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DB34DB34/T2812—2017水稻稻曲病菌PCR快速篩查法PCRRapidScreeningMethodofUstilaginoideavirens(Cook)Takahashi2017-03-30發(fā)布2017-04-30實施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T6682分析實驗室用水規(guī)學(xué)名：水稻稻曲病菌。無性態(tài)為Ustilaginoideavirens(Cook)Takahashi，子囊菌門性引物對孢子釋放的DNA進行PCR擴增，通過能否得到特異性條帶判定稻種中是否帶有水稻稻曲病吐溫20，無菌去離子水，商品化2×PCR反應(yīng)預(yù)混夜，瓊脂有規(guī)定外，所有試劑均為分析純或生化試劑，實驗用水應(yīng)符合GB/2至二滴表面活性劑吐溫20，用封口膜封口。將三角燒瓶放在往復(fù)式振蕩器上振蕩10min后取下三角燒瓶，將懸浮液注入干熱滅菌的10mL～20mL刻度離心管內(nèi)離心（4000rpm/min）5min。取出離心針對水稻稻曲病菌與其他屬種病菌ITS序列差異設(shè)計了一對特異性引物。uvr-F：5’-CTTGTGTTTTCCAATGCATGT-3’；uvr-R：5’-CAAGTGCGAGGATAACTGAAT-3’。引物由提供商品化服務(wù)的公用uvr–F和uvr–R對分離純化的菌株DNA進行PCR反應(yīng)，反應(yīng)體積50μL:2×樣品經(jīng)登記和經(jīng)手人簽字后妥善保存。對水稻稻曲病菌PCR檢測結(jié)果為陽性的樣品應(yīng)保存于3菌核未常熟時在病粒內(nèi)側(cè)，成熟后外露，易脫落。一般1個病粒含有1個菌核，有的病粒含有2～44養(yǎng)20d左右)(見圖A.4),大小為4.0μm～7.

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