ICS65.020.30

CCSB43

41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T2273—2022

肉?？焖贁U(kuò)繁技術(shù)規(guī)程

2022-06-29發(fā)布2022-09-28實(shí)施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2273—2022

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4同期發(fā)情和人工授精.................................................................1

5胚胎生產(chǎn)與移植.....................................................................2

6妊娠牛飼養(yǎng)管理.....................................................................5

附錄A（資料性）供體牛信息記錄表及胚胎冷凍記錄表樣式.................................6

附錄B（資料性）早期胚胎發(fā)育形態(tài)圖...................................................7

附錄C（資料性）受體牛胚胎移植記錄表.................................................8

I

DB41/T2273—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：河南省畜牧總站、河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。

本文件主要起草人：張子敬、劉賢、呂世杰、王二耀、茹寶瑞、李志明、王李輝、吳勝軍、蔡雯雯、

施巧婷、郎利敏、黃輝、夏宗軍、丁涵、徐美芳、趙楊楊、馬超峰、辛?xí)粤帷⒂谙?、王獻(xiàn)偉、馬文濤、

李靜、王培育、朱肖亭、楚秋霞、付泰、王歐陽、余亞飛、李惠、劉艷麗、蔡順姬、余洪濤、周應(yīng)海、

黃永震、徐照學(xué)。

II

DB41/T2273—2022

肉牛快速擴(kuò)繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了肉?？焖贁U(kuò)繁中同期發(fā)情、超數(shù)排卵、胚胎移植等要求和方法。

本文件適用于規(guī)模化肉牛養(yǎng)殖的快速擴(kuò)繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T4143牛冷凍精液

NY/T1335牛人工授精技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

供體牛

提供胚胎的母牛。

3.2

受體牛

接受胚胎的母牛。

3.3

同期發(fā)情

利用外源激素控制并調(diào)整母牛群體發(fā)情周期進(jìn)程，使其在規(guī)定時間內(nèi)集中發(fā)情。

3.4

超數(shù)排卵

利用外源激素誘發(fā)母牛卵巢多個卵泡發(fā)育，并同時排出多個具有受精能力的卵子。

3.5

人工授精

借助專門器械將公牛精液輸入發(fā)情母牛的生殖道內(nèi)使其受孕的過程。

3.6

胚胎移植

將供體牛體內(nèi)或其它方式獲得的早期胚胎，移植到對應(yīng)生殖周期的受體牛體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育的生

物技術(shù)。

4同期發(fā)情和人工授精

1

DB41/T2273—2022

4.1同期發(fā)情方法

4.1.1二次前列腺素（PG）法

適配母牛任選一天肌肉注射PG，9d～13d進(jìn)行第二次注射，24h～72h觀察發(fā)情。

4.1.2黃體酮緩釋陰道栓法

適配母牛任選一天放入黃體酮緩釋陰道栓，5d～7d撤栓并注射PG，24h～72h觀察發(fā)情。

4.2人工授精

冷凍精液應(yīng)符合GB/T4143的要求。人工授精操作按照NY/T1335的規(guī)定。

5胚胎生產(chǎn)與移植

5.1供體牛選擇與飼養(yǎng)管理

5.1.1供體牛選擇

品種優(yōu)良，系譜清晰，體型外貌和生產(chǎn)性能評級一級以上，生殖器官正常，無繁殖障礙疾病。年齡

15月齡至8周歲。青年牛應(yīng)為15月齡～18月齡，體況中上等且至少有兩次正常發(fā)情記錄；經(jīng)產(chǎn)牛應(yīng)為產(chǎn)

后60d以上，有兩次正常發(fā)情記錄且子宮恢復(fù)正常。確定為供體牛前應(yīng)進(jìn)行檢疫，有傳染性疾病的母牛

不能作為供體。

5.1.2供體牛飼養(yǎng)管理

保持飼養(yǎng)環(huán)境良好，避免應(yīng)激反應(yīng)。提供合理的配合日糧和清潔飲水。超數(shù)排卵前3周加強(qiáng)飼養(yǎng)管

