編號：時間：2021年x月x日書山有路勤為徑，學海無涯苦作舟頁碼：第⑶危急值報告：無危急值。⑷注意事項:①酶法測血清TC時，由于血清中大部分CHO是酯化的，而且血清基質(zhì)對這項酶促反應有明顯的影響，故不宜采用純膽固醇結(jié)晶配制的溶液作為TC酶法分析的標準液，而應以準確定值的血清做為標準參考物質(zhì)。②臨床上已很少采用游離CHO測定，如需測游離CHO，最簡便的也是用酶法，即在上述TC測定用酶試劑中省去CEH(膽固醇酯酶)即可，一般植于游離的CHO約占的TCH的30%左右。③酶法測定TCH反應達終點時間37℃不應超過5min.④試劑在500nm波長下空白吸光度應＜0.050,否則應視為過期試劑,不能再使用.甘油三酯測定（GPO--PAP法)一.實驗原理：人體各種組織中廣泛分布著甘油三酯，而占全身98%以上的甘油。酯則是貯存在脂肪組織中。甘油三酯的主要生理功能是氧化供能。機體在利用甘油三酯時，首先將其水解成甘油和脂肪酸，然后再分別將它們氧化降解。人體空腹時所需能量的50%-70%是由脂肪酸分解提供的。人體內(nèi)的甘油三酯除來自食物之外，還靠體內(nèi)自行合成，合成的場所主要是肝臟和脂肪組織。血清中甘油三酯的含量隨年齡增長而有上升的趨勢，尤其是體重超過標準的中年以上的人往往偏高。進食脂肪后，血清中甘油三酯上升，并可出現(xiàn)渾濁，顯示乳糜微粒增多。正常成人，空腹時按1g/kg體重進食脂肪，一般2-4小時內(nèi)血清甘油三酯達最高峰，8小時后恢復正常，脂肪清除作用差的人，清除時間延長。甘油三酯又稱中性脂肪或真脂，是全身各種脂肪的主要成分，參與體內(nèi)能量的儲存。飲食對血中甘油三酯的影響很大。因此，采血化驗時至少應空10-12小時。去游離甘油的GPO-PAP法第一反應:根據(jù)下述第一反應中的前處理反應，血清中的游離甘油被消除，第一反應中若有LPL或膽固醇酯酶混入后，標本中的甘油三酯被分解成游離甘油，產(chǎn)生負誤差。本試劑第一試劑能抑制混人的LPL及膽固醇酯酶的活性，防止甘油三酯被分解，并消除游離甘油。反應式如下：TG+ATPGK甘油-3-磷酸+ATP甘油-3-磷酸+O2GPOH2O2+磷酸二羥丙酮H202過氧化氫酶H2O+O2第二反應:在第二試劑中的LPL及LPL活性化成分的作用下，血清中甘油三酯迅速分解成甘油及脂肪酸。所生成的甘油在ATP存在下，通過甘油激酶(GK)的作用，生成甘油-3-磷酸，后者又在甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)的作用下生成過氧化氫，在過氧化物酶(POD)存在下，過氧化氫使4-氨基安替匹林與ESBmT氧化縮合，產(chǎn)生紫紅色色素。通過測定紫紅色色素的吸光度而求出甘油三酯的含量?？箟难岬挠绊懺诿盖疤幚矸磻斜幌?。反應式如下：TG+ATPGK甘油-3-磷酸+ATP甘油-3-磷酸+O2GPOH2O2+磷酸二羥丙酮H202+4-氨基安替代比林+氯酚醌亞胺+H2O二.標本采集與處理:采血前兩天不要進食含有大量脂肪的食物，空腹至少8小時以上，采集靜脈血抗凝血或血清。樣品在20～25℃保存可穩(wěn)定2天；4～8℃保存可穩(wěn)定1周；-20℃保存至少可穩(wěn)定6個月。三、檢測方法：1、試劑的準備：試劑開瓶即可使用。2、檢測步驟：全自動生化分析儀操作步驟：參數(shù)設置→試劑裝載→校準→質(zhì)控→樣品加載→測定→結(jié)果審核→報告。3、校準：當試劑更換批號、出現(xiàn)質(zhì)控漂移、儀器做完保養(yǎng)后及重要零件更換時，須按所用標準品說明書以y=ax+b進行線性校準。4、結(jié)果計算：全自動生化分析儀會自動給出檢測結(jié)果四.質(zhì)量控制：在測定每一批標本前先做正常值和異常值來兩個水平的質(zhì)控品，以2S為質(zhì)控警告限,3S為失控限,繪制質(zhì)控圖,判斷是否在控（質(zhì)控規(guī)則見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程）.在控后方可進行標本測定,若失控，查明原因并采取措施。五、參考區(qū)間:合適水平：≤1.69mmol/L；升高：1.69～2.26mmol/L；臨界范圍：2.26～5.63mmol/L；極高水平：≧5.64mmol/L；六、臨床意義:血清TG受生活習慣、飲食和年齡等多種因素影響，在個體內(nèi)及個體間的波動較大。由于TG的半衰期短(5-15分鐘),進食高脂、高糖和高熱量飲食后,TG可明顯增高，且以乳糜微粒的形式存在，后者會使血漿變得渾濁，甚至呈乳糜樣。因此,必須在禁食12-16小時后靜脈采集標本，以排除和減少飲食的影響。(1)增高:高TG血癥也有原發(fā)的與繼發(fā)的兩類。前者多有遺傳因素。其中包括家族性高TG血癥與家族性混合型高脂(蛋白)血癥等。繼發(fā)的見于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺功能低下、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酣酒等，但不易分辨原發(fā)或繼發(fā)。大量前瞻性的研究證實，富含TG的脂蛋白是CHD的獨立的危險因子，TG增加表明患者存在代謝綜合征，需要治療。

⑵減低:甘油三酯降低，膽固醇正常，則臨床意義不大。減低見于低β-脂蛋白血癥和無β-脂蛋白血癥;嚴重的肝臟疾病、吸收不良綜合征、甲狀腺功能亢進癥、腎上腺皮質(zhì)功能減退癥等。七.附注：(1)干擾因素:①膽紅素>100μmol/L或抗壞血酸>170μmol/L會出現(xiàn)負干擾。②血紅蛋白的干擾是復雜的，它本身的紅色會引起正干擾。溶血后，紅細胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產(chǎn)生負干擾。當出Hb<1g/L時反映為負干擾，Hb>lg/L反映出正干擾，但Hb<2g/L時干擾不顯著，明顯溶血標本不宜用作TG測定.⑵方法局限性：本試劑的線性范圍可達11.3mmol/L，如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液進行稀釋，重新測定，結(jié)果乘以稀釋的倍數(shù)。⑶危急值報告：無危急值。⑷注意事項:①我國現(xiàn)階段允許一步酶法與兩步酶法并存，要求逐步過渡到統(tǒng)一采用兩步法。在未統(tǒng)一方法之前，實驗室報告TG測定結(jié)果時應注明去FG(游離甘油)值或未去FG值，這將有助于臨床醫(yī)生對結(jié)果的正確判斷.②正常人血清FG濃度平均約0.11mmol/L，對于變動幅度較大的TG來說，由此引起的誤差是可以忽略的，但有些標本中FG明顯增高，以致影響對比水平的判斷，例如糖尿病、情緒應激、含甘油的藥物(復方甘油、甘油果糖、甘露醇、硝酸甘油)、靜脈營養(yǎng)等如TG高而血清不揮濁者應排除高TG的可能。

③酶法測定TG時，脂蛋白脂肪酶(LPL)除能水解TG外，還能水解甘油一酷和甘油二酯(血清中后兩者約占總TG的3%),亦被計算在FG中，實際上測定的是總甘油。

④酶法測定TG反應達終點時間37'C不應超過8min.

