第十單元生物技術(shù)實(shí)踐

專(zhuān)題24微生物的利用

挖命題

【考情探究】

5年考情

考點(diǎn)考向要求預(yù)測(cè)熱度

考題示例素養(yǎng)要素難度

2018課標(biāo)全國(guó)II,37,15

1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基與微生物的純化中★★★

實(shí)驗(yàn)與分科學(xué)思維、

探究2018課標(biāo)全國(guó)I,37,15社會(huì)責(zé)任

2微生物的分離與計(jì)數(shù)微生物的分離與計(jì)數(shù)中★★★

分

分析解讀本專(zhuān)題內(nèi)容一直是高考的命題熱點(diǎn)，考查內(nèi)容集中在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、特定微生物數(shù)量的

測(cè)定方法、培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用等;題目情境貼近生活或科技進(jìn)展,但試題答案落腳于教材主干知識(shí)。

預(yù)計(jì)2020年高考中這種命題趨勢(shì)還將繼續(xù)存在。復(fù)習(xí)時(shí)應(yīng)注意對(duì)各種技術(shù)的系統(tǒng)理解和橫向?qū)Ρ龋蓪⒐?/p>

酒、果醋與泡菜的制作、特定微生物的分離純化等實(shí)踐操作構(gòu)建過(guò)程模型,以加深對(duì)相關(guān)技術(shù)的記憶和理解。

【真題典例】

(2017課標(biāo)全國(guó)I,37,15分)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH),供植物

吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生_________，能分

一。自養(yǎng)生物能以CQ為礁源，而能分聃東

解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物co,作為碳源，原國(guó)是二22221二「但向'用

去的佃西是弁芥生物

葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄藤的主要作用是________(答出兩點(diǎn)即可)。

為絳選可分科東多.的的函，缸制語(yǔ)界坂時(shí)

(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇_______(填“尿素”莊逸持儀樂(lè)彖分解商能*利用，而作樂(lè)春分

料萌不能利用的氮源

“NH4NOJ或'“尿素+NHPOJ)作為氮源二不選擇其他兩組的原因?yàn)?/p>

“QKH,PO]N%HPQ具有兩支“身份”：無(wú)機(jī)拉

(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH、PO,和Na,HPO/,其作用有_________的孑提修無(wú)機(jī)管養(yǎng)；H/。了叫P%枸我

________________(答出兩點(diǎn)即可)。pH傲療不

?命題技巧?易錯(cuò)易混?參考答案

(1)將教材中有關(guān)微生物培養(yǎng)和利用的基礎(chǔ)(1)不能正確區(qū)別不同微生物的碳源和氮源(I)版酶分傕尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，

知識(shí)巧妙組合和應(yīng)用，突出主干知識(shí)的考查，(2)不能全面掌握葡萄糖和無(wú)機(jī)鹽在微生不能利用CO2來(lái)合成存機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)

提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料

重視生物基礎(chǔ)知識(shí)和技能的應(yīng)用入普斗^^作用

(2)設(shè)問(wèn)注重基礎(chǔ)，指向明晰，考杳注重能?核心系養(yǎng)(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3,能分

I力，立意精準(zhǔn)，貼近高中生學(xué)習(xí)實(shí)際(1)科學(xué)思維：理解氮源和無(wú)機(jī)鹽在微生解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能

|利用NH4NO3,不能起到篩選作用

?核心考點(diǎn)物培養(yǎng)中的作用,并作出應(yīng)用性判斷

I(1)微生物的分離和培養(yǎng)(2)科學(xué)探究：能根據(jù)預(yù)設(shè)目標(biāo)，設(shè)計(jì)篩選(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖

I(2)培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇極目的菌的方案，并運(yùn)用科學(xué)術(shù)語(yǔ)報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定

?試題精析

■詳解參見(jiàn)P363

破考點(diǎn)

考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

【考點(diǎn)集訓(xùn)I】

考向培養(yǎng)基與微生物的純化

1.(2019屆吉林實(shí)驗(yàn)中學(xué)第三次月考,41,15分)下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，據(jù)此

回答下列問(wèn)題：

KH2P。4Na2HP04MgS04-7H20尿素葡萄糖瓊脂

14g2.1g0.2g10g10.0g15.0g

將上述物質(zhì)溶解后,用蒸儲(chǔ)水定容到1000mLo

⑴從作用上看,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基,提供氮源的物質(zhì)是,細(xì)菌能利用該氮源是由于體

