人員、試驗組分別使用各自試劑及耗材。③盛放污染材料器皿密封并一次性使用。④用有效方法對操作區(qū)域和共享器具在試驗前后進行清潔及消毒。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第48頁（2）人員進行HIV核酸檢測人員須含有艾滋病試驗室上崗資格，并接收過省級以上艾滋病試驗室安全及試驗操作技術培訓。（3）設施和設備1）依據(jù)檢測項目配置對應設施和設備。2）各區(qū)域設施和設備應為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應依據(jù)要求在對應區(qū)域放置專用設備。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第49頁以下是各區(qū)域應配置設備：①試劑準備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。②樣品處理區(qū)：冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器。③擴增區(qū)：核酸擴增設備、冰箱、離心機、加樣器、廢棄物容器。④擴增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱、離心機、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、核酸污染物處理設備等。⑤配置-80℃冰箱。3）各區(qū)域應備有工作人員專用工作服或一次性工作服、帽子和鞋套，必要時配置防護眼鏡和/或口罩。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第50頁（3）方法和試劑1）方法慣用HIVRNA定量測定方法有:逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）;核酸序列擴增試驗（NASBA）;分支DNA雜交試驗（bDNA）。不一樣病毒載量檢測方法比較見表2（JohnG.Bartlett、JoelE.Gallant,MedicalManagementofHIVInfectionEditionp1-5）

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第51頁全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第52頁（5）HIV核酸定量檢測意義1）輔助診療在普通情況下，HIV抗體檢測足以對HIV感染是否做出正確診療，但在特殊情況下，單純抗體檢測不足以完成明確判定，如出現(xiàn)一些非經(jīng)典抗體反應形式，尤其是不確定反應時，RNA測定可提供非常有用證據(jù)。即使單純使用RNA測定不能完全確定感染是否，但當RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)陽性結(jié)果時（>3，000c/ml），感染發(fā)生可能性非常大。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第53頁需要指出是，每一個RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限，即能夠測出最低拷貝數(shù)，通常在50

100c/ml以上，RNA定量檢測時未測出不等于樣品中不含有病毒RNA。另外，許多AIDS病人/HIV感染者在接收抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低水平，還有少數(shù)HIV感染者在感染后長久處于病毒水平非常低狀態(tài)，進行RNA測定時往往測不出來。所以，使用此指標應綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進行綜合判斷。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第54頁2）早期診療在HIV感染窗口期無法使用抗體檢測進行診療。而在感染早期，在抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個病毒載量高峰，此高峰通常高于發(fā)病時血漿病毒水平，而且有證據(jù)表明這個時期病毒含有很高感染能力。這個高峰在免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應后，尤其是在細胞免疫出現(xiàn)后開始下降。所以早期病毒RNA測定含有特殊意義。該方法也可用于HIV感染孕婦所生嬰兒早期輔助診療。當前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進行多個樣品混合后RNA檢測以降低窗口期危險（降低“殘余危險度”）。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第55頁3）病程監(jiān)控依據(jù)HIV感染發(fā)生后病毒載量含有一定改變規(guī)律，而且這種改變與疾病進程有著親密相關性。所以定時進行病毒載量檢測有利于確定疾病發(fā)展階段，以確定對應治療方案。通常在HIV感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生感染或其它臨床癥狀極難與AIDS發(fā)病時癥狀區(qū)分，為確定一個剛發(fā)生癥狀是否與HIV感染相關，醫(yī)生往往需要觀察病人試驗室指標，病毒載量就是一個非常主要指標。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第56頁4）指導治療方案及療效判定臨床實踐證實，并非在任何情況下HIV感染者都應該進行抗病毒治療。這不單是經(jīng)濟上原因，更主要是因為抗病毒藥品副作用和療效原因。通常在病毒載量到達一定水平后（如>35，000

50，000c/ml）抗病毒治療才含有良好效果。在進行治療后，經(jīng)過病毒水平檢測才能確定治療是否有效，通常在治療前后病毒水平降低0.5log以上才被認為臨床有效。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第57頁5）預測疾病進程HIV感染后疾病進程與病毒載量關系十分親密，觀察HIV感染者病毒RNA水平可大致預測其發(fā)病可能。病毒載量與6年發(fā)病率關系為：<500c/ml時5.4%;501