⑤試劑在500nm波長下空白吸光度應＜0.050,否則應視為過期試劑,不能再使用.乙肝五項檢測（ELISA法）一、檢測目的：乙型肝炎病毒標志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)檢測。二、測定原理：分別采用雙抗體（抗原）夾心法和競爭法。HBsAg、HBsAb原理：采用單克隆抗-HBs(HbsAg)包被反應板，加入待測標本，同時加入多克隆抗-HBs-HRP(HBsAg-HRP),當標本中存在HBsAg（HBsAb）時，該HBsAg（HBsAb）與包被抗-HBsAg（HBsAb）結(jié)合并與抗-HBsAg-HRP（HbsAb-HRP）結(jié)合形成抗-HBsAg（HBsAb）-抗-HBsAg-HRP（HBsAb-HRP）復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。HBeAg原理：采用抗-HBe包被反應板，加入待測標本，同時加入抗—HBe-HRP，如待測樣本中抗HBeAg時，就與包被抗-HBe、抗—HBe-HRP結(jié)合形成復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反應板，加入待測標本，同時加入HBe-HRP，與抗原形成競爭結(jié)合，如待測樣本中抗-HBe含量高，則抗—HBe-HRP與HBeAg結(jié)合少，加入TMB底物時顯色淡，反之則顯色深。HBcAb原理：采用基因工程重組HbcAg包被反應板，加入待測標本，同時加入HBc-HRP，與抗原形成競爭結(jié)合，如待測樣本中抗-HBc含量高，則抗—HBc-HRP與HBcAg結(jié)合少，加入TMB底物時顯色淡，反之則顯色深。三、操作步驟：1、將試劑從冷藏室中取出，30分鐘后平衡至室溫方可開啟使用。2、用蒸餾水將PBST濃縮液20倍稀釋，作為洗液。3、將微孔條固定于支架上，按序編號。4、每孔加入標測標本50ul，設陰陽性對照各兩孔，每孔加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或一滴），并設空白對照1孔，質(zhì)控1孔。每孔加酶結(jié)合物50ul（或一滴），（空白對照除外），充分混勻。封板。5、置37℃溫育30分鐘。6、用洗板機洗板5次，將板倒置于濾紙上拍干。7、每孔加顯色劑A液、B液50ul（或一滴），充分混勻，封板置37℃孵育15分鐘。8、每孔加終止液50ul（或一滴），充分混勻。9、用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm,先用空白調(diào)零，然后讀取各孔OD值。四、結(jié)果判斷：樣品OD值／陰性對照平均OD ≥2.1，判斷為陽性，否則為陰性。陰性對照OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。五、注意事項：1、冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應在室溫平衡30分鐘后方可使用。2、使用試劑前搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加。3、結(jié)果判定必須在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。4、不同批號的試劑不可混用。5、待測標本不可用NaN?防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。6、本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。六、生物安全防護：1、在檢測前，所有標本均應視為“陽性”標本即生物危險品。2、如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。3、操作前一定要做好自身防護（穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套）。4、HBV對低溫、干燥、紫外線、70%乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分鐘、高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘或干熱160℃2小時均可滅活HBV。5-10g/L次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林37℃72小時，0.5%過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。七、臨床意義：乙肝病毒血清標志物的臨床意義（即常說的乙肝五項或稱兩對半）序號HBsAg表面抗原抗-HBsHBsAb表面抗體HBeAgE抗原抗-HBeHBeAbE抗體抗-HBcHBcAg核心抗體臨床意義出現(xiàn)率9種常見模式1-----過去和現(xiàn)在未感染過HBV。1-30%2----+(1)既往感染未能測出抗-HBs；(2)恢復期HBsAg已消，抗-HBs尚未出現(xiàn)；(3)無癥狀HBsAg攜帶著。5-10%3---++(1)既往感染過HBV；(2)急性HBV感染恢復期；(3)少數(shù)標本仍有傳染性。①HBV感染已過；②抗HBs出現(xiàn)前的窗口期2-10%4-+---(1)注射過乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假陽性1-6%5-+-++急性HBV感后康復。0.5-5%6+---+(1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg攜帶者；(3)傳染性弱。10-15%7-+--+既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢復期。5-15%8+--++(1)急性HBV感染趨向恢復；(2)慢性HBsAg攜帶者；(3)傳染性弱。即俗稱的“小三陽”。5-10%9+-+-+急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV復制，傳染強。即俗稱的“大三陽”。30-40%16種少見模式10+----(1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潛伏期；(2)慢性HBV攜帶者，傳染性弱。11+--+-(1)慢性HBsAg攜帶者易轉(zhuǎn)陰；(2)急性HBV感染趨向恢復。12+-+--急性HBV感染早期或慢性攜帶者，傳染性強。13+-+++(1)急性HBV感染趨向恢復；(2)慢性攜帶者。14++---(1)亞臨床型HBV感染早期；(2)不同亞型HBV二次感染。15++--+(1)亞臨床型HBV感染早期；(2)不同亞型HBV二次感染。16++-+-亞臨床型或非典型性感染。17++-++亞臨床型或非典型性感染。18+++-+亞臨床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫復合物，新的不同亞型感染。19--+--(1)非典型性急性感染；(2)見于抗-HBc出現(xiàn)之前的感染早期，HBsAg滴度低而呈陰性，或呈假陽性。20--+-+非典型性急性感染。21--+++急性HBV感染中期。22-+-+-HBV感染后已恢復。23-++--非典型性或亞臨床型HBV感染。24-++-+非典型性或亞臨床型HBV感染。25---+-急性HBV感染趨向恢復。7種罕見模式26+++++①一種亞型的HBsAg及異型的抗HBs（常見）；②血清從HBsAg轉(zhuǎn)化為抗HBs的過程（少見）。27-+++-28-++++29--++-30+-++-31+++--32++++-乙肝五項檢測(膠體金法)一、檢測目的乙型肝炎病毒標志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)檢測。二、測定原理HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用雙抗體(原)夾心法原理。用抗HBsAg多克隆抗體包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗HBs鯫單克隆抗體HBsAh，應用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清／血漿中HBsAg；用HBsAg重組抗原和鏈霉親和素一BSA包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的HBs如重組抗原和生物素一BSA及其他試劑，應用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清／血漿標本中HBsAb；用抗HBeAg單克隆抗體(Ehl)包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗HBeAg單克隆抗體(Eh2)。應用雙抗體夾心法原理，用于定性檢測血清或血漿中HBeAg。HBsAg、HBsAb、HBeAg測試時，將血清／血漿標本滴人試劑板加樣處．標本在毛吸效應下向E層析，如標本中含有相應的待測物質(zhì)，在測試區(qū)(T)內(nèi)會出現(xiàn)一條紅色條帶，則是陽性結(jié)果。如標本中不含有相應的待測物質(zhì)，則測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶，是陰性結(jié)果。無論待測物質(zhì)是否存在于標本中，一條紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準。HBeAh、HBcAh采用競爭法原理。用HBeAg重組抗原包被硝酸纖維素膜，配以乳膠標記的鼠抗HBeAg單克隆抗體。應用競爭抑制法原理，定性檢測血清／血漿巾HBeAI，；用HBcAg重組抗原包被硝酸纖維素膜，配以乳膠標記的HBcAb單克隆抗體，應用競爭抑制法原理，定性檢測血清／血漿中HB。Ah。測試HB。Ah、HBcAb時，將血清／血漿標本滴入試劑板加樣處，隨之標本在毛吸效應下向上層析。如標本中含有相應的抗體．則同膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體競爭與預包被在乳膠顆粒上的相應抗原反應。如標本中沒有相應的抗體，預包被在乳膠顆粒上的相應抗原則同膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體全部結(jié)合。陽性標本，測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶；陰性標本，測試區(qū)(T)會出現(xiàn)明顯的紅色條帶c無論相應的抗體是否存在于標本中，一條紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)。質(zhì)控醫(yī)內(nèi)(c)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準．三、操作步驟具體方法參照試劑盒說明書。舉例如下：在進行任何測試前必須先完整閱讀使用說明書．使用前將試劑板和血清／血漿標本恢復至室溫(20～30％)。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒(注意：在扣開鋁箔前應先恢復至室溫)，在l小時內(nèi)應盡快地使用。1.將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取血清／血漿標本，逐滴垂直加入于試劑板的五個加樣子L中(每孔2。3滴)。2.加樣后立刻開始計時，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時讀取測試結(jié)果。在20分鐘后讀取的結(jié)果無效．四、結(jié)果判定由于前三個相關(guān)項目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗體(原)夾心法原理，后兩個項日HBeAb、HbcAb使用競爭法原理。因此前一：個項日與后兩個相關(guān)項目判讀方法是不同的．請注意區(qū)別。l.HBsAg、HBsAb、HbeAg(1)陽性(+)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。(2)陰性(一)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。(3)無效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。(4)注意：在進行HBsAg、HBsAb、HbeAg測試時，測試區(qū)(T)內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應該判為陽性結(jié)果。2HBeAb、HBcAb(1)強陽性(+)：僅質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶．在測試區(qū)(T)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。(2)弱陽性(+)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。(3)陰性(一)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(c)。陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。(4)無效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。五、注意事項l.請控制判讀時間，測試結(jié)果應在測定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無效。2.乳膠法乙肝五項檢測試劑板(血清／血漿)只是定性的篩選乙肝病毒血清標志物的存在，不能確定血樣中病毒的含量。3.由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標本中存在的干擾物質(zhì)，檢測結(jié)果可能有錯誤。對可疑結(jié)果應作相應的進一步檢測。六、生物安全防護1.在檢測前，所有標本均應視為“陽性”標本即生物危險品。2.如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。3.操作前一定要做好自身防護(穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套)。4.HBV對低溫、干燥、紫外線、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分鐘、高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘或f熱160℃2小時均可滅活HBV。5～10g／L次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林37℃72小時，O5％過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。七、臨床意義1.HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢者處于HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多乙肝檢驗對象體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。2.HBsAh陽性：多見于乙型肝炎處于恢復期，或既往曾感染過HBV，現(xiàn)在已恢復，而且對HBV有一定的免疫力；同時，HBsAh陽性是對接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免疫成功的指標。3.HBeAg陽性：見于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細胞有進行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預測肝炎病情，HBeAg持續(xù)陽性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播病毒給新生兒，其感染的陽性率為70％～90％。4.HBeAh陽性：多見于HBeAg轉(zhuǎn)陰的檢驗對象，意味著HBV部分被清除或抑制，病毒復制減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗對象可檢出HBeAb；在HBsAg和HBsAh陰性時，如能檢出HBeAh和HhcAh，也能確診為乙型肝炎近期感染。5.HBcAh—lgG陽性：高滴度表示正在感染}iBV，低滴度則是既往感染過HBV的指標，具有流行病學的意義。6.HBcAb—IgM陽性：是診斷急性乙型肝炎和判斷病毒復制活躍的指標，并提示檢驗對象血液有較強傳染性。同時，HBcAh—IgM陽性還見于慢性活動性乙型肝炎。乙肝表面抗原檢測(膠體金法)一、檢測目的乙型肝炎病毒標志物HBsAg檢測。二、測定原理HBsAg采用雙抗體(原)夾心法原理。用抗HBsAg多克隆抗體包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗HBs鯫單克隆抗體HBsAh，應用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清／血漿中HBsAg；用HBsAg重組抗原和鏈霉親和素一BSA包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的HBs如重組抗原和生物素一BSA及其他試劑。HBsAg測試時，將血清／血漿標本滴人試劑板加樣處．標本在毛吸效應下向E層析，如標本中含有相應的待測物質(zhì)，在測試區(qū)(T)內(nèi)會出現(xiàn)一條紅色條帶，則是陽性結(jié)果。如標本中不含有相應的待測物質(zhì)，則測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶，是陰性結(jié)果。無論待測物質(zhì)是否存在于標本中，一條紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準。三、操作步驟具體方法參照試劑盒說明書。舉例如下：在進行任何測試前必須先完整閱讀使用說明書．使用前將試劑板和血清／血漿標本恢復至室溫(20～30％)。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒(注意：在扣開鋁箔前應先恢復至室溫)，在l小時內(nèi)應盡快地使用。1.將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取血清／血漿標本，逐滴垂直加入于試劑板的五個加樣子L中(每孔2。3滴)。2.加樣后立刻開始計時，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時讀取測試結(jié)果。在20分鐘后讀取的結(jié)果無效．四、結(jié)果判定HBsAg(1)陽性(+)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。(2)陰性(一)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。(3)無效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。(4)注意：在進行HBsAg測試時，測試區(qū)(T)內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應該判為陽性結(jié)果。五、注意事項l.請控制判讀時間，測試結(jié)果應在測定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無效。2.膠體金法乙肝表面抗原檢測試劑板(血清／血漿)只是定性的篩選乙肝病毒血清標志物的存在，不能確定血樣中病毒的含量。3.由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標本中存在的干擾物質(zhì)，檢測結(jié)果可能有錯誤。對可疑結(jié)果應作相應的進一步檢測。六、生物安全防護1.在檢測前，所有標本均應視為“陽性”標本即生物危險品。2.如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。3.操作前一定要做好自身防護(穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套)。4.HBV對低溫、干燥、紫外線、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分鐘、高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘或f熱160℃2小時均可滅活HBV。5～10g／L次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林37℃72小時，O5％過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。七、臨床意義HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢者處于HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多乙肝檢驗對象體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。沙眼衣原體IgG抗體檢測（膠體金法）一、檢測目的：用于檢測試驗血清中的沙眼衣原體抗體IgG。二、檢驗原理：用沙眼衣原體抗原固相硝酸纖維素膜，應用滲濾式間接法原理，檢測血清中沙眼衣原體抗體IgG。三、樣本要求：1、

