第1學(xué)時(shí)燒傷病人圖片治愈后圖片這只老鼠身上的“人耳”是由我國(guó)科學(xué)家曹誼林專家運(yùn)用生物技術(shù)培養(yǎng)出來的.多利羊誕生于1996年7月5日，1997年初次向公眾披露。它被《科學(xué)》雜志評(píng)為1997年世界十大科技進(jìn)步的第一項(xiàng)，也是當(dāng)年最引人注目的國(guó)際新聞之一。2.2動(dòng)物細(xì)胞工程單克隆抗體等

動(dòng)物細(xì)胞工程慣用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合是其它動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出有關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)的理論根據(jù)（原理）？

細(xì)胞增殖一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)討論：2、如何將組織分散成單個(gè)細(xì)胞？1、為什么將取出的組織分散成單個(gè)細(xì)胞？分散成單個(gè)細(xì)胞后培養(yǎng)，細(xì)胞易獲得所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其代謝廢物容易排出；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難，因此，這些細(xì)胞在體外長(zhǎng)時(shí)間的生存和生長(zhǎng)就較困難。同時(shí)，分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，可使得在細(xì)胞水平操作的其它技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。胰蛋白酶或膠原蛋白酶4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？3、細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶分散細(xì)胞，闡明細(xì)胞間的物質(zhì)重要是什么成分？用胃蛋白酶能夠嗎？重要是蛋白質(zhì)。不能用胃蛋白酶，胃蛋白酶的適宜pH約為2，當(dāng)pH不不大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH約為7.2～8.4。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的消化。胰蛋白酶除了能夠消化細(xì)胞間的蛋白外，長(zhǎng)時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用。因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。2.動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性：1）細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上對(duì)培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿規(guī)定：內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。2）接觸克制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面互相接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖。定義：人們普通將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。胰蛋白酶解決取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)①原代培養(yǎng)3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程圖示為什么切取動(dòng)物組織塊進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常選擇胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織？由于這些細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分化程度低，更容易培養(yǎng)。當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞處在接觸克制后,需要重新用胰蛋白酶等解決,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程普通稱為傳代培養(yǎng).（分瓶培養(yǎng)的過程）②傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞無限代細(xì)胞50代細(xì)胞細(xì)胞株細(xì)胞系原代細(xì)胞。。。。。遺傳物質(zhì)不變遺傳物質(zhì)已變化多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)，思考并討論下列問題：1、體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境2、體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？無菌、無毒的環(huán)境課本46頁討論4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1）無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定時(shí)更換培養(yǎng)液）2）營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3）溫度和PH溫度：36.5±0.5度,pH值：7.2-7.44）氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的重要作用是維持培養(yǎng)液的pH。？可以補(bǔ)充培養(yǎng)液中缺乏的物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的比較：植物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)比較項(xiàng)目原理培養(yǎng)基成果培養(yǎng)目的細(xì)胞的全能性細(xì)胞的增殖固體培養(yǎng)基；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；激素液體培養(yǎng)基；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；動(dòng)物血清培養(yǎng)成植株培養(yǎng)細(xì)胞群體快速繁殖，培養(yǎng)無病毒植株等獲得細(xì)胞的產(chǎn)物或細(xì)胞等知識(shí)深化5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2.應(yīng)用于基因工程重要用于作為受體細(xì)胞3.檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性4.細(xì)胞的生理、藥理、病理研究如用于篩選抗癌藥品想一想運(yùn)用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐步受到限制，分化潛能逐步變?nèi)酢?、如何才干使動(dòng)物體細(xì)胞體現(xiàn)出全能性呢？1、離體的植物組織或細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下可發(fā)育完整的植株，那么，與否能用類似的辦法，使動(dòng)物的細(xì)胞發(fā)育成一種完整的個(gè)體呢？例如，能不能用高產(chǎn)奶牛的一種體細(xì)胞，哺育出一頭高產(chǎn)奶牛呢？二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、定義：動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一種細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一種已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一種新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最后發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.3、分類：

