SNT 3730.7-2013 食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法 第7部分水牛成分檢測 實時熒PCR法_第1頁
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中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法第7部分：水牛成分檢測實時熒光PCR法I——第1部分：貂成分檢測實時熒光PCR法；——第2部分：狗成分檢測實時熒光PCR法；——第5部分：馬成分檢測實時熒光PC——第8部分：豬成分檢測實時熒光PCR法。本部分為SN/T3730的第7部分。1食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法第7部分：水牛成分檢測實時熒光PCR法SN/T3730的本部分規(guī)定了食品和飼料中水牛成分的實時熒光PCR檢測方法。本部分適用于食品和飼料中水牛成分的定性檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27403實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學檢測3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監(jiān)控整個PCR擴增過程。每個反應管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。4縮略語下列縮略語適用于本文件。PCR:聚合酶鏈式反應(polymerasechainrDNA:脫氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)CTAB:十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrithylammoniumbromide)Tris:三(羥甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)Tag:水生棲熱菌(Thermusaquat5方法提要2序列(5'-3')目的基因水牛線粒體ATPase8基因6.970%乙醇。6.10CTAB提取緩沖液：20g/LCTAB,1.4mol/LNaCl,0.1mol/LTris-HCI,Na?EDTA,pH8.0。~0.4mmol/LdUTP、400nmol/LROX染料(某些熒光PCR儀不需要ROX校正)。如果具有等效的3效的DNA提取方法提取模板DNA。使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計分別檢測260nm和280nm處的吸光值A(chǔ)zo和Az。c=A×N×50/1000410結(jié)果判定及表述10.1結(jié)果判定在符合第9章的情況下，被檢樣品進行檢測時：a)如Ct值≤35.0,則判定為被檢樣品陽性，擴增靶標序列參見附錄A;b)如Ct值≥40.0,則判定為被檢樣品陰性；c)如35.0<Ct值<40.0,則重復一次。如再次擴增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽性；如再次擴增后Ct值≥40.0,則判定被檢樣品陰性。10.2.1結(jié)果為陽性者，表述為“

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