血清樣品不能溶血，應為新鮮血清或2℃～8℃條件保存不超過一周。

2、

高脂血癥血清不能使用。四、檢驗方法：1、取出試劑盒，室溫平衡20-30分鐘；1、

滴入洗滌液一滴于反應板中央孔中，待液體將膜完全濕潤；

2、

加入待測血清150μl（若用樣品吸管則加4滴）于反應板孔中，待液體充分吸入；

3、

滴加三滴金標液于反應板孔中，待液體充分吸入；

4、

滲入三滴洗滌液于反應板孔中，待液體充分吸入。五、結(jié)果解釋：陽性：反應板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端出現(xiàn)紅色圓斑，為沙眼衣原體抗體IgG陽陰性：反應板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端不出現(xiàn)紅色圓斑，為沙眼衣原體抗體IgG陰失效：反應板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑，或C端、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑，為試劑盒失效。六：檢驗方法的局限性：1、

本試劑試驗僅用于檢測沙眼衣原體抗體IgG而非直接檢測沙眼衣原體抗原,因而陽性結(jié)果并不能確診是沙眼衣原體感染。對患者狀況的診斷應結(jié)合患者臨床體征與癥狀和試驗結(jié)果的綜合分析。

2、

抗體含量低的血清樣品，不能被檢測出來是可能的。部份沙眼衣原體感染的患者，不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生少量的抗體。此時，可能顯示陰性結(jié)果。3、本試劑不能確定沙眼衣原體抗體IgG的確切含量。七、注意事項：1、必須使用新鮮血清或2-8℃放置3天內(nèi)的血清測定。少數(shù)標本（高脂血、高膽紅素、溶血）背景輕微偏深，一般不影響結(jié)果判斷。2、加有抗凝劑、促凝劑的標本滲濾速度緩慢，底色太紅，影響結(jié)果判讀，建議不使用。3、加液體的各步操作之間不得有時間間隔；同一步驟中所加液體應迅速一次加入后等其滲入。4、超過規(guī)定時間出現(xiàn)的結(jié)果無效。5、質(zhì)控點的強弱并不代表試劑質(zhì)量的優(yōu)劣。6、不同產(chǎn)品、同產(chǎn)品不同批次之間的金標液、洗滌液嚴禁混用。7、解脲支原體抗體、人型支原體抗體、淋球菌抗體、類風濕因子對試劑盒檢測結(jié)果基本無影響。八、臨床意義：沙眼衣原體感染病人血清中可檢出特異性抗體。lgM出現(xiàn)較早，持續(xù)約1個月，其陽性提示近期感染沙眼衣原體，可作為早期診斷的指標；lgG出現(xiàn)較晚，持續(xù)時間較長，可用于回顧性診斷和流行病學調(diào)查。陽性：見于沙眼、成人包涵體結(jié)膜炎、男性尿道炎、女性宮頸炎和輸卵管炎、性病淋巴肉芽腫等。淋病奈瑟菌檢測一、涂片鏡檢1、檢測目的查找標本中白細胞內(nèi)的革蘭陰性雙球菌，規(guī)范淋病奈瑟氏菌的涂片檢測，保證檢測結(jié)果的準確性。2、標本采集生殖道分泌物，無菌留取。3、玻片的制備（1）取潔凈載玻片，在有磨砂的一面寫上編號（化驗單尾號或標本號）（2）在生物安全柜內(nèi)涂片，自然干燥后進行革蘭染色及顯微鏡檢查。4、染色（1）涂片經(jīng)火焰固定后，加結(jié)晶紫染液染1分鐘，流水緩慢沖去染液。（2）吸水紙吸干玻片水分后加碘液媒染1分鐘，水洗。（3）加脫色液，復染30秒，水洗。（4）加復染液，復染30秒，水洗（5）玻片完全干燥后，顯微鏡鏡檢。5、鏡檢與結(jié)果報告陽性：革蘭染色顯微鏡下為革蘭陰性雙球菌，呈雙腎形成對排列。結(jié)果報告：細胞內(nèi)可見革蘭陰性雙球菌。6、參考范圍：陰性7、質(zhì)量控制（1）每次染色時應同時用已知的革蘭陽性菌和陰性菌進行對照試驗，以檢查染色液的質(zhì)量。（2）結(jié)晶紫與草酸銨溶液混合不能保存太久，如有沉淀則應重新配制。（3）采樣時，女性拭子插入子宮頸3cm處取樣，避免陰道分泌物污染拭子。（4）對于不能及時送檢的標本應常溫保存，不可以冷藏。8、生物安全防護（1）操作前應做好自身防護（穿工作服、戴口罩、膠皮手套）。（2）在生物安全柜中進行涂片操作。（3）所有不再需要的標本，培養(yǎng)物和其他生物性材料，應置于專用和有生物危害標記、用于處置危險廢棄物的防漏容器內(nèi)。（4）試驗操作工作面應以500ppm“84”消毒液擦試，再用紫外線滅菌燈照射2小時。（5）所有棄置的實驗室生物標本，培養(yǎng)物和被污染的廢棄物，應通過高壓消毒或其他無害化處理。二、生物酶法：1、檢測目的：用于淋球菌的快速檢測2、檢驗原理：淋球菌具有一種特異性酶反應測定系統(tǒng)，當標本中含用此酶時，會發(fā)生生化反應，同時伴有氣泡產(chǎn)生。3、樣本要求：標本為初段尿，用一次性尿杯采集；也可用無菌拭子采宮頸分泌物（女性）或尿道分泌物（男性）；所采的標本應在1小時內(nèi)使用。檢驗方法：1）、取一個本產(chǎn)品所配的反應試管，加約2mL（約在試管刻度下1mm處）標本（若為尿，直接使用；若為分泌物，需用無菌生理鹽水涮洗至試劑盒所配的反應試管中，棄去拭子）。2）、垂直滴加試劑3滴，塞緊管塞，輕輕搖勻。3）、放置5分鐘后（輕度病人可延至10分鐘），再輕輕搖勻一次（若已產(chǎn)生氣泡不必再搖），觀察反應試管內(nèi)尿液上部氣泡形成情況，20分鐘后的結(jié)果無效。5、檢驗結(jié)果的解釋：液面上部形成一層白氣泡或液面上層管壁形成一圈細小的白氣泡，即可判為陽性。液面無氣泡或氣泡較少，未形成一圈，即可判為陰性。6、檢驗方法的局限性：由于淋球菌檢測試劑盒依據(jù)的是淋球菌所具有的特異性酶，生殖道大多數(shù)雜菌不具有這種酶，有些雜菌雖具有這種酶但活性很低，常量情況下不足以引起假陽性反應，但在異常情況下，雜菌數(shù)量大量增加或酶活力明顯增加，都可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果，因此特異性不能保證100%，特別對于女性患者而言，特異性可能更低。女性患者還要注意月經(jīng)期間和白帶過多時，會干擾試劑檢測，出現(xiàn)交叉反應。建議避開經(jīng)期內(nèi)檢測；對于其它體檢標本，采用本試劑檢測呈陽性結(jié)果時，應考慮有無上述情況，并進行細菌培養(yǎng)，根據(jù)病史綜合判斷；部分感染者（包括兒童）是由于受到一些不良的公共衛(wèi)生設施如公共浴池、游泳池和公共便盆等不潔物品污染所致，并無不良性接觸史，因此出現(xiàn)陽性結(jié)果時應慎重對待，必要時可同時進行細菌培養(yǎng)；如果使用血尿標本或嚴重尿蛋白標本可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果，因些也不能使用這類標本。7、注意事項：1）、本產(chǎn)品應由專業(yè)檢測人員使用，在室溫（15-30℃）和相對濕度（65%±20%）更好下操作。2）、滴加試劑時，試劑滴瓶應垂直。3）、臨床的診斷與治療，不能依賴單一檢測結(jié)果，由于本產(chǎn)品為一種快速篩選試劑（非確診試劑），靈敏度較高，因此對于檢測結(jié)果陽性者應考慮口才的性接觸史及臨床癥狀，綜合判斷，建議選用淋球菌培養(yǎng)基做細菌培養(yǎng)進行確認。4）、操作時應帶手套，試劑勿與皮膚、眼接觸，一旦接觸可用大量清水沖洗。5）、每次測試時，應注意反應試管的管塞是否塞緊，否則影響結(jié)果。6）、加入試劑后必須在20分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，否則整個試驗要重做。7）、尿液標本應在1小時內(nèi)測定，否則可能影響結(jié)果，應重新取樣。8）、陽性試驗用過的反應管在處理之前，應打開管塞，否則陽性反應產(chǎn)生的氣體可能迸開管塞，管內(nèi)液體污染實驗室。9）、所用標本及其培養(yǎng)廢棄物應視為有潛在傳染性的物質(zhì)，應按傳染病實驗室操作規(guī)范處理。8、臨床意義：淋病奈瑟菌是常見的性傳播疾病淋病的病原菌，主要通過性接觸直接侵襲感染泌尿生殖道，口咽部及肛門直腸的黏膜。如單純性淋病、盆腔炎、淋菌型結(jié)膜炎。梅毒血清學篩查一、ELISA方法1、檢測目的規(guī)范梅毒螺旋體抗體檢測的操作標準，確保檢測結(jié)果的準確性。2、范圍適用于本實驗室對待檢標本中梅毒螺旋體抗體的檢測。3、檢測原理采用基因表達的TP抗原包被微孔板，加入待測標本，同時加入用HRP標記基因重組TP抗原，當標本中存在抗TP抗體時，該抗TP抗體與包被的TP抗原結(jié)合并與TP抗原-HRP結(jié)合形成TP抗原-TP抗體-TP抗原-HRP復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。4、樣本采集無抗凝靜脈血2ml，標本3000轉(zhuǎn)/分鐘離心，10分鐘。當日不做的標本離心后及時放入冰箱中冷藏（2℃-8℃）。實驗前將標本室溫平衡30分鐘以上。5、操作步驟：1）、平衡：將試劑盒各組份從盒中取出，平衡至室溫(18℃-25℃)。微孔板開封后，取出所需數(shù)量，余者即時以自封袋封存。2）、配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻(如有晶體應充分溶解)，濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。3）、編號：將微孔板條固定于支架，按序編號。4）、加樣：按順序分別在相應孔加入50ul待測樣品及陰、陽性對照血清。5）、加酶：分別在每孔中加入酶標記抗原100ul，輕拍混勻。6）、溫育：置37℃溫育60分鐘。7）、洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干(每次洗滌保持30-60秒的浸泡時間)。8）、顯色：每孔加底物A、B各50ul,輕拍混勻，置37℃暗置20分鐘。9）、終止:每孔加終止液50ul，混勻。10）、測定：用酶標儀測定各孔OD值(雙波長450nm/630nm)。6、結(jié)果判定1）、陰性對照：正常情況下，陰性對照OD值≤0.1。2）、陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD值應≥0.5。(陽性對照OD值若超出正常范圍應舍棄，如果所有陽性對照孔OD值都超出正常范圍，應重復實驗。)3）、臨界值(C.O.)的計算：臨界值(C.O.)=陰性對照均值×2.8(陰性對照孔OD值低于0.05時以0.05計算)4）、結(jié)果判定：樣品OD值S/C.O≥1者為梅毒抗體陽性;樣品OD值S/C.O<1者為梅毒抗體陰性★初試陽性者應重新取樣雙孔復試。7、報告檢測結(jié)果1）、實驗操作人員將最終測定結(jié)果記錄在相應的實驗結(jié)果記錄單中并確認簽字。2）、實驗操作人員提交最終檢測報告。8、注意事項1）、樣本的加樣量使用微量加樣器準確加入。酶標記抗原需用微量加液器加液，并經(jīng)常校對其準確性。加酶標記抗原時，注意勿使微量加液器的加樣頭接觸樣本以避免樣本間相互污染。加試劑前，應先將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。2）、梅毒螺旋體抗體檢測必須符合實驗室管理管控規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定，嚴格防止交叉感染，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物應按傳染物處理。3）、梅毒螺旋體抗體檢定結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。樣本的酶標儀讀值與樣本中抗體的滴度沒有一定的必然聯(lián)系。4）、任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度的抗體存在，所以陰性結(jié)果任何時候不能排除含有梅毒螺旋體抗體暴露和感染的可能。5）、不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯誤結(jié)果。6）、測試劑盒應于2-8℃避光保存，當天剩余試劑及時放回冰箱中保存。二、乳膠層析法1、檢測目的：梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性性傳播性疾病。當病原體侵入人體后，可刺激人體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗梅毒螺旋體的特異性抗體，采用膠體金免疫檢測技術(shù)，能夠快速檢測到人血清{血漿)中的梅毒螺旋體抗體，為臨床提供診斷和預防。適用于性病、高危人群、無償獻血員現(xiàn)場的初篩。2、檢驗原理：本品采用膠體金免疫檢潮技術(shù)和層析原理，定性檢測血清（或血漿)樣本中的梅毒螺旋體抗體。兔抗體可與膠體金標記抗原結(jié)合形成抗原抗體復合物．由于層析作用復臺物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預包被的抗原結(jié)合形成“Au—TPAg—TPAb—TPAg'’夾心物而凝聚顯色。游離的膠體金標記梅毒抗原則在對照線處與預包被的抗TP抗體結(jié)合而凝集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色。