理，補(bǔ)充維生素和微量元素，保持中等以上膘情。

5.2供體牛超數(shù)排卵及人工授精

5.2.1超數(shù)排卵

5.2.1.1同期發(fā)情方法

準(zhǔn)備工作完成后，同期發(fā)情方法按照4.1的規(guī)定。

5.2.1.2超數(shù)排卵方法

以母牛發(fā)情當(dāng)天為0d，第9d～13d中的任意一天開始，每天早（7:00～8:00）和晚（19:00～20:00）

各注射1次促卵泡素（FSH），連續(xù)4d遞減注射。注射FSH期間第3d晚和第4d早同時注射0.4mg～0.6mgPG。

超數(shù)排卵藥品使用根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的推薦量結(jié)合體重稍作調(diào)整。

5.2.1.3供體牛發(fā)情鑒定

最后一次注射FSH后，每隔6h觀察是否發(fā)情，每次觀察不少于30min。以母牛被跨穩(wěn)定作為發(fā)情標(biāo)

準(zhǔn)，準(zhǔn)確記錄時間。

5.2.2人工授精

精液劑量加倍，按照4.1.2規(guī)定操作，間隔12h重復(fù)操作一次。

5.3非手術(shù)沖胚及胚胎質(zhì)量鑒定

2

DB41/T2273—2022

5.3.1沖胚步驟

5.3.1.1供體牛人工授精后6d～7d沖胚。沖胚前，所用儀器、器皿等應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的消毒滅菌處理。

