紫外-可見分光光度法在

藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用1精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外－可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述2精選2021版課件一.概述：分光光度法是通過測定物質(zhì)在某些特定波長處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外-可見分光光度法具有操作簡便快速、專屬性和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。因此在藥品的分析檢驗(yàn)中被廣泛采用。在各國藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢查和含量測定等各個(gè)項(xiàng)目中都能見到紫外-可見分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。3精選2021版課件一.概述：吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢絲燈）發(fā)出的光通過透明物質(zhì)（固體、液體或氣體）后，一些波長的單色光成分被該物質(zhì)選擇吸收，在原來的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗線或暗帶，這種光譜叫做吸收光譜。4精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外－可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述5精選2021版課件二.分光光度法的基本原理在紫外和可見光區(qū)，靈敏度和精密度較高，一般每1ml溶液中含有幾微克（

g）的物質(zhì)即可測定，誤差約為1-2%，在此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對光的吸收主要系分子中電子的能級躍遷所致，同時(shí)伴有分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，選擇性不如紅外光區(qū)，故紫外-可見光區(qū)主要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測定。6精選2021版課件紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要數(shù)百微克（

g）的供試品進(jìn)行測定，此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對光的吸收系由分子中振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，特別是在7-15

m（稱為“指紋區(qū)”），吸收峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸收光譜，故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。7精選2021版課件透光率（T）：單色光通過一物質(zhì)的溶液時(shí)，透過光的強(qiáng)度（I）與入射光的強(qiáng)度（I0）之比。即：T=I/I0。吸光度（A）：透光率的負(fù)對數(shù)值.即:A=log1/T=-logT比耳-郎伯定律（Beer-Lambert’sLaw）：吸光度（A）與溶液的濃度（C）和光路長（L）是成正比例的。即：A=ECL8精選2021版課件

比耳-郎伯定律適用范圍：1.溶液的濃度不能過高或過低，使測定結(jié)果的相對誤差最小的最佳透射率為T=37%左右。2.所用溶劑不得與測定物質(zhì)有分子間締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸堿平衡。9精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外－可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述10精選2021版課件三.紫外-可見分光光度計(jì)的使用1.基本構(gòu)造：穩(wěn)壓電源光源波長選擇裝置樣品池檢測器記錄裝置11精選2021版課件2.儀器的校正和檢定（1）波長的校正：由于溫度變化對機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、 360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、 536.2nm與637.5nm的波長處有尖銳的吸收

峰，可作為波長校正用。12精選2021版課件

取在120

C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定吸光度并計(jì)算其吸收系數(shù)。（2）吸光度的準(zhǔn)確度：波長（nm）235（最小）257（最大）313（最?。?50（最大）吸收系數(shù)（E1%1cm）124.5144.048.6106.6許可范圍123.0-126.0142.8-146.247.0-50.3105.5-108.513精選2021版課件（3）雜散光的檢查：

按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。試劑濃度%（g/ml）波長（nm）透光率（%）碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.814精選2021版課件3.紫外分光光度法對溶劑的要求

用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下要求：波長 吸光度要求220nm-240nm 不得超過0.40241nm-250nm 不得超過0.20251nm-300nm 不得超過0.10300nm以上不得超過0.0515精選2021版課件4.紫外分光光度法測定法測定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長

2nm以內(nèi)測試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，以核對供試品的吸收峰波長是否準(zhǔn)確。應(yīng)以吸光度最大的波長作為測定波長。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度會偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。16精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外－可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述17精選2021版課件四.紫外-可見分光光度法

在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外-可見分光光度法的項(xiàng)目有吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含量測定等等。18精選2021版課件1.吸收系數(shù)：

藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，可作為藥品生產(chǎn)過程中精制純化的一種指標(biāo)。對紫外區(qū)一定波長的光有特征吸收的藥物進(jìn)行精制時(shí)，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長測定吸收系數(shù)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的最大值時(shí)為止，因此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為判斷藥品純度的依據(jù)。19精選2021版課件2.鑒別：藥物對光輻射的吸收特點(diǎn)（即其吸收光譜）可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對。對于具有兩個(gè)以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一步簡化操作，無需費(fèi)時(shí)作吸收光譜曲線，只要測出各最大吸收波長處的吸收度，求出這些吸收度的比值，測出它們相對位置的比值即可。20精選2021版課件維生素B12的鑒別規(guī)定每1ml中含維生素B1225

g的水溶液，照分光光度法測定，在278、361與550nm的波長處有最大吸收。

A361nm/A278nm應(yīng)為1.70-1.88。

A361nm/A550nm應(yīng)為3.15-3.45。21精選2021版課件22精選2021版課件3.純度檢查：若一種化合物對紫外光和可見光區(qū)的某一波段呈光學(xué)透明（即不吸收或幾乎不吸收），而不純雜質(zhì)有吸收時(shí)，則該物質(zhì)的生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到規(guī)定波長處的吸收系數(shù)降到最低時(shí)為止。有些藥物就以此作為雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)是通過比色法與雜質(zhì)對照品比較進(jìn)行控制的。23精選2021版課件檢查腎上腺素中的酮體：取腎上腺素，加0.1mol/L鹽酸溶液，制成每1ml中含2mg的溶液，照分光光度法，在310nm的波長處測定，吸光度不得過0.05。24精選2021版課件25精選2021版課件4.含量測定：藥典中含量測定方法可分為：（1）對照品比較法（2）吸收系數(shù)法（3）比色法26精選2021版課件（1）對照品比較法：應(yīng)用范圍：單一成分藥劑的測定。混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收27精選2021版課件

測定要求分別配制供試品溶液和對照品溶液對照品溶液所含對照品的量應(yīng)為供試品溶液中被測組分標(biāo)示量的

10%以內(nèi)。所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持一致。28精選2021版課件計(jì)算公式：Cs=Cr*As/Ar

Cs：供試品溶液的濃度

As：供試品溶液的吸光度

Cr：對照品溶液的濃度

Ar：對照品溶液的吸光度29精選2021版課件（2）吸收系數(shù)法：應(yīng)用范圍：單一成分藥劑的測定。混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收30精選2021版課件測定要求：通常為測定最大吸收峰波長處的吸光度供試品溶液在測定波長處濃度與吸光度嚴(yán)格遵循比耳-郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。測定條件和操作應(yīng)與測定吸收系數(shù)時(shí)完全一致。吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過校正的不同型號分光光度計(jì)上進(jìn)行多次測定求得的平均值。特別注意儀器的校正和檢定31精選2021版課件計(jì)算公式：

A=ECL以《中國藥典》2000年版氯霉素含量測定為例:精密稱取氯霉素0.1009g，置100ml量瓶中，加乙醇10ml振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，在278nm波長處測定吸光度為0.596，按氯霉素(C11H12Cl2N2O5)吸收系數(shù)(E1%1cm)為298計(jì)算氯霉素含量。已知：A=0.596E=298L=1則：

C=A/(E*L)=0.596/(298*1)%=0.002%氯霉素含量=0.002%*100*100/(0.1009*2)=99.1%32精選2021版課件（3）比色法供試品本身在紫外－可見光區(qū)沒有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收，但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測定33精選2021版