農(nóng)業(yè)部2122號公告一5—2014轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測品質(zhì)改良大豆MON87769及其衍生品種定性PCR方法I農(nóng)業(yè)部2122號公告一5—20141農(nóng)業(yè)部2122號公告—5—2014品質(zhì)改良大豆MON87769及其衍生品種定性PCR方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因品質(zhì)改良大豆MON87769轉(zhuǎn)化體特異性定性PCR檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因品質(zhì)改良大豆MON87769及其衍生品種，以及制品中MON87769轉(zhuǎn)化體成分的定性PCR檢測。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水農(nóng)業(yè)部1485號公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測DNA提取和純化農(nóng)業(yè)部2031號公告—8—-2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法農(nóng)業(yè)部2031號公告—19—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抽樣NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求Lectin基因Lectingene2lec-1672F:5'-GGGTGAGGATAGlec-1881R:5'-GCGATCGAGTAGTMON87769-F:5'-CCGGACATGAAGCCAMON87769-R:5'-TCCTTGGAGGTCGT37.5.1.2.1每個(gè)試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)TaqDNA聚合酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達(dá)到7.5.2對照PCR反應(yīng)4農(nóng)業(yè)部2122號公告一5—2014增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。將回收的PCR產(chǎn)物克隆測序，與轉(zhuǎn)基因品質(zhì)改良大豆MON87769轉(zhuǎn)化體特異性序列(參見附錄A)進(jìn)行比對，確定PCR擴(kuò)增的DNA片段是否為目的DNA片段。8.2.1大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和MON87769轉(zhuǎn)化體特異性序列均得到擴(kuò)增，且擴(kuò)增片段大小與預(yù)期片段大小一致，表明樣品中檢測出MON87769轉(zhuǎn)化體成分，表述為“樣品中檢測出轉(zhuǎn)基因品質(zhì)改良大豆農(nóng)業(yè)部2122號公告—5—20141CCGGACATGAAGCCAT51CAACTTGCTAATTTTGGAAAAGA201TTTGATTGTTTGAAGAA