3，000c/ml時16.6%;3，001

10，000c/ml時31.7%;10，001

30，000c/ml時55.2%;>30，000c/ml時則為80%。當HIV感染者CD4+T細胞計數(shù)＜200/μl時，病毒載量與3

6個月發(fā)展至AIDS危險為：＜10，000c/ml為4.9%;10，000

29，999c/ml為12.7%;30，000

99，990c/ml為17.7%;＞100，000c/ml為22.4%。在CD4+細胞數(shù)相同情況下，年紀大比年輕患者發(fā)展至AIDS危險更大（AIDS；18：51-58.）。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第58頁4．CD4+/CD8+T淋巴細胞檢測（1）試驗室條件1）人員進行HIV感染者CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測人員須含有艾滋病試驗室上崗資格，并接收過省級以上艾滋病試驗室安全及試驗操作技術培訓。2）設施和設備①樣品處理區(qū)：生物安全柜、離心機、冰箱、水浴箱、旋轉(zhuǎn)振蕩器、準確移液器（5μl

50μl、20μl

200μl、200μl

1000μl）。②流式細胞儀檢測區(qū)：流式細胞儀全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第59頁3）功效分區(qū)試驗室標準上應分為樣品處理區(qū)和流式細胞儀檢測區(qū),各區(qū)功效是：①樣品處理區(qū)應到達生物安全Ⅱ級（BSL-2）試驗室要求，用于樣品處理、流式檢測樣品制備。②流式細胞儀檢測區(qū)用于制備好樣品上機檢測。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第60頁（2）樣品采集、運輸和接收1）樣品采集選擇適當抗凝劑，分別用于血液學檢測和流式細胞儀免疫表型檢測。①用于血液學檢測抗凝劑EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。在血球分析儀生產(chǎn)商允許時間范圍內(nèi)檢測，不超出30h，不檢測超出抗凝時間范圍樣品。②用于流式細胞儀免疫表型檢測抗凝劑用K3EDTA抗凝，搜集樣品應在30h以內(nèi)，盡早（8h以內(nèi)）處理；用ACD或肝素抗凝，搜集樣品在48h以內(nèi)，盡早（8h以內(nèi)）處理。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第61頁靜脈采血搜集血樣，將血液注入一個事先加入適當抗凝劑試管（有條件者最好用真空試管）。①當搜集兒童樣品時，采取兒童用注射器、小試管。②采血后馬上握住試管兩端，顛倒混勻數(shù)次，將血液與抗凝劑混勻，以預防凝固。準備適當數(shù)量樣品管①當同一樣品血球檢測和流式細胞儀免疫表型檢測在同一個試驗室內(nèi)進行時，用1個裝有K3EDTA試管即可。②在全部其它條件下用2個試管（用K3EDTA作血球檢測，用K3EDTA、ACD或肝素作流式細胞儀免疫表型檢測）。對全部樣品編號，并寫明日期和搜集時間。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第62頁2）樣品運輸①在室溫下（18

