細(xì)菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷初診：根據(jù)流行病學(xué)、癥狀、病變等方面的疾病特征，做出初步診斷通過實(shí)驗(yàn)室診斷，確定病原是否是細(xì)菌，病原菌的類型實(shí)驗(yàn)室診斷是在臨床診斷的基礎(chǔ)上進(jìn)行的細(xì)菌病實(shí)驗(yàn)室診斷的主要內(nèi)容病料的采集、保存和運(yùn)送病料采集遵循的原則防止污染、無菌采樣、適時(shí)采樣、適當(dāng)部位病料采集方法（不同病料不同方法）實(shí)質(zhì)臟器、液體材料、其他病料病料的保存和送檢病料中細(xì)菌檢查方法1.防止污染（1）剖檢場所：應(yīng)選擇便于消毒、不滲水的解剖地點(diǎn)，最好有專門的剖檢場所和剖檢臺。（2）剖檢前，動物尸體應(yīng)浸泡消毒。（3）做好個(gè)人防護(hù)：剖檢過程中，注意個(gè)人防護(hù)。（4）剖檢后的器械浸泡消毒后洗刷。1.防止污染1.防止污染動物尸體焚燒爐深埋（投入消毒藥）（5）焚燒或深埋：剖檢后動物尸體和病料焚燒滅菌或消毒深埋。1.防止污染垃圾直接洗刷處理不當(dāng)會引起人和動物疫病的散播動物或人的傳染病目的防止病料被污染措施所用器械和器皿必須滅菌點(diǎn)燃酒精燈注意無菌操作2.無菌采樣細(xì)菌豐富增殖時(shí)期、病料應(yīng)該新鮮：取瀕死動物或剛死亡的動物死亡動物采集病料夏天不宜遲于6～8h，冬天不遲于24h。3.適時(shí)采樣4.適當(dāng)部位第二原則：一般采集正常無菌的部位選擇病料的部位可采用兩個(gè)原則第一原則：根據(jù)疾病的類型和表現(xiàn)采集病變最典型的部位提示：實(shí)際工作中應(yīng)靈活掌握返回4.適當(dāng)部位心包積液4.適當(dāng)部位腦部病變肝臟病變返回如有細(xì)菌檢驗(yàn)條件，可在剖檢后直接做病料的觸片染色和細(xì)菌的分離培養(yǎng)。剖開體腔后，立即采集，置于無菌容器內(nèi)污染或剖開過久的被檢器官：先燒烙表面，然后在燒烙的深部取一塊實(shí)質(zhì)臟器，放在滅菌容器內(nèi)。實(shí)質(zhì)臟器的采集液體病料的采集若需分離血清，則采血后放在滅菌的容器中，擺成斜面，待血液凝固析出血清后，再將血清吸出，置于另一滅菌試管中送檢。膿汁、胸水一般用滅菌的棉棒或吸管吸取放入試管內(nèi)，塞好棉塞送檢。血液可無菌操作從靜脈或心臟采血，然后加抗凝劑（每1ml血液加3.8%枸櫞酸鈉0.1ml）。其他病料的采集

被毛或羽毛要取病變明顯部位，并帶毛根，放平皿。

皮膚要取有病變且?guī)в幸徊糠终Ｆつw的部位。胎兒可將流產(chǎn)胎兒送往實(shí)驗(yàn)室，也可用吸管或注射器吸取胎兒胃內(nèi)容物放入試管送檢。腸道及內(nèi)容物只需選擇病變最明顯的部分，將其中內(nèi)容物去掉，用滅菌水輕輕沖洗后放在平皿內(nèi)。細(xì)菌性病料的保存和送檢做好記錄（畜主姓名、動物種類、地址、發(fā)病情況、欲檢部位及檢驗(yàn)項(xiàng)目、采集時(shí)間等）低溫保存盡快送檢返回二、★病料中細(xì)菌的檢查方法（六類）1、細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查2、細(xì)菌的分離培養(yǎng)3、細(xì)菌的生化試驗(yàn)4、動物試驗(yàn)5、血清學(xué)試驗(yàn)6、分子生物學(xué)方法光學(xué)顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查

★

（一）形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查方法染色標(biāo)本檢查法

單染色法（如美藍(lán)染色法、復(fù)紅染色法等）復(fù)染色法（如革蘭氏染色法、抗酸染色法等）特殊染色法（鞭毛染色法、莢膜染色法、芽孢染色法等）不染色標(biāo)本檢查法（懸滴法、壓滴法）1.不染色標(biāo)本檢查法A.壓滴法B.懸滴法用途：主要用于細(xì)菌動力的檢查方法：返回2.染色標(biāo)本檢查法

單染色法

復(fù)染色法

特殊染色法（一）形態(tài)學(xué)檢查——1.光鏡

單染色法復(fù)染色法常用方法

美藍(lán)染色法、復(fù)紅染色法等革蘭氏染色法、抗酸染色法等可觀察的細(xì)菌特點(diǎn)大小、形態(tài)、排列及及莢膜和芽孢，無法確定染色特性