3、樣本要求：1）、靜脈的血清、血漿樣本必須在無菌條件下，并避免樣品溶血。

2）、血清和血漿樣品(EDTA抗凝)收集后7天內(nèi)檢測．樣品須放在2—8℃保存．如果大于7天則須冷凍保存。4、檢驗方法：在進行測試前必須先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑盒和待測樣本恢復至室溫（8—25℃)

1）、從原包裝中取出試劑。在1小時內(nèi)應盡快的使用。

2）、將試劑置于干凈平坦的臺面上，在加樣孔(S)內(nèi)使用微量加樣器加入100ul樣本。

3）、20±2分鐘觀察并記錄試驗結(jié)果。5、結(jié)果判斷：1）、陽性：試劑盒在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測區(qū)的紫紅色條帶降約可見．建議對該樣本重復試驗，并使用其他方法確認。

2）、陰性：試劑盒只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。

3）、失效：不出現(xiàn)紫紅色條帶或僅在檢測區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞或者是樣本中抗體的含量過高。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書。并將待測樣本稀釋后甩新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在。應立即停止使用此批號產(chǎn)品。并與當?shù)毓搪?lián)系。

注意：測試區(qū)(T)內(nèi)的紫紅色條帶可呈現(xiàn)顏色深淺的現(xiàn)象。但是．在規(guī)定的觀察時間內(nèi)．不論該色帶顏色深淺。即使只有非常弱的色帶也應判定為陽性結(jié)果。6、注意事項：1）、本試劑盒僅用于體外診斷試驗。僅用于人血清（漿)．其它體液和樣品可能得不到準確的結(jié)果。