23℃）保留和運輸樣品，防止極端溫度（冷凍或過熱）。超出37℃溫度會破壞細胞，對血液學和流式細胞儀檢測有影響。天氣熱時，需要用一個隔熱容器裝樣品，而且把這個容器放于另一個有冰袋和吸熱物質(zhì)容器中。這種方法有助樣品保留。②盡可能快地將樣品送至免疫表型檢測試驗室。③如需運輸樣品到其它地點時，應將裝樣品試管放于一個防漏容器中，并將此容器放于一個裝有充分吸水性物質(zhì)紙罐中，以預防震動并可吸收全部因試管破裂漏出血液。蓋緊紙罐，用橡皮帶系緊。④應選擇特定方案，而且安排適當時間搜集和運輸樣品。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第63頁3）樣品接收樣品抵達以后馬上檢驗試管及其所裝血樣。如有以下現(xiàn)象發(fā)生，采取正確方法處理：①假如樣品較熱或較冷，但沒有顯著溶血或結(jié)冰，能夠處理樣品，但要在工作表匯報上注明溫度條件。不要馬上加熱和冷凍樣品以使其抵達室溫，因為這么會對免疫表型檢測結(jié)果產(chǎn)生不利影響，散射光模式不正常會顯示出所受到影響。②不可檢測溶血或結(jié)冰樣品。③不可檢測凝血樣品。④假如樣品采集時間已超出48h，不可檢測。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第64頁3）樣品接收樣品抵達以后馬上檢驗試管及其所裝血樣。如有以下現(xiàn)象發(fā)生，采取正確方法處理：①假如樣品較熱或較冷，但沒有顯著溶血或結(jié)冰，能夠處理樣品，但要在工作表匯報上注明溫度條件。不要馬上加熱和冷凍樣品以使其抵達室溫，因為這么會對免疫表型檢測結(jié)果產(chǎn)生不利影響，散射光模式不正常會顯示出所受到影響。②不可檢測溶血或結(jié)冰樣品。③不可檢測凝血樣品。④假如樣品采集時間已超出48h，不可檢測。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第65頁當前用于CD4+和CD8+T淋巴細胞計數(shù)檢測方法分為自動檢測方法和手工操作法。自動檢測方法包含流式細胞儀（主要有多平臺三級程序法和單平臺一步法）和專門細胞計數(shù)儀;手工操作法包含幾個手工操作試驗，需要顯微鏡或酶聯(lián)免疫試驗設備。（3）方法全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第66頁（5）結(jié)果匯報1）按照試驗結(jié)果填寫CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測匯報單，檢測人員簽字。2）依據(jù)CD命名標準匯報數(shù)據(jù)，用一個簡短描述解釋命名意義。注意：CD4+T細胞是指輔助性T細胞。正確匯報CD4+T細胞應該是那些CD4+和CD3+雙陽性細胞。一樣地，CD8+T細胞是T-suppressor/cytotoxic細胞，為CD3+和CD8+雙陽性細胞。在CD4+和CD8+判定中主要是排除其它細胞（非T細胞）干擾。3）以全部淋巴細胞百分比匯報數(shù)據(jù)，而且修正門內(nèi)淋巴細胞純度。比如，假如淋巴細胞純度是94%，而CD3值為70%，能夠經(jīng)過0.7除以0.94乘以100得到74%，修正CD3值。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第67頁4）為檢測免疫亞群而取血同時，用該血樣作自動測定全血細胞（CBC）計數(shù)白細胞（WBC）及分類測定，匯報淋巴細胞亞群絕對數(shù)值。①用淋巴細胞總數(shù)（來自于WBC及分類）乘以淋巴細胞亞群百分率（從流式細胞儀數(shù)據(jù)中得到），計算絕對數(shù)值。②如可能，應匯報計數(shù)百分率和絕對值。5）單平臺一步法由計算機軟件直接出結(jié)果并打印出匯報單，匯報單內(nèi)容包含以下結(jié)果：CD45+AbsCnt；CD3+AbsCnt；CD3+CD4+%TLym；CD3+CD4+AbsCnt；CD3+CD8+%TLym；CD3+CD8+AbsCnt；Th/Ts及其正常參考值范圍(BD企業(yè)建立正常參考值范圍見表3)，檢測人員簽字。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第68頁表3BD企業(yè)應用單平臺一步法建立正常參考值范圍表項目單位參考正常值范圍CD3+/CD45+%56%

85%CD3+絕對數(shù)個/μl1027

2086CD3++CD8+/CD45+%15%

34%CD3++CD8+絕對數(shù)個/μl323

836CD3++CD4+/CD45+%30%

54%CD3++CD4+絕對數(shù)個/μl706

1125CD4+/CD8+比值

1

2*全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第69頁（6）檢測CD4+、CD8+T淋巴細胞意義T淋巴細胞是機體免疫系統(tǒng)內(nèi)功效最主要一群細胞。在正常機體內(nèi)各淋巴細胞亞群相互作用，維持著機體正常免疫功效。當不一樣淋巴細胞亞群數(shù)量和功效發(fā)生異常時，可造成機體免疫功效紊亂并發(fā)生一系列病理改變。所以，Ｔ淋巴細胞亞群免疫分型能夠提供相關患者免疫狀態(tài)主要信息。AIDS是由HIV引發(fā)一組綜合征，HIV主要侵犯人CD4+T淋巴細胞，造成其數(shù)量上降低和功效缺點，使機體免疫平衡被打破造成免疫功效低下，最終造成各種機會感染和腫瘤。因而，對HIV感染者和AIDS病人定時進行CD4+、CD8+T淋巴細胞檢測含有十分主要意義。主要表現(xiàn)在以下幾個方面：全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第70頁1）了解機體免疫狀態(tài)以進行疾病分期，如美國CDC就是以此為基礎制訂了HIV感染者/AIDS病人診療和分類標準（見表4），當前國內(nèi)外仍被采納應用。2）長久監(jiān)測CD4+T淋巴細胞絕對數(shù)改變，有利于了解患者病情發(fā)展，決定正確治療方案，并觀察對治療反應。如判斷HIV感染者臨床合并癥（當CD4+T淋巴細胞細胞＜200/