沖胚管應(yīng)檢查氣囊是否漏氣。

5.3.1.2將供體牛保定，清除糞便，在薦椎和第一尾椎結(jié)合處或第一尾椎和第二尾椎結(jié)合處注射普魯

卡因?qū)嵭杏材ね饴樽恚敝廖舶退沙谌彳洘o張力。普魯卡因用量依據(jù)說明書。

5.3.1.3麻醉后將牛尾固定，清潔會陰部及外陰，酒精棉球或噴霧消毒外陰，用滅菌衛(wèi)生紙擦干。

5.3.1.4用擴(kuò)張棒擴(kuò)張子宮頸，再用黏液棒抽出黏液。

5.3.1.5此時直腸易進(jìn)空氣形成空洞，使用抽氣筒排出空氣，利于直腸把握。

5.3.1.6沖胚管裝配內(nèi)芯，并用沖胚液潤滑，慢慢插入一側(cè)子宮角，當(dāng)沖胚管到達(dá)子宮角大彎處，旋

開內(nèi)芯旋鈕，拔出內(nèi)芯5cm左右，握緊內(nèi)芯和沖胚管并向前推進(jìn)，使內(nèi)芯再次到達(dá)子宮角大彎處。重

復(fù)內(nèi)芯拔出和一體前進(jìn)1～3次。給沖胚管氣囊充氣5mL確定沖胚管到達(dá)子宮角前端。沖胚液可用杜氏

磷酸鹽緩沖液（D-PBS）或商用沖胚液。

5.3.1.7給沖胚管氣囊充氣約8mL～14mL，抽出內(nèi)芯，把三通管與沖胚管連接，連上集卵濾皿。

5.3.1.8夾住三通管的回流端，將20mL～30mL沖胚液通過注入端注入子宮角。夾住注入端，松開回

流端使子宮角液體回流到集卵濾皿。重復(fù)幾次，每次增加沖胚液5mL～10mL，每個子宮角總用量400mL～

500mL。

5.3.1.9完成后排出氣囊空氣，另一側(cè)子宮進(jìn)行相同操作。抽出沖胚管，使前端位于子宮體，灌注抗

生素，肌注PG，做好采胚記錄（見表A.1）。

5.3.2胚胎質(zhì)量鑒定

5.3.2.1搜集胚胎

集卵濾皿放在40～100倍體視顯微鏡下，逐格檢查，撿出的胚胎用培養(yǎng)液清洗3次，放入蓋有礦物

油的培養(yǎng)液中35℃～37℃暫存，撿胚完成后進(jìn)行等級鑒定。培養(yǎng)液可用10%牛血清M199或其它商用

培養(yǎng)液。

5.3.2.2胚胎發(fā)育期

此時胚胎處于以下發(fā)育期：桑椹胚(M)、致密桑椹胚(CM)、囊胚(B)、擴(kuò)張囊胚(EXB)。胚胎發(fā)育形

態(tài)圖見附錄B。

5.3.2.3胚胎質(zhì)量等級鑒定

根據(jù)胚胎形態(tài)將胚胎依次分為A、B、C、D四級。

A級：優(yōu)秀胚。胚胎整體邊緣輪廓清晰，透明帶完整光滑，立體結(jié)構(gòu)明顯，實(shí)質(zhì)均勻，透明度適中，

碎片量少于10%或者沒有，胚胎的發(fā)育階段與預(yù)期的發(fā)育階段一致。

B級：良好胚。胚胎整體邊緣輪廓清晰，立體結(jié)構(gòu)明顯，碎片小于20%，透明度稍暗或稍淺。

C級：一般胚。輪廓不清晰，透明度過暗或過淡，碎片化超過30%～40%。

D級：不可用胚。未受精的卵子、16細(xì)胞以下和碎片化率50%以上的受精卵。

5.4胚胎冷凍保存及解凍

5.4.1胚胎冷凍與保存

5.4.1.1胚胎清洗

A級、B級胚胎在保持液中清洗4～6次。保持液使用商用保持液。

3

DB41/T2273—2022

5.4.1.2胚胎平衡

胚胎用冷凍液清洗4～6次，室溫下平衡5min。冷凍液使用乙二醇商用冷凍液。

5.4.1.3胚胎裝管

將平衡后的胚胎裝入0.25mL細(xì)管，裝管順序見圖1。

標(biāo)引序號說明：

1——棉栓；

2——保持液；

3——空氣；

4——冷凍液；

5——含有胚胎的冷凍液；

6——封口。

圖1胚胎裝管圖

裝管后做好胚胎情況標(biāo)記，內(nèi)容包括：生產(chǎn)日期、母牛號、公牛號、數(shù)量、發(fā)育期、質(zhì)量。

示例：1枚A級桑椹胚標(biāo)記為1MA，其中“1”表示數(shù)量，M表示發(fā)育期，“A”表示質(zhì)量。

5.4.1.4胚胎冷凍

冷凍儀降溫至-6℃，放入裝有胚胎的細(xì)管平衡5min，用液氮冷凍后的鑷子輕觸細(xì)管植冰，繼續(xù)平

衡5min，以0.6℃/min的速率下降至-35℃，平衡5min后投入液氮，記錄冷凍情況（見表A.2）。

5.4.2胚胎解凍

取出裝有胚胎的細(xì)管，空氣中停留5s～10s后，迅速放入35℃～37℃水浴45s。擦干細(xì)管，

拔出細(xì)管塞，裝入移植槍并移植。

5.5受體牛選擇及飼養(yǎng)管理

5.5.1受體牛選擇

骨盆較寬，體型勻稱，體高130cm以上，乳房發(fā)育良好，性情溫順，營養(yǎng)良好，中等膘情。青年

牛體重達(dá)到成年母牛體重的75%；經(jīng)產(chǎn)牛3胎以下，應(yīng)有兩個以上連續(xù)的正常發(fā)情周期，泌乳性能、產(chǎn)

犢性能良好，無連續(xù)兩次人工授精未孕記錄。牛體健康，子宮彈性、厚薄正常，卵巢發(fā)育正常。

5.5.2受體牛飼養(yǎng)管理

單獨(dú)分群、編號、飼養(yǎng)，保持環(huán)境良好，避免應(yīng)激反應(yīng)，保證必要運(yùn)動，滿足營養(yǎng)需要。移植前6～