2）、樣本的加樣建議使用微量加樣器準確加入。

3）、試驗環(huán)境應保持一定濕度(60％以下），避風。避免在過高溫度下進行試驗。

4)、試劑從包裝中取出后。應盡快進行試驗，避免放置于空氣中過長時間，導致受潮。

5）、試劑盒可在室溫下保存．謹防受潮。低溫下保存的試劑應平衡至室溫方可使用。

6）、對于那些含有感染源和懷疑含有感染源的物質(zhì)應有合適的生物安全保證程序。下列為有關(guān)注意事項：

（1）帶手套處理樣本和試劑。

(2)不要用嘴吸樣。

(3)不可在處理這些物品時吸煙、進食、喝飲料、美容和處理隱形眼鏡。

(4)用消毒劑對濺出的樣本或試劑進行消毒。

(5)按當?shù)氐挠嘘P(guān)條例來消毒和處理所有樣本、試劑和潛在的污染物。

(6)試劑盒各成份在正當處理和保存的情況下直至效期都保持穩(wěn)定．不能使用過效期的試劑盒。

7）、檢測線顏色的深淺的程度與樣品中抗體的滴度沒有一定的必然聯(lián)系。22分鐘后判讀．結(jié)果無效。

8）、任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度的抗體存在，所以陰性結(jié)果任何時候不能排除臺有梅毒螺旋體暴露和感染的可能。本品檢測陽性樣本．需用其它方法作進一步的確認。三、臨床意義：梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種性傳播疾病(STD),病原體為蒼白密螺旋體(TP),俗稱梅毒螺旋體[1]。由于梅毒只感染人類,因而人是梅毒的唯一傳染源;梅毒螺旋體對人體的黏膜及皮膚具有親和力,故可通過黏膜或有破損的皮膚進入人體,經(jīng)淋巴系統(tǒng)及血液循環(huán),播散至全身,幾乎可以累及全身各器官和組織。人體感染梅毒后4～6月就能在體內(nèi)檢測到特異性抗體。近年來,梅毒在我國的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢〔1〕,選擇敏感性及特異性高的診斷方法,對該病的防治具有重要意義。優(yōu)生五項檢測一、檢測目的規(guī)范風疹病毒IgG抗體、巨細胞病毒IgM抗體和IgG抗體的檢測；血清抗弓形蟲IgM抗體和IgG抗體測定，用于診斷由弓形體病毒引起的疾病，如被攜帶病毒的動物抓、咬后引起的靜脈血管炎，淋巴結(jié)腫大甚至引起腦炎等，另外，孕前檢查對杜絕由弓型體病毒引起的先天性畸形是十分必要的。二、檢測方法采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測IgM與IgG抗體。三、檢測原理將純化風疹病毒抗原（重組的HCMV抗原、弓形蟲體抗原）包被微孔板，加入待測血清，若其中含有抗IgG（IgM）類抗體則與載體上的抗原結(jié)合，再加入HRP標記的抗人IgG（IgM）抗體，加酶底物/色原顯色，所測即為抗IgG（IgM）類抗體。顯色程度與抗體水平成正比。四、實驗條件1、實驗室應具有空調(diào)、離心機、加樣器、水浴箱、酶標儀等設備。2、檢驗人員應經(jīng)過操作前培訓。3、用酶標儀測定。五、操作程序1、樣本采集：無抗凝靜脈血2ml，當日不做的標本4℃保存，必要時-20℃凍存。2、操作步驟：風疹IgG巨細胞IgG 待檢血清1：11稀釋（取100ul標本稀釋液加入反應板孔內(nèi)，弓形蟲IgG 再加10ul待檢血清），同時預留陰、陽性及空白對照共5孔。加入陰性對照3孔，陽性對照1孔，各100ul對照血清。空白對照1孔空置?！?輕輕震蕩后置37℃溫育30分鐘→ 洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入100ul酶標工作液，空白孔除外。置37℃溫育30分鐘→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入底物A、B液各50ul→輕輕震蕩后置37℃溫育10分鐘→每孔加入終止液50ul輕輕震蕩→酶標儀比色巨細胞IgM弓形蟲IgM 待檢血清50ul加入反應孔中，同時預留陰、陽性及空白對照共5孔。加入陰性對照3孔，陽性對照1孔，各50ul對照血清?？瞻讓φ?孔空置?！p輕震蕩后置37℃溫育30分鐘→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入50ul酶標工作液，空白孔除外→置37℃溫育30分鐘→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入底物A、B液各50ul，輕輕震蕩后置37℃溫育15分鐘→每孔加入終止液50ul輕輕震蕩→酶標儀比色3、結(jié)果判定：①、陽性：樣品OD值≥1.1*Cutoff值；②、陰性：R≤0.9*Cutoff值；③、可疑結(jié)果：在±10%Cutoff值范圍內(nèi)為可疑，應重復測定，重測仍可疑，可用其他方法測定。六、參考區(qū)間正常人血清抗體IgG、IgM為陰性。七、質(zhì)量控制1、試劑盒保存在2-8℃，在有效期內(nèi)使用。微孔條密封、干燥保存。檢測前試劑盒到室溫（18-25℃）2、試劑盒勿于高溫、陽光照射環(huán)境下使用。3、標本2-8℃可保存7天，-20℃冷凍可保存至6個月。避免反復凍融標本。4、不同廠家、不同批號試劑不可混用，不得使用過期試劑。5、溶血、脂血、細菌污染血清不宜使用。6、洗滌微孔板時應徹底，孔內(nèi)殘留液體應在吸水紙上拍干，否則會影響測試結(jié)果。7、檢驗人員應經(jīng)過操作前培訓，熟悉判讀結(jié)果；所使用加樣器，酶標儀設備應定期進行校正，以確保實驗數(shù)據(jù)的穩(wěn)定。八、臨床意義1、風疹病毒：風疹病毒的感染對孕婦的危害是很大的，妊娠期間風疹病毒感染可造成死胎、自然流產(chǎn)或嚴重的嬰兒畸形，其感染嚴重程度主要取決于感染發(fā)生在妊娠的哪個時期。如在妊娠前8周內(nèi)感染，自然流產(chǎn)率達20%，第12周幾乎肯定可以導致胎兒感染并出現(xiàn)嚴重后遺癥，其他還可引起心臟和眼的缺陷、視網(wǎng)膜病變、聽力缺損、糖尿病和其它內(nèi)分泌疾病、神經(jīng)性耳聾、青光眼等。母親妊娠早期感染風疹病毒幾乎都可引起胎兒廣泛持續(xù)的多器官感染，導致死胎。（1）如IgGAb陽性而IgMAb陰性，表示近期無風疹病毒感染，并且于曾經(jīng)有過既往感染(IgGAb陽性)，已獲得了保護性抗體，可以不必擔心風疹病毒的侵襲。（2）如IgGAb和IgMAb全部為陰性，說明從未受過風疹病毒的感染，此時如已懷孕，則直至嬰兒出生，你都應該進行風疹病毒血清學監(jiān)測；如雙份血清IgGAb陽性，且滴度升高4倍以上，應該考慮已有風疹病毒的感染。2、巨細胞病毒：（CMV）是一種古老的病毒，幾乎所有的人在一生中某一時期均能感染此病毒。該病毒感染后的臨床表現(xiàn)與患者的個體免疫能力和年齡有關(guān)。孕婦嚴重的宮內(nèi)感染可導致宮內(nèi)死胎和新生兒死亡。新生兒的巨細胞病毒感染可在（1）分娩過程中經(jīng)過母親產(chǎn)道時的接觸而感染，（2）或通過母乳喂養(yǎng)感染，（3）還可通過多次輸血感染。大多數(shù)新生兒感染巨細胞病毒后多無不良反應，但對早產(chǎn)兒和體弱兒有較大的危險，以神經(jīng)肌肉受損為主要特點。幼兒與兒童感染后多無明顯癥狀，偶見肝脾腫大、肝功能異常和呼吸道疾病。