l時，很輕易發(fā)生卡氏肺孢子蟲肺炎；當CD4+T淋巴細胞<50時，易發(fā)生CMV感染＝。3）幫助確定抗HIV藥品治療及預防機會性感染治療適應癥，如當CD4+T淋巴細胞＜200/ul時，應給予抗卡氏肺孢子蟲肺炎預防性治療。4）是用來評價一些新、針對HIV治療方法和治療藥品療效主要指標。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第71頁表41993年修訂HIV感染分類系統(tǒng)和青少年及成人擴展AIDS監(jiān)測病例定義CD4+T淋巴細胞數(shù)范圍臨床分類A無癥狀，急性（原發(fā)）HIV或PGLB有癥狀，非（A）或（C）C艾滋病指征性疾病1．≥500/μl（≥29%）2.200~499/μl（14%~28%）3.200/μl（<14%）A1B1C1A2B2C2A3B3C3全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第72頁備注：A、B、C解釋請參考《艾滋病病毒感染診療與治療》邵一鳴、蔣巖、欒文民主譯，科學出版社，年，北京。5．艾滋病試驗室安全防護和職業(yè)暴露預防（1）因為甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和試驗室常規(guī)空氣消毒。在“意外和事故緊急處理辦法”中新增了“低溫蒸汽甲醛氣體消毒”：假如試驗室一旦發(fā)生了重大潑濺事故，應按嚴重情況處理，并采取以下辦法：①從污染處疏散人員，但要預防污染擴散；②控制污染——鎖門并預防深入進入；③通知試驗室主管領導、安全責任人等，方便查清情況，確定消毒處理程序；全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第73頁④假如認為適當，可進行生物安全柜和/或試驗室低溫蒸汽甲醛氣體消毒，但生物安全柜和/或試驗室必須有可靠密閉性能，人員必須完全離開?！旧锇踩瘢?5ml福爾馬林和等量水混合后放在一個蒸發(fā)皿中使其在密封生物安全柜中蒸發(fā)，保持最少6h，最好過夜。試驗室：福爾馬林和水體積依據(jù)試驗室大小而定】。詳細操作可按說明書執(zhí)行。⑤發(fā)生溢出后應離開房間約30分鐘。穿防護服，被濺地方用經(jīng)消毒劑浸泡吸水物質(zhì)覆蓋；消毒劑起作用10－15分鐘后清理該地方。移走吸水性物質(zhì)，用消毒劑沖洗該地方。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第74頁（2）艾滋病職業(yè)暴露后預防：艾滋病職業(yè)暴露：是指醫(yī)務工作者、試驗室工作人員及相關監(jiān)管人員在從事HIV/AIDS診療、治療、護理、預防、檢驗、管理工作過程中，暴露于含有HIV血液、體液和試驗室培養(yǎng)液，即暴露于含有HIV液體等引發(fā)危害。HIV/AIDS職業(yè)暴露后預防（PostexposureProphylaxis，PEP）應包含搶救、對暴露級別評定、暴露源嚴重程度評定、預防性用藥推薦處理方案、匯報與保密。全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第75頁1）搶救處理①刺激出血：職業(yè)暴露緊急處理，只要情況允許，應實施搶救。如皮膚有傷口，應該重復輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處血液。②肥皂和清水沖洗傷口或沾污皮膚。假如是粘膜暴露，應用生理鹽水（或清水）重復沖洗。③受傷部位消毒與包扎：傷口應用消毒液（如70%酒精、0.2%次氯酸鈉、0.2%

0.5%過氧乙酸、0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎傷口。④因為暴露后有沒有采取搶救辦法對職業(yè)暴露后HIV感染有一定影響，故應盡可能為受傷者尋找醫(yī)療機構(gòu)，以求正確護理傷口和暴露后搶救處理。⑤可介紹已發(fā)生職業(yè)暴露人員到艾滋病防治機構(gòu)深入咨詢和處理。

全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第76頁全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第77頁全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第78頁全國艾滋病檢測技術規(guī)范要點第79頁5）用藥注意事項1在暴露后預防性用藥應馬上開始，最好在暴露后1

2h之內(nèi)。即使動物研究顯示24

36h之后再進行預防性用藥可能已無效，不過還不確定對人類無效。對于感染危險性很高暴露者，即使間隔時間很長（比如1

2周），