內(nèi)能合成酶。

⑵在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí),還需在培養(yǎng)基中加入指示劑,若指示劑變,

說(shuō)明有目的菌株存在。

⑶為了測(cè)定微生物的數(shù)量,接種時(shí)應(yīng)采用法，某同學(xué)在4個(gè)培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)

為106的土壤樣液0.1吐,培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則每升原土壤樣液中上述微生物

的數(shù)量為個(gè),測(cè)定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)（填“低”“高”或“基本一致”）。

答案⑴選擇（1分）尿素K（2）酚紅紅（3）稀釋涂布平板1.6X1012低

2.（2019屆寧夏育才中學(xué)第二次月考,37,15分）為了調(diào)查銀川市自來(lái)水水源地的水質(zhì)情況,某研究小組對(duì)該

地自來(lái)水水樣中的大腸桿菌進(jìn)行了測(cè)定,請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

⑴該小組采用平板劃線(xiàn)法分離提純水樣中的細(xì)菌,劃線(xiàn)時(shí)在培養(yǎng)基上共畫(huà)了4個(gè)區(qū)域，則需要次

灼燒接種環(huán)。在第二次及以后劃線(xiàn)時(shí)，總是從上一次的末端開(kāi)始劃線(xiàn),這樣做的目的

是?

⑵在純化菌種時(shí)，所用的培養(yǎng)基都需要在接種前用法進(jìn)行滅菌。將1mL水樣稀釋1

000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液,經(jīng)適宜條件下培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為

51、50和49。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)

在另一平板上接種作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

⑶菌種需臨時(shí)保藏時(shí),要先將菌種接種到試管的培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)

成后,將試管放入冰箱中保藏。但此方法存在的缺點(diǎn)

是O

⑷在培養(yǎng)時(shí),需將培養(yǎng)皿倒置并放在中。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行

處理后才能丟棄。

答案（1）5（1分）將聚集的菌種逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌種的表面（2）高壓蒸汽滅菌5.0X108等量

的無(wú)菌水（3）固體斜面（1分）40（1分）保存的時(shí)間不長(zhǎng),菌種容易被污染或產(chǎn)生變異⑷恒溫培養(yǎng)

箱（1分）滅菌（1分）

考點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)

【考點(diǎn)集訓(xùn)】

考向微生物的分離與計(jì)數(shù)

1.（2019屆湖北華中師大附中高三上學(xué)期期中,37,15分）為更好地解決冬季污水處理廠(chǎng)氨氮去除率低的問(wèn)

題，某研究小組嘗試從海水中篩選在低溫下能高效去除氨氮的硝化細(xì)菌。將采集到的海水樣本加入液體培養(yǎng)

基A（其氮源為氨態(tài)氮），放在24P的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天,然后取少量培養(yǎng)液在固體培養(yǎng)基上涂布,得到三種

形態(tài)、顏色均不相同的單菌落?；卮鹣铝袉?wèn)題：

⑴液體培養(yǎng)基A應(yīng)選用的滅菌方法是（填“高壓蒸汽滅菌法”或“干熱滅菌法”），不選另外

一種的原因是.

⑵在配制培養(yǎng)基A時(shí)，對(duì)碳源的要求是（填“提供有機(jī)碳源”或“不提供碳源”），理由

是O

⑶最后分離得到的單菌落有三種,其形態(tài)、顏色各不相同,表明硝化細(xì)菌

⑷該研究小組在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,已經(jīng)獲得了高效去除氨氮的硝化細(xì)胞,則需要經(jīng)過(guò)處理，才能

篩選出符合要求的能高效去除氨氮的硝化細(xì)菌。

答案（1）高壓蒸汽滅菌法（2分）干熱滅菌法針對(duì)耐高溫需要保持干燥的物品,若選干熱滅菌法會(huì)使培養(yǎng)

基中的水分蒸發(fā)（3分）（2）不提供碳源（2分）硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用，為自養(yǎng)生物（3分）（3）存

在不同的種類(lèi)（3分）（4）低溫（2分）

2.（2019屆四川南充一診,37,15分）有機(jī)磷農(nóng)藥是用于防治植物害蟲(chóng)的含磷有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生

產(chǎn)中,有時(shí)會(huì)造成瓜果蔬菜等食品農(nóng)藥殘留超標(biāo)，不少品種對(duì)人、畜的毒性很強(qiáng),人誤食后如不及時(shí)醫(yī)治就會(huì)