青少年與成人感染多無癥狀，少數(shù)可出現(xiàn)發(fā)熱、肝炎、全身淋巴結(jié)腫大或各種疹子，少見的并發(fā)癥有肺炎、心肌炎、心包炎、神經(jīng)炎、神經(jīng)根炎、腦炎；細菌性腦膜炎、血小板減少性紫癜、溶血性貧血和視網(wǎng)膜炎。（4）CMV對使用免疫抑制劑的患者危害較大，可引起肺炎、肝炎及全身性疾病，最終導致死亡。IgG+說明有過既往感染史，現(xiàn)在已有了保護性抗體。IgGab雙份血清滴度4倍以上升高其中任何一項都能說明近期有過感染。IgM-沒有受到過CMV的感染，但對這樣的孕婦來說，應在孕期進行血清學監(jiān)測，避免孕期發(fā)生原發(fā)性感染。3、弓形蟲：弓形體對妊娠有很重要的影響。被弓形體感染的孕婦，不論其有無臨床癥狀，?？赏ㄟ^胎盤將弓形蟲傳給胎兒，從而直接影響胎兒的發(fā)育，使胎兒嚴重致畸，甚至死亡，亦可發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)或增加妊娠合并癥。感染發(fā)生得越早，胎兒受損越嚴重。（1）感染發(fā)生在妊娠頭三個月，多會引起流產(chǎn)、死產(chǎn)、或生下無生活能力的和發(fā)育有缺陷的嬰兒；（2）在妊娠中三個月感染，多會出現(xiàn)死胎、早產(chǎn)和嚴重的腦、眼疾患；（3）在妊娠晚期，因胎兒已逐漸成熟，此時母體如受到感染，胎兒可發(fā)育正常，亦可出現(xiàn)早產(chǎn)或出生后才出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為各系統(tǒng)不同程度的損壞。據(jù)報道，偶見孕期感染弓形蟲的胎兒在出生后數(shù)年甚至成人后才表現(xiàn)出弓形蟲病?？构蜗x的IgG與IgM抗體。若IgGAb陽性而IgMAb陰性，表示此人有過即往感染，若IgGAb和IgMAb同時陽性，表示現(xiàn)在體內(nèi)有弓形蟲感染；若弓形體IgG滴度≥1:512或雙份血清IgGAb滴度4倍以上升高，也可證明現(xiàn)在有弓形蟲感染。如IgG與IgMAb都為陰性，則說明該患者從未有過弓形蟲感染。促甲狀腺素檢測（電化學發(fā)光法）一、檢測用途用免疫學方法定量測定人血清或血漿中的促甲狀腺激素（thyrotropin,TSH）含量。二、檢測原理采用雙抗體夾心法原理，反應分三個步驟進行?！さ?步：50μl標本、生物素化的抗TSH單克隆抗體和釕（Ru）標記的抗TSH單克隆抗體混勻，形成夾心復合物?！さ?步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應結(jié)合到微粒上?！さ?步：反應混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管進行測定?！z測結(jié)果由機器自動從標準曲線上查出。此曲線由儀器通過2點定標校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標準曲線而得。三、樣品的收集和保存血清：按標準常規(guī)方法采集。血漿：肝素鋰、鈉、銨；EDTA-K3；枸櫞酸鈉或氟化鈉/草酸鉀抗凝均可。標本在2－8度可穩(wěn)定7天，-20度可穩(wěn)定1個月。只能凍融一次。含沉淀的標本使用前需離心。不要使用加熱滅活的標本。標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前的溫度應與室溫平衡；放入儀器后應在2小時內(nèi)測定以避免蒸發(fā)的影響。四、檢測步驟孔別校準品孔（ul）待測樣品（ul）S1-S650-待測樣本-50酶結(jié)合物5050輕振混勻，37℃溫育60分鐘（溫育時，請加封板膜）后，棄孔內(nèi)液體，扣干加入洗滌液每孔300ul或注滿，靜置10秒種甩去扣干，重復5次加入底物A液和B液各50ul或1滴/孔，輕振混勻，室溫避光放置0-5分鐘，測發(fā)光值。五、結(jié)果計算對每一個標本，儀器會根據(jù)標準曲線自動計算TSH含量，單位是mIU/l。六、注意事項1、該方法不受黃疸（膽紅素<41mg/dl）、溶血（血紅蛋白<1g/dl）、脂血（脂質(zhì)1500mg/dl）和生物素<60ng/ml干擾。2、接受高劑量生物素（>5mg/天）治療的病人，至少要等最一次攝入生物素8小時后才能采血。3、不受類風濕因子（3250U/ml）干擾，透析病人的標本也無干擾。4、TSH濃度高達1000μIU/ml也不出現(xiàn)鉤狀效應。5、26種常用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾。接受過小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人可能會出現(xiàn)假陽性反應。偶爾可遇到高鏈霉親和素抗體的干擾。6、ElecsysTSH測定結(jié)果應結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進行診斷。7、高于檢測范圍的標本可用通用稀釋液稀釋。建議1:10稀釋。稀釋后的標本TSH含量必須高于10μIU/ml。如用手工稀釋，結(jié)果應乘上稀釋倍數(shù)。如果是機器自動稀釋，機器會自動計算結(jié)果。七、參考范圍電化學發(fā)光法：0.25-7.0mIU/l。八、臨床意義促甲狀腺激素具有促進甲狀腺濾泡上皮細胞增生、甲狀腺激素合成和釋放的作用。增高：原發(fā)性甲狀腺功能減退、伴有甲狀腺功能低下的橋本病、外源性促甲狀腺激素分泌腫瘤（肺、乳腺）、亞急性甲狀腺炎恢復期。攝人金屬鋰、碘化鉀、促甲狀腺激素釋放激素可使促甲狀腺激素增高。減低：垂體性甲狀腺功能低下、非促甲狀腺激素瘤所致的甲狀腺功能亢進，以及攝入阿司匹林、皮質(zhì)激素及靜脈使用肝素。尿HCG檢測（膠體金法）一、實驗原理應用由抗人絨毛膜促性腺激素（HCG）抗體和抗鼠IgG分別固相硝酸纖維膜和膠體金標記的抗HCG單克隆抗體及其他試劑組成，應用層析雙抗體夾心法的原理快速檢測尿液中HCG。顯示結(jié)果明確，操作簡便。用以妊娠早期診斷。二、標本采集1、尿液收集應使用一次性尿杯或潔凈容器，任何隨機尿均適用本實驗。2、標本儲存：如尿液不能及時送檢，應置4℃冰箱，測試前注意復溫。3、標本運輸：室溫運輸4、標本拒收標準：細菌污染三、試劑試劑名稱：藍夢孕知膠體金早早孕檢測試紙試劑儲存條件及有效期：室溫4-30℃避光密封干燥處貯存，切勿冰凍。有效期36個月四、操作步驟1、待測樣品、檢測試紙或其他檢測用材料等均在室溫平衡后取出試紙。2、將測試紙有箭頭的一端插入尿液標本容器中，至少3秒鐘后取出平放，5分鐘內(nèi)觀察顯示結(jié)果。3、測試紙插入尿液深度不可超過MAX標志線。五、結(jié)果判斷與分析陽性：在檢測線位置及對照線位置各出現(xiàn)一條紅色反應線。陰性：僅在對照線位置出現(xiàn)一條紅色反應線。無效：測試紙無紅色反應線出現(xiàn)，或僅在檢測線位置出現(xiàn)一條紅色反應線，表明實驗失敗或者檢測紙失效。六、臨床意義1、本實驗主要用于妊娠的診斷。在受孕2-6天即呈現(xiàn)陽性。2、用于與妊娠相關(guān)疾病和腫瘤的診斷及鑒別診斷。3、過期流產(chǎn)或不完全流產(chǎn)，子宮內(nèi)仍有活胎盤組織時，本實驗仍呈陽性。4、人工流產(chǎn)后，如果仍呈陽性，提示宮內(nèi)尚有殘余胚胎組織。5、宮外孕時，HCG低于正常妊娠，僅有60%陽性。七、操作性能