胚胎細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植。胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易。動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難2、原理：動(dòng)物細(xì)胞核含有全能性4、體細(xì)胞核移植過程---動(dòng)物克隆---無性繁殖1.）克隆羊多利哺育過程：黑面綿羊去核卵母細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期重組胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利◆特別注意：克隆動(dòng)物性狀與供體動(dòng)物完全同樣嗎？不可能！由于：①供體動(dòng)物只提供細(xì)胞核，而細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)（如線粒體DNA）來自于受體卵母細(xì)胞.②生物的性狀不僅與遺傳物質(zhì)有關(guān)，還受環(huán)境的影響。供體受體代孕受體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)課本50頁思考與討論1997年，美國(guó)威斯康星州的一種奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，發(fā)明了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。現(xiàn)在世界各國(guó)高產(chǎn)奶牛場(chǎng)奶牛，年平均產(chǎn)奶量普通為十幾噸，而我國(guó)奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3～4t。如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何獲得更多的高產(chǎn)奶牛？

去核卵母細(xì)胞供體細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵母細(xì)胞培養(yǎng)思考：克隆牛的生殖方式是什么？無性生殖高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B電刺激使兩細(xì)胞融合供體細(xì)胞去核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵母細(xì)胞培養(yǎng)高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B電刺激使兩細(xì)胞融合討論：1、為什么受體細(xì)胞是卵母細(xì)胞？①細(xì)胞體積大，易操作；②細(xì)胞質(zhì)中含有增進(jìn)細(xì)胞核全能性體現(xiàn)出來的物質(zhì)。胚胎移植供體細(xì)胞去核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C卵母細(xì)胞培養(yǎng)高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B電刺激使兩細(xì)胞融合討論：2、為什么不取供體細(xì)胞核進(jìn)行核移植操作而是直接將供體細(xì)胞整個(gè)注入去核卵母細(xì)胞中？確保供核不被破壞，使所得個(gè)體的性狀更符合供體。供體細(xì)胞去核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵母細(xì)胞培養(yǎng)高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B電刺激使兩細(xì)胞融合討論：為使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要運(yùn)用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞。3、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？5、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1）在畜牧業(yè)中能夠加速家畜遺傳改良的進(jìn)程2）保護(hù)瀕危物種3）醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植6、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題2）絕大多數(shù)克隆動(dòng)物還存在健康問題?；温矢?、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。1）成功率低3）克隆動(dòng)物食品的安全性問題存在爭(zhēng)議。第2學(xué)時(shí)1、動(dòng)物細(xì)胞工程慣用技術(shù)手段有哪些？2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是什么？復(fù)習(xí)3、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的原理是什么？4、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程。4、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程：供體體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)去核MⅡ期發(fā)育重組胚胎代孕動(dòng)物與供體遺傳物質(zhì)基本相似的動(dòng)物注入①②③④⑤體細(xì)胞去核卵母細(xì)胞細(xì)胞融合重組細(xì)胞胚胎移植2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1970年，有兩位科學(xué)家做了一種人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子是運(yùn)動(dòng)的。也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一種細(xì)胞的過程。1、過程：含不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞雜交細(xì)胞辦法？物理方法：電激化學(xué)方法：聚乙二醇（PEG)生物方法:滅活的病毒（如仙臺(tái)病毒）一、動(dòng)物細(xì)胞融合不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞慣用誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行

分裂有絲滅活的病毒2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性3、意義：突破了有性雜交辦法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。4、用途：制備單克隆抗體一、動(dòng)物細(xì)胞融合思考1、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？二、單克隆抗體思考２、一種Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多個(gè)抗體嗎？通過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)只能分泌一種抗體抗原動(dòng)物體刺激漿細(xì)胞抗體抗體不純產(chǎn)量低、純度低、特異性差?？乖患兯伎?、簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？思考4、這種辦法獲得的抗體有什么缺點(diǎn)？思考6：體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎?如何解決這個(gè)問題？不能思考5：如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？體外培養(yǎng)單個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體。設(shè)計(jì)方案：雜交細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）B淋巴細(xì)胞（能無限增殖）含有兩個(gè)親本的特性，培養(yǎng)這種雜交細(xì)胞，即能快速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。1、過程：培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞滅活病毒融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞(B-瘤細(xì)胞)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體給小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞思考1、注射抗原的目的是什么？思考2、誘導(dǎo)其融合的辦法有哪些？多個(gè)融合細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞滅活病毒融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞(B-瘤細(xì)胞)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體給小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞思考3、在此過程中需篩選幾次？篩選的目的是什么？?jī)纱危谝淮魏Y選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞滅活病毒融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞(B-瘤細(xì)胞)克