危及生命。某班同學(xué)欲從土壤中分離高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

⑴為了獲得能降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物菌種，可在被有機(jī)磷農(nóng)藥污染的土壤中取樣,并在含有碳源、氮源及

等的選擇培養(yǎng)基上添加適量的進(jìn)行選擇培養(yǎng)。

⑵在制備固體培養(yǎng)基時(shí)需加入的常用凝固劑是。若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)PH,則應(yīng)在滅菌之（填

“前”或“后”）調(diào)節(jié)。

⑶該小組在接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間,這樣做的目的是

⑷若要測(cè)定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù),既可在顯微鏡下用直接計(jì)數(shù)，也可選用

法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目。

⑸將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1L含20mg有機(jī)磷農(nóng)藥的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)（培

養(yǎng)液中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充裕、條件適宜），觀(guān)察從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到微生物停止生長(zhǎng)所用的時(shí)間，甲、乙、丙分別為

32小時(shí)、45小時(shí)、16小時(shí)，則應(yīng)選擇微生物（填“甲”“乙”或“丙”）作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，

理由是O

答案（1）水和無(wú)機(jī)鹽有機(jī)磷農(nóng)藥（2）瓊脂前（3）檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格⑷血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

稀釋涂布平板（5）丙微生物丙分解有機(jī)磷農(nóng)藥的能力比甲、乙強(qiáng)

過(guò)專(zhuān)題

【五年高考】

A組統(tǒng)一命題?課標(biāo)卷題組

1.（2018課標(biāo)全國(guó)I,37,15分）將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過(guò)濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸

出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。

回答下列問(wèn)題：

（1）M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制的生長(zhǎng),加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于

________培養(yǎng)基。

（2）M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有

（答出兩點(diǎn)即可）.氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與合成的生物大分子有（答出兩點(diǎn)即可）。

⑶若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長(zhǎng)出菌落后可通過(guò)加入顯色劑篩選出能

產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是

⑷甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:

甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110,140和149,取平均值133;

乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值1240

有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是。

答案⑴細(xì)菌選擇⑵碳源、無(wú)機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸

⑶碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰?形成透明圈⑷乙同學(xué)的結(jié)果中,1個(gè)平板

的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差

2.（2018課標(biāo)全國(guó)II,37,15分）在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。

回答下列問(wèn)題：

⑴在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具（填“可以”或“不可以”）放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干

熱滅菌。

⑵牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)

是O

⑶密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線(xiàn)照射消毒,其原因是紫外線(xiàn)能。在照射前,適量噴

灑，可強(qiáng)化消毒效果。

⑷水廠(chǎng)供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)（填“氨氣”“乙醇”或“高鎰酸鉀”）消毒的。

⑸某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因

是O

答案（1）可以（2）在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少⑶破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液（4）氯氣

⑸未將鍋內(nèi)冷空氣排盡

3.（2018課標(biāo)全國(guó)III,37,15分）回答下列與酵母菌有關(guān)的問(wèn)題：

⑴分離培養(yǎng)酵母菌通常使用（填“牛肉膏蛋白月東”“MS”或“麥芽汁瓊脂”）培養(yǎng)基，該培

養(yǎng)基應(yīng)采用滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線(xiàn)接種在平板上,培養(yǎng)一段時(shí)間后可觀(guān)察到菌落,菌落

的含義是。

⑵酵母菌液體培養(yǎng)時(shí)，若通入氧氣，可促進(jìn)（填"菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)

生”）；若進(jìn)行厭氧培養(yǎng),可促進(jìn)（填"菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”）。

⑶制作面包時(shí),為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松軟的原因

是O

答案（1）麥芽汁瓊脂高壓蒸汽由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體⑵菌體快速增殖乙

醇產(chǎn)生⑶酵母菌分解葡萄糖會(huì)產(chǎn)生co2,C（M吏面包松軟

4.（2017課標(biāo)全國(guó)I,37,15分）某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成COz和叫供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題:

⑴有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解

產(chǎn)物CO,作為碳源,原因是o但可用葡萄糖作為

碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是_____________________________________________________

（答出兩點(diǎn)即可）。

⑵為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,在配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)選擇（填“尿素”“NHMJ或“尿素+NH,N0J）

作為氮源,不選擇其他兩組的原因是

（3）用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KHFO,和Na2Hp0“其作用有

________________________（答出兩點(diǎn)即可）?

答案⑴眠酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO,來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其

他有機(jī)物的合成提供原料

⑵尿素其他兩組都含有NH4N03,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4N03,不能起到篩選