快速簡便、特異性強、靈敏度高、重復性好。八、方法局限性試紙受潮易失效。九、注意事項1、測試紙從冰箱取出后，先充分復溫再打開包裝，取出試紙后及時扣嚴筒蓋，謹防受潮。2、不要用過期的試劑。3、本品為一次性使用體外診斷試劑。4、當HCG濃度很高時，檢測線顏色可能變淺，屬正?，F(xiàn)象。5、若被測試者仍懷疑有受孕可能，而尿液測試陰性，可在48-72小時后重新收集晨尿再次測定。6、子宮腫瘤、葡萄胎或更年期病人，因尿液中HCG含量較高，可能會出現(xiàn)陽性結(jié)果。7、懷疑異位、異常妊娠時，應結(jié)合其他方法進行診斷。唐氏綜合征產(chǎn)前篩查實驗準備實驗前5分鐘從2~8℃冰箱中取出所用試劑和標本?！咀ⅰ繙蕚浜?7℃水浴或溫箱及酶標儀、洗板機或洗瓶、微量移液器（0~100ul、1000ul各1把，200ul多通道1把）。清洗液稀釋：用純凈水按1：30稀釋濃縮清洗液（即30ml濃縮清洗液+870ml純凈水）標準品稀釋：AFP標準品稀釋：a.向AFP標準品F瓶中加入1.2ml稀釋液，混勻；b.向AFP標準品稀釋管B、C、D、E中分別加入300ul稀釋液；c.從F瓶中取300ul混勻的AFP標準品液體加入E管中，混勻；d.同樣按E→D,D→C,C→B等比稀釋AFP標準品。β-hCG標準品稀釋：（操作同AFP標準品稀釋）【注】試劑常規(guī)保存條件為2~8℃。血清標本制備好后一周內(nèi)檢測可在2~8℃冰箱內(nèi)保存，一周以上檢測需要-20℃保存，但檢測前天晚上需將凍存標本置2~8℃復融（復融檢測僅限一次），切不可直接將凍存標本置熱水浴或溫箱中復融。質(zhì)控品稀釋：分別向AFP質(zhì)控品1、2和β-hCG質(zhì)控品1、2瓶中加入1.2ml稀釋液，混勻。實驗步驟選板：按實驗需要量分別選取AFP抗體和β-hCG抗體包被的微孔板，有序嵌放在板架上；加樣：分別取100ul稀釋好的A（用稀釋液作空白）、B、C、D、E、F標準品和質(zhì)控品1、2加入對應的板孔中（AFP試劑對應AFP板，β-hCG試劑對應β-hCG板；注意更換移液器頭）；向待加樣品的AFP和β-hCG板孔中分別加入80ul稀釋液，然后分別加入20ul血清標本（注意更換移液器頭）；孵育：將微孔板水平裝入密封袋，放入加濕巾的飯盒中，置37℃水浴或溫箱孵育60分鐘；洗板：甩去孔內(nèi)液體，用稀釋好的清洗液加滿各孔，稍停，甩去液體，重復5次，拍干；加酶標抗體：分別取100ulAFP和β-hCG酶標抗體加入對應的AFP和β-hCG各板孔中（最好用多通道移液器，并用專一的加樣槽）；孵育：將微孔板水平裝入密封袋，放入加濕巾的飯盒中，置37℃水浴或溫箱孵育15分鐘；洗板：同4.洗5遍；按需要量1：1混合顯色液A和顯色液B，取混合好的顯色液100ul加入各板孔中（最好用多通道移液器，并用專一的加樣槽）；孵育：將微孔板水平裝入密封袋，放入加濕巾的飯盒中（避光），37℃水浴或溫箱孵育12分鐘；終止反應：取200ul終止液加入各板孔中（最好用多通道移液器，并用專一的加樣槽）；比色：用酶標儀于450nm波長（雙波長酶標儀可以630nm為參考波長）讀取光密度（OD值），比色應于20分鐘內(nèi)完成；分析：將相應數(shù)據(jù)輸入分析軟件分析結(jié)果（參見軟件幫助文件）。注意事項嚴格按標準操作流程（SOP）規(guī)范操作，操作人員事先需經(jīng)專門培訓；所用儀器要求合格，且需定期檢修（如微量移液器、酶標儀要求每6~12個月校準一次，恒溫箱或水浴鍋、冰箱等也要經(jīng)常檢查），保證取量讀數(shù)準確；與標本接觸的器物（如移液器頭、血清管等）要求清潔、消毒并干燥，防止污染；試劑和標本必須按要求妥善保存，防止變質(zhì)失效；拆封后的酶標板需要加干燥劑密封后置2~8℃冰箱保存；溶解后的標準品（F）、質(zhì)控品及酶標抗體若一周內(nèi)再次使用，可置2~8℃冰箱保存；若一周后使用則需-20℃保存，但檢測前天晚上需將凍存物品置2~8℃復融（復融檢測僅限一次），切不可直接將凍存物品置熱水浴或溫箱中復融。四、臨床意義正唐氏綜合征概述唐氏綜合征是人類最常見的一種染色體病,也是最早被確認的染色體病,由于在配子(生殖細胞)形成期或合子期(約在受精后24小時內(nèi))細胞內(nèi)多了一條21號染色體所致。其發(fā)病率1/600～1/800,以中國為例,大約每20分鐘就有1位唐氏兒出生。唐氏兒由于智力嚴重低下,生活完全不能自理,并且攜帶多系統(tǒng)并發(fā)癥,終生無法治愈,因此給家庭帶來沉重的精神和經(jīng)濟負擔。精液檢測一、實驗原理記錄精液量、顏色、透明度、粘稠度和是否液化。顯微鏡檢查包括精子計數(shù)、活動力、活動率、形態(tài)。二、.標本采集1、標本采集前病人準備：必須禁欲（包括遺精和手淫）3～7天。這是因為少于48小時采取的精液，因相距時間太短，精液中精子的數(shù)量可能偏少，容易造成少精癥的假象。如果超過7天，精子活率、活力都有所下降，也可造成弱精子癥的假象。精液檢查應間隔一周或兩周，要進行2～3次檢查。因為一個人精子的產(chǎn)生在一年中，可因季節(jié)、氣候等,諸多因素的影響而有一些變化。2、標本種類：精液3、標本要求：用清潔干燥小瓶收集，不應采用避孕套內(nèi)精液。4、.標本儲存：立即送檢。5.、標本運輸：室溫運輸，冬季需保溫運輸。6.、標本拒收標準：久置標本，污染標本，避孕套內(nèi)標本。三.、操作步驟1、記錄精液量、顏色、透明度、粘稠度和液化時間。2、精子活動率：取新鮮標本混勻后，在溫玻片上用高倍鏡觀察100個精子，計數(shù)活動精子與不活動精子的比例，計算精子活動的百分率。精子活動率=活動精子數(shù)/（活動精子數(shù)+不活動精子數(shù)）×100%3、取上述新鮮濕片標本，觀察精子的活動力，可按下列五級報告：0級：精子完全不活動，加溫后仍不活動；I級：精子運動不良，運動遲緩，原地打轉(zhuǎn)或抖動，向前運動能力差；II級：精子活動較好，運動速度尚可，游動方向不定，呈直線或非直線運動，帶有回旋；III級：為中速運動；IV級：精子活動好，快速直線運動，很快超越一個視野，活潑有力。4、精子計數(shù)：（1）、于試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml，吸液化精液20ml，加入稀釋液內(nèi)搖勻。（2）、充分搖勻后，滴入血細胞計數(shù)池內(nèi)，靜置1-2min，待精子下沉后，以精子頭部作為基準進行計數(shù)。（3）、如精子數(shù)少，可計數(shù)兩個大方格內(nèi)精子數(shù)，總數(shù)乘以10萬即為每毫升精液內(nèi)精子數(shù)，再換算成×109/L報告。