8周開始補(bǔ)飼，日增重應(yīng)保持在0.3kg～0.4kg。移植前5周補(bǔ)充維生素A、維生素D、維生素E及硒、

鋅等微量元素。

5.6胚胎移植

5.6.1受體牛同期發(fā)情

4

DB41/T2273—2022

按照4.1的規(guī)定。

5.6.2受體牛發(fā)情鑒定

按照NY/T1335的規(guī)定。

5.6.3受體牛胚胎移植方法

5.6.3.1以發(fā)情當(dāng)天定為0d，于7d～8d進(jìn)行移植。移植前對受體牛進(jìn)行直腸檢査，黃體達(dá)到A

級的母牛用于移植。

5.6.3.2受體牛麻醉，按照5.3.1.2的規(guī)定。

5.6.3.3清洗消毒外陰部并擦干。對照胚胎記錄表和受體牛發(fā)情記錄，胚胎發(fā)育期與受體牛生理時間

相對應(yīng)：桑椹胚、致密桑椹胚、囊胚對應(yīng)受體牛發(fā)情后7d；擴(kuò)張囊胚對應(yīng)受體牛發(fā)情后8d。

5.6.3.4裝好胚胎的移植槍套上硬外套管，再套上無菌外套膜。于子宮頸口撕破外套膜，使移植槍前

段到達(dá)黃體側(cè)子宮角前端，注入胚胎。

5.6.3.5做好移植記錄。胚胎移植記錄表見附錄C。

6妊娠牛飼養(yǎng)管理

人工授精或移植后30d～60d進(jìn)行妊娠檢查，對妊娠牛加強(qiáng)護(hù)理，防止應(yīng)激。產(chǎn)前2個月適當(dāng)限

制能量攝入，保持適量運(yùn)動，同時保證足量的維生素和微量元素。圍產(chǎn)期加強(qiáng)管理。分娩時做好護(hù)理，

必要時助產(chǎn)或剖腹產(chǎn)。超出預(yù)產(chǎn)期10d的母牛應(yīng)誘導(dǎo)分娩。

5

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A

附錄A

（資料性）

供體牛信息記錄表及胚胎冷凍記錄表樣式

A.1供體牛信息記錄見表A.1。

表A.1供體牛信息記錄表

牛號品種牛場

出生日期胎次產(chǎn)犢日期

上次發(fā)情日期最近發(fā)情日期

直腸檢查情況

同期發(fā)情程序

第一次處理第二次處理發(fā)情情況

藥物

超排處理程序

日期藥物廠家批號及規(guī)格

早

FSH

晚午

PG午

其他

發(fā)情時間

輸精時間公牛號劑量活力配種員備注

沖胚日期沖胚液回收

黃體卵巢子宮

直腸檢查結(jié)果左右左右左右

沖胚結(jié)果獲胚總數(shù)可用胚胎數(shù)不可用胚胎數(shù)備注

A.2胚胎冷凍記錄表見表A.2。

表A.2胚胎冷凍記錄表

小筒編號供體牛號公牛號細(xì)管號細(xì)管顏色胚胎數(shù)量胚胎質(zhì)量冷凍日期備注

B

B

6

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附錄B

（資料性）

早期胚胎發(fā)育形態(tài)圖

早期胚胎發(fā)育形態(tài)見圖B.1。

a）未受精卵或1細(xì)胞胚胎b）2細(xì)胞胚胎

c)4細(xì)胞胚胎d)8細(xì)胞胚胎

e)桑葚胚f)致密桑葚胚、囊胚、擴(kuò)張囊胚

圖B.1早期胚胎發(fā)育形態(tài)圖

C

C

7

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附錄C

（資料性）

受體牛胚胎移植記錄表

受體牛胚胎移植記錄表見表C.1。

表C.1受體牛胚胎移植記錄表

胚胎數(shù)量

序號受體號發(fā)情日期移植日期子宮情況黃體狀況胚胎編號移植情況移植人備注

等級

8

DB41/T2273—2022

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4同期發(fā)情和人工授精.................................................................1

5胚胎生產(chǎn)與移植........................................