作用

⑶為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中PH穩(wěn)定

5.（2016課標(biāo)全國(guó)皿,39,15分,0.24）某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用

固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：

⑴分離純化乳酸菌時(shí),首先需要用對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋,進(jìn)行梯度稀釋的理由是一

⑵推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有和。

分離純化時(shí)應(yīng)挑選出的菌落作為候選菌。

⑶乳酸菌在-20℃長(zhǎng)期保存時(shí),菌液中常需要加入一定量的（填“蒸儲(chǔ)水”、“甘油”或“碳酸

鈣”）。

答案（1）無(wú)菌水（2分）泡菜濾液中菌的濃度高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落（3分）

⑵鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸（或酸）（每空3分，共6分）具有透明圈（2分）

（3）甘油（2分）

6.（2015課標(biāo)全國(guó)I,39,15分0.6127）已知微生物A可以產(chǎn)生油脂,微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油

脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：

⑴顯微觀(guān)察時(shí),微生物A菌體中的油脂通?？捎萌旧?微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_

—（填“萃取法”或“水蒸氣蒸播法”）從菌體中提取。

⑵為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，

并應(yīng)選用以為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

⑶若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用直接計(jì)數(shù);若要測(cè)定其活菌數(shù)量,可選

用法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

⑷為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降

解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg,則上述三個(gè)溫度中,。。條件下該酶活力最小。為

了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

答案⑴蘇丹III（或蘇丹IV）萃取法（每空2分，共4分）

⑵油脂（3分）

⑶血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板（每空2分，共4分）

（4）4540（每空2分，共4分）

7.（2014課標(biāo)全國(guó)I,39.15分,0.5106）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題：

⑴分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶,該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶,其中的葡萄糖苗酶可將

分解成?

⑵在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時(shí),CR可與纖維素形成色復(fù)合物。用含有CR的該種培

養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的。

⑶為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落,某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見(jiàn)下

表）：

酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水

培養(yǎng)基甲++++-++

培養(yǎng)基乙+++-+++

注:“+”表示有，表示無(wú)。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因

是;培養(yǎng)基乙（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別

纖維素分解菌,原因是。

答案（1）纖維二糖葡萄糖（2）紅透明圈（3）不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)

基中沒(méi)有纖維素,不會(huì)形成CR—纖維素紅色復(fù)合物,即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌

8.（2014課標(biāo)全國(guó)II,39,15分,0.5527）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)

菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行

培養(yǎng)了一段時(shí)間,這樣做的目的是_；

然后,將1niL水樣稀釋100倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上

的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。

⑵該小組采用平板劃線(xiàn)法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)滅菌,在第二次及以后的劃線(xiàn)時(shí),

總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)。這樣做的目的是O

⑶示意圖A和B中,表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)

現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量,

同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。

答案（15分）（1）檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8X107（每空2分，共4分）

⑵灼燒（2分）將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落（3分）

（3）B（2分）

⑷溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（每空2分，共4分）

教師用書(shū)專(zhuān)用（9—11）

9.（2013課標(biāo)全國(guó)II,39,15分,0.5633）臨床使用抗生素前,有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí),首先要從病

人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作,以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。

回答下列問(wèn)題：

⑴為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用法或法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面,經(jīng)過(guò)選

擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。

⑵取該單菌落適當(dāng)稀釋,用法接種于固體培養(yǎng)基表面,在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,使其均勻生長(zhǎng),

布滿(mǎn)平板。

⑶為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上

的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后,含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈,說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素A;含B的濾

紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈,說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素B;含C的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小,說(shuō)

明_；

含D的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群珹的小,且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落,在排除雜菌污染的情況下,此菌落很

可能是抗生素D的。

⑷根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,為達(dá)到抗菌目的,最好應(yīng)選用抗生素。

答案（15分）

⑴劃線(xiàn)稀釋涂布（或涂布）（每空2分，共4分）

（2）涂布（1分）

⑶敏感不敏感該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱耐藥菌（每空2分，共8分）

（4）A（2分）

10.（2011課標(biāo),39,15分）有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污

染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐?wèn)題：

⑴在篩選過(guò)程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講,該培養(yǎng)

基屬于培養(yǎng)基。

⑵純化菌種時(shí),為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即和。

⑶為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮?分解圈大說(shuō)明該菌株的降解能力O

⑷通常情況下，在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、和。無(wú)菌技術(shù)

要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈附近進(jìn)行,以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。

答案⑴原油選擇

⑵平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法

⑶強(qiáng)