（4）、如精子數(shù)多，可計數(shù)5個中方格內(nèi)精子數(shù)，總數(shù)乘以100萬即為每毫升精液內(nèi)精子數(shù)，再換算成×109/L報告。5、精子形態(tài)觀察：革蘭氏或瑞氏染色后用油鏡觀察。異常精子可有：頭部過大、過小、尖細、外緣不齊、雙頭等；中部消失、分枝或腫脹；尾部呈雙尾，卷曲度短或消失（缺尾）。6、細胞：紅、白細胞<5/高倍視野。7、pH：7.2-8.0，平均7.8。8、其它成分：精液中可有結(jié)晶體、卵磷脂小體、淀粉樣體、脂滴、脫落上皮細胞等。四、結(jié)果判斷與分析1、一般性狀檢查（1）、量：正常人一次排精2～5ml。（2）、顏色和透明度：正常剛射出的精液呈乳白色或灰白色，液化后呈半透明乳白色，久未排精者可呈淡黃色。鮮紅色或暗紅色的血精見于生殖系統(tǒng)炎癥、結(jié)核、和腫瘤，黃色膿樣精液，見于精囊炎或前列腺炎。（3）、粘稠度和液化：正常新鮮的精液排出后數(shù)秒呈粘稠膠凍狀，在精液中纖溶酶的作用下30分鐘后開始液化。如果粘稠度降低呈米湯樣，可能是精子數(shù)量減少，見于生殖系統(tǒng)炎癥，精液不凝固見于精囊阻塞或損傷；如果精液1小時后不液化，可能是由于炎癥破壞纖溶酶所致，如前列腺炎，精子不液化可以抑制精子活動力而影響受孕。（4）、酸堿度：pH值。正常精液呈弱堿性pH7.2-8.0，以利于中和酸性的陰道分泌物，pH值小于7或大于8都能影響精子的活動和代謝，不利于受孕。2、顯微鏡檢查。（1）精子存活率：排精后30～60分鐘，正常精子存活率應為80％～90％，精子存活率降低是導致不育的重要原因。（2）精子活動力：正常精子活動力應在III級以上，若>40％的精子活動不良，常是導致男性不育的重要原因。精子活動力低，主要見于精索靜脈曲張、泌尿生殖系統(tǒng)非特異性感染，應用某些藥物如抗瘧藥、雄激素等所致。（3）精子計數(shù)：正常人精子計數(shù)為10～130×109/L，相當于一次排出的精子總數(shù)為400×106～600×106。當精子計數(shù)值<20×106/ml或一次排精總數(shù)<100×106為精子減少，超過致孕極限而導致不育。精液直接涂片或離心沉淀后均未查到精子為無精癥。見于先天性睪丸發(fā)育不全、畸形或后天睪丸損傷和萎縮(如睪丸結(jié)核、炎癥、淋病、垂體或腎上腺功能異常的內(nèi)分泌性疾病等)、輸精管阻塞或是先天性輸精管及精囊缺陷，是導致少精或無精的重要原因，也是導致不育的重要原因。檢查有無精子也是檢查輸精管結(jié)扎術(shù)的效果觀察。結(jié)扎六周后，連續(xù)檢查無精子，說明手術(shù)成功，如果結(jié)扎兩個月后，精液中仍有精子，說明手術(shù)不成功。（4）精子形態(tài)：正常精液中，異常形態(tài)精子應少于10％～15％，如果精液中異常形態(tài)精子數(shù)>20％，將會導致不育，可能是由于精索靜脈曲張、血液中有毒代謝產(chǎn)物、鉛污染等或應用大劑量放射線及使用細胞毒性藥物導致的精子形態(tài)異常。如果精液中發(fā)現(xiàn)>1％的病理性未成熟細胞，包括精原細胞、精母細胞和發(fā)育不完全的精細胞，提示睪丸的曲細精管的生精功能受到藥物或其他因素影響或損傷。如果精子凝集>10％，提示生殖道感染或免疫功能異常。五、注意事項1、出現(xiàn)一次異常結(jié)果，應隔一周后復查，反復查2-3次才能得出比較正確的結(jié)果。2、如低倍鏡、高倍鏡檢查均無精子，應將精液離心沉淀后再涂片檢查，如兩次均無精子，報告“無精子”。六、操作性能：快速簡便。七.方法局限性：易受人為主觀經(jīng)驗不足影響結(jié)果判斷。凝血酶原時間（PT）測定一、檢測原理待測血漿加入過量的含鈣組織凝血活酶，重新鈣化的血漿在組織因子存在時激活因子X成為Xa，后者使凝血酶原轉(zhuǎn)變成為凝血酶，凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，測定凝固所需的時間，即為待測血漿凝血酶原時間（PT）。（PT）測定是外源性凝血系統(tǒng)較理想和常用的篩選試驗。二、樣本采集與保存患者處于休息狀態(tài)下，采空腹靜脈血（急診病人除外）。采血者應技術(shù)熟練，“一針見血”，以防止組織損傷，使外源性凝血因子進入標本。最好不與其它實驗一起采集而使血液停留在針管的時間延長。采完血后，將血液沿管壁緩緩注入試管，避免產(chǎn)生氣泡；然后迅速將血液和抗凝劑輕輕顛倒混勻，避免用力震蕩。全血要在1小時內(nèi)分離血漿。分離血小板血漿時，要在室溫下3000rpm離心10分鐘，室溫下可存放4小時。全部試驗不能在4小時內(nèi)完成，應將血小板血漿分裝在0.5～1.0ml的小試管中快速冷凍，儲存于-20℃冰箱中。冷凍過的標本不能再次冷凍，否則結(jié)果會不準確。冷凍血漿融化時，應將盛冷凍血漿的容器置37℃水浴中，并輕輕搖動，使其迅速融化。三、使用方法1、試劑重建與保存每瓶PT試劑加入2.0ml緩沖液輕搖溶解。注意：試劑溶解后2-8℃可保存7天，室溫（15-25℃）可保存24小時，勿凍結(jié)。2、半自動血凝儀、手工測定。取待測血漿（正常質(zhì)控血漿或正?；旌涎獫{）50vl，37℃孵育3分鐘，加入37℃預溫PT試劑100vl,記錄凝固時間，即為PT值。四、正常值1、以時間表示：10-14秒2、以PTR表示：0.95-1.243、以INR表示；0.94-1.30五、注意事項1、采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，貯備必須使用塑料試管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。2、采血時止血帶不可束縛過緊，并不應超過5分鐘，否則導致凝血及纖溶因子活化。3、血液應立即加抗凝劑，血漿制備必須及時，血漿分離應晝?nèi)コ“?。血漿分離后應盡快測定。4、血漿預溫不宜超過5分鐘。5、PT試劑預溫不可超過15分鐘。6、紅細胞比容超過55%或小于20%時，應調(diào)整抗凝劑用量。7、不宜使用EDTA.Na2、肝素、草酸鹽抗凝，應使用0.109mol/L枸緣酸鈉抗凝。8、-80℃及20℃保存樣本，測定時37℃迅速融化，不可反復融化。9、樣本采集避免溶血及組織液污染。11、測定溫度36.5-38.5℃，過低或高溫度均使PT延長。六、臨床意義PT是外源性凝血系統(tǒng)的篩選實驗。PT延長見于先天性凝血因子II、V、VII、X缺乏癥，低（無）纖維蛋白原血癥，DIC，原發(fā)性纖溶癥，VitK缺乏，肝病，口服抗凝劑、肝素和FDP等。PT縮短見于先天性凝血因子V增多，口服避孕藥，高凝狀態(tài)，血栓性疾病等。凝血酶時間（TT）