T/CSBMI 3 4本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：李丹、陳益平、梁潔、袁暾、劉成虎、方菁嶷Ⅱa因子活性和含量試驗(yàn)方法的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)十分必要，有助于規(guī)范和監(jiān)督醫(yī)療器械涂層市場(chǎng)的健康持續(xù)發(fā)展，最終推動(dòng)整個(gè)醫(yī)療器械行業(yè)和人類健康產(chǎn)業(yè)的高品質(zhì)發(fā)展。1醫(yī)療器械表面肝素抗Xa/Ⅱa因子活性和含量試驗(yàn)方法3.13.2器械表面的肝素結(jié)合抗凝血酶Ⅲ（ATIII）抑制Xa/Ⅱa因子活性的能力，用I3.3件提供了用于表征帶肝素涂層醫(yī)療器械表面肝素抗Xa/Ⅱa因子活性和肝素含量的檢測(cè)方法，其中抗Xa/5.1.1原理2肝素與AT-Ⅲ形成復(fù)合物，抑制過(guò)量添加的Xa/Ⅱa因子的活性，發(fā)色底物與剩余Xa/Ⅱa因子特異性結(jié)合，水解釋放對(duì)硝基苯胺（pNA），在405nm處的吸光度與反應(yīng)體系中的肝素濃度成反比。5.1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作立即測(cè)量反應(yīng)液在405nm處的吸光度值，以肝素鈉濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)5.1.2.2試驗(yàn)樣品測(cè)試取樣品置于試管中，參照5.1.2.1步驟，將樣品的吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到樣品的肝素濃5.2.1.2試驗(yàn)步驟將肝素鈉用生理鹽水或PBS緩沖液在0μg/mL～30μg/mL范圍內(nèi)配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后加入甲苯胺藍(lán)溶液（0.0020.0002w/v室溫下孵育3min～10min后測(cè)定甲苯胺藍(lán)最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度值。以肝素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制作取帶肝素涂層和無(wú)涂層的同種材料樣品置于試管中，然后參照5.2.1.2.1步驟，將測(cè)試的吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到樣品的肝素濃度。應(yīng)進(jìn)行3然后加入3-甲基-2-苯并噻唑酮腙（MBTH）與之發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，最后產(chǎn)生具有藍(lán)色的MBTH偶聯(lián)物，反應(yīng)5.2.2.2試驗(yàn)步驟氯化鐵溶液后，測(cè)試在628nm～632nm處的吸光度。以肝素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲取帶肝素涂層和無(wú)涂層的同種材料樣品置于試管中，然后參照5.2.2.2.1步驟，將測(cè)試的吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到樣品的肝素濃度。應(yīng)進(jìn)行a)樣品的識(shí)別；4sulfaminohexoseinheparins