大小、形態(tài)、排列及莢膜和芽孢、染色特性

（2）染色標(biāo)本檢查法單染色法和復(fù)染色法的不同特點(diǎn)單染色法例：如美藍(lán)染色法涂片干燥固定滴加美藍(lán)染色液吸干、鏡檢美藍(lán)染色結(jié)果復(fù)染色法又稱鑒別染色法例：革蘭氏染色法葡大腸桿菌95%乙醇革蘭氏碘液草酸銨結(jié)晶紫石炭酸復(fù)紅水洗革蘭氏染色過程G-菌紅色

G+菌藍(lán)紫色革蘭氏染色結(jié)果革蘭氏（？）菌革蘭氏（？）菌革蘭氏染色結(jié)果混合菌的革蘭氏染色結(jié)果特殊染色法細(xì)菌的莢膜、鞭毛、芽孢用普通染色法均不易著色普通染色時(shí)，芽孢呈“空泡”狀，莢膜呈“透明圈”，鞭毛則必須用特殊染色法才能觀察到返回普通染色鞭毛不著色

透射電子顯微鏡電子顯微鏡

用來觀察細(xì)菌等微生物的超微結(jié)構(gòu)，一般不用于臨床診斷電子顯微鏡光鏡和電鏡下的細(xì)菌比較大腸桿菌葡萄球菌光學(xué)顯微鏡鏡檢電子顯微鏡鏡檢返回藥敏試驗(yàn)

細(xì)菌分離培養(yǎng)對細(xì)菌病診斷的意義培養(yǎng)基中有無細(xì)菌生長推斷是否為細(xì)菌病

菌落的特征用以判斷細(xì)菌種類為進(jìn)一步的生化鑒定、血清學(xué)鑒定及動物試驗(yàn)獲得純培養(yǎng)（二）分離培養(yǎng)

分離培養(yǎng)方法

通常用平板培養(yǎng)基對細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性選擇適合目標(biāo)菌生長培養(yǎng)基。相同條件培養(yǎng)的相同培養(yǎng)基上，不同細(xì)菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同。有的細(xì)菌在鮮血瓊脂平板上形成溶血環(huán)

也可采用選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基，以起到抑制雜菌或快速鑒別的效果，比如腸道桿菌科可選擇麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂等。

分離培養(yǎng)結(jié)果不同細(xì)菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同分離培養(yǎng)結(jié)果分離培養(yǎng)結(jié)果有的細(xì)菌在鮮血培養(yǎng)基上有β-溶血現(xiàn)象返回鑒別培養(yǎng)基結(jié)果伊紅美藍(lán)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基大腸桿菌菌落返回

（三）細(xì)菌的生化試驗(yàn)糖類分解試驗(yàn)糖分解（發(fā)酵）試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)等蛋白質(zhì)類分解試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)等其他類型試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)等

根據(jù)細(xì)菌對不同底物的利用情況不同鑒別細(xì)菌的一系列試驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)—糖類分解試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)MR試驗(yàn)VP試驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)—蛋白質(zhì)類分解試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)檢驗(yàn)時(shí)，根據(jù)可疑細(xì)菌的生化特性選擇特定的一組生化試驗(yàn)，將結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比，以確定病原菌的種類例：不同種沙門氏菌生化鑒定注意：進(jìn)行生化試驗(yàn)的細(xì)菌必須是純培養(yǎng)物生化試驗(yàn)雞白痢沙門氏菌雞傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌返回（四）動物試驗(yàn)將分離鑒定的細(xì)菌液接種到動物體內(nèi)，觀察動物發(fā)病情況，進(jìn)一步確認(rèn)病原或者將可疑病料處理液接種敏感動物，以觀察典型表現(xiàn)（四）動物試驗(yàn)—常用的接種途徑灌口肌肉注射腹腔注射皮下注射腦內(nèi)接種靜脈注射返回抗原+抗體抗原抗體復(fù)合物可見反應(yīng)用已知抗體檢測動物體內(nèi)的病原菌用已知的病原菌抗原檢測動物血清中的抗體臨床診斷中，可用于細(xì)菌的血清分型、快速診斷或大群檢疫。例：雞白痢的檢疫

（五）血清學(xué)試驗(yàn)雞白痢檢疫——全血平板凝集試驗(yàn)1、加一滴抗原2、加一滴雞的全血3、將抗原和血液混勻4、靜置2min,觀察結(jié)果（五）血清學(xué)試驗(yàn)——舉例（雞白痢檢疫）返回（六）分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)技術(shù)對病原菌的快速診斷和不能人工培養(yǎng)的細(xì)菌的探索發(fā)揮巨大的作用。

PCR技術(shù)、核酸分子雜交技術(shù)等GO二、細(xì)菌病實(shí)驗(yàn)室檢查總結(jié)病料采集動物剖檢分離培養(yǎng)觸片染色鑒別染色純培養(yǎng)生化鑒定動物試驗(yàn)血清學(xué)鑒定分子生物學(xué)檢測舉例大腸桿菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷大腸桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷

1.剖檢（采集病料）2.纖維素滲出物的涂