⑷干熱滅菌高壓蒸汽滅菌火焰

11.（2009全國(guó)II,33,10分）利用微生物分解玉米淀粉生產(chǎn)糖漿,具有廣闊的應(yīng)用前景。但現(xiàn)有野生菌株對(duì)淀

粉的轉(zhuǎn)化效率低,某同學(xué)嘗試對(duì)其進(jìn)行改造,以獲得高效菌株。

⑴實(shí)驗(yàn)步驟：

①配制（固體、半固體、液體）培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的碳源應(yīng)為。

②將接入已滅菌的培養(yǎng)基平板上。

③立即用適當(dāng)劑量的紫外照射，其目的是O

④菌落形成后，加入碘液,觀(guān)察菌落周?chē)囵B(yǎng)基的顏色變化和變化范圍的大小,周?chē)霈F(xiàn)

現(xiàn)象的菌落即為初選菌落.經(jīng)分離、純化后即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

⑵若已得到二株變異菌株I和II,其淀粉轉(zhuǎn)化率較高。經(jīng)測(cè)定菌株I淀粉酶的催化活性高,菌株II的淀粉酶

蛋白含量高。經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，突變發(fā)生在淀粉酶基因的編碼區(qū)或非編碼區(qū),可推測(cè)出菌株I的突變發(fā)生

在區(qū),菌株II的突變發(fā)生在區(qū)。

答案（1）①固體玉米淀粉②野生菌株③對(duì)野生菌株進(jìn)行誘變④淺色范圍大（2）編碼非編碼

B組自主命題??。▍^(qū)、市）卷題組

1.（2018江蘇單科,31,8分）酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以

利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該

類(lèi)酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程,請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

①稱(chēng)量土樣②梯度稀釋③平板澆注分離④劃線(xiàn)蛆化⑤*-大培養(yǎng)

⑴配制培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱(chēng)量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)

基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行滅菌。

⑵取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,在步驟③中將溫度約（在250、50°C

或80°C中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻,冷凝后倒置培養(yǎng)。

⑶挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線(xiàn)。下列敘述合理的有O

a.為保證無(wú)菌操作,接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

b.劃線(xiàn)時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面,以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落,分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量

d.可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度,獲得甲醇高耐受株

⑷步驟⑤中,為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞

密度,將發(fā)酵液稀釋1000倍后,經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色,用25X16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)

胞數(shù),理論上色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于,才能達(dá)到每毫升3XIO'個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。

答案（8分）

⑴pH高壓蒸汽（濕熱）（2）50℃（3）a、b、d

（4）氧氣無(wú)30

2.（2017江蘇單科,31,7分）苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)

下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株■請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白陳、K,HPO"MgSO,、苯酚和水,其中可作為碳源的有。

⑵將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若

如圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加。

⑶如圖為連續(xù)劃線(xiàn)法示意圖,在圖中（填圖中序號(hào)）區(qū)域更易獲得單菌落。

開(kāi)始處

（4）采用比色測(cè)定法（使用苯酚顯色劑）檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反

應(yīng),下表中「5號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為。

管號(hào)1|2|3|4|56

苯酚濃度（rngZ11

如果廢水為50mg/I.苯酚溶液，降解后約有21岫勺苯酚殘留,則需將殘留液稀釋?zhuān)ㄌ钚蛱?hào):①5②10

③20）倍后,再進(jìn)行比色。

答案（7分）（1）蛋白陳、苯酚（2）增加稀釋涂布凝固劑（3）③（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8③

【三年模擬】

非選擇題（共90分）

1.（2019屆湖南長(zhǎng)郡中學(xué)第二次月考,35）日前微博傳言手機(jī)細(xì)菌比馬桶多.如圖,央視和北京衛(wèi)視通過(guò)實(shí)驗(yàn)

展示調(diào)查結(jié)果?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題。（15分）

⑴該實(shí)驗(yàn)需制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、，培養(yǎng)基一般放入

中進(jìn)行滅菌。

⑵據(jù)圖，兩電視臺(tái)均采用法接種，該方法需要。（多選）

A.接種環(huán)B.酒精燈C.移液管D.涂布器E.無(wú)菌水

⑶通過(guò)觀(guān)察菌落的，可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均

正確且完全一致，但報(bào)道結(jié)果截然不同,你認(rèn)為原因是O

⑷按圖操作取樣面積,實(shí)驗(yàn)員測(cè)定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量，將10mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋,分別取0.1niL稀

釋倍數(shù)為10°的樣品液接種到三個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為48、50、52,則該手機(jī)屏幕

的細(xì)菌數(shù)為個(gè)/平方厘米。該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組該如何設(shè)

置?O

答案⑴無(wú)機(jī)鹽（1分，“瓊脂”不作為扣分或給分的標(biāo)準(zhǔn)）高壓蒸汽滅菌鍋⑵稀釋涂布平板

BCDE（全對(duì)2分，答對(duì)2~3個(gè)得1分）（3）形態(tài)、大?。ù鸪鲆稽c(diǎn)即給2分,也可填“顏色”或其他合理答案）

手機(jī)的取樣和馬桶的取樣都不相同（答出“取樣不同”即得2分）（4）2X104取培養(yǎng)基涂布0.1mL無(wú)菌

水進(jìn)行培養(yǎng)

2.（2019屆山東青島期初調(diào)研,36）蛋白酶在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。某同學(xué)

為篩選產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株，做了如下實(shí)驗(yàn)步驟（配制了下列培養(yǎng)基,在適宜條件下培養(yǎng)）：（15分）

步驟取樣培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果

葡萄

糖，（NHjSOz,K2HPO4?3H20,KH2

I土壤樣品培養(yǎng)液a

P04,NaCl,CaCl2,MgSO4?7H20,

加水定容

II1mL培養(yǎng)液a同上菌落

III挑取單菌落細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)液b

⑴為實(shí)現(xiàn)篩選目的,步驟I所使用的培養(yǎng)基配方中,應(yīng)去除并加入高濃度的。該培養(yǎng)

基從功能上看屬于培養(yǎng)基。

⑵滅菌是否徹底或是否被污染需要檢測(cè),檢測(cè)方法是。

（3）為實(shí)現(xiàn)目的菌的分離和計(jì)數(shù),步驟II所使用的培養(yǎng)基中還常加入制成平板,采用的接種方法

是0

（4）步驟III的目的是。

答案⑴葡萄糖蛋白質(zhì)選擇（2）未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下放置一段時(shí)間后，觀(guān)察培養(yǎng)基上是否

有菌落產(chǎn)生⑶瓊脂稀釋涂布平板法⑷快速增加目的菌的種群數(shù)量（擴(kuò)大培養(yǎng)）

3.（2019屆黑龍江大慶實(shí)驗(yàn)中學(xué)第一次月考,44I）酸雨主要是由大氣中所含的S0,造成的。研究人員為了獲

得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：（15分）

⑴采集菌種:在某熱電廠(chǎng)煙囪周?chē)鷧^(qū)域采集土樣,取樣用的小鐵鏟和盛裝土樣的信封在使用前都需

要。將采集的土樣進(jìn)行稀釋處理后,接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

⑵分離目的菌:將目的菌轉(zhuǎn)移到含少量無(wú)菌水的錐形瓶中,邊攪拌邊持續(xù)通入S02,馴化幾分鐘后接種到固

體培養(yǎng)基上,待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟,并逐步延長(zhǎng)通SO。的時(shí)間,與此同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH。由此

分離得到的目的菌具有較強(qiáng)的的能力O

⑶活菌計(jì)數(shù):為獲得大量目的菌用于生產(chǎn),在培養(yǎng)過(guò)程中需連續(xù)取樣進(jìn)行計(jì)數(shù),法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)

樣品中的活菌數(shù)目。通常情況下,用此方法得到的活菌數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目（填“高”或

“低”）.

⑷檢測(cè)目的菌對(duì)抗生素的敏感性:取該單菌落適當(dāng)稀釋后的液體2滴，接種于固體培養(yǎng)基表面,并用

使菌液均勻分布。在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，將大小相同且分別含有不同抗生素的圓紙片均勻置于

該平板的不同位置,再培養(yǎng)一段時(shí)間,結(jié)果如圖所示（圓紙片周?chē)陌咨珔^(qū)域表示沒(méi)有菌落分布），據(jù)此實(shí)驗(yàn)

結(jié)果推測(cè),五種抗生素中對(duì)該菌抑制作用最強(qiáng)的是（答序號(hào)和名稱(chēng)）。

①利福平

②四環(huán)素

③慶大霉素

④鏈霉素

⑤青霉素

⑸菌種保存:采用平板劃線(xiàn)法分離純化得到了脫硫細(xì)菌,可以采用的方法,對(duì)菌種長(zhǎng)期保

存。

答案（1）滅菌（2）利用SO,和耐酸（3）稀釋涂布平板