ICS07080

CCSC.27

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T44829—2024

PfAgo核酸內(nèi)切酶活性檢測(cè)方法

AssaymethodofPfAgoendonucleaseactivity

2024-10-26發(fā)布2024-10-26實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T44829—2024

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術(shù)語(yǔ)和定義

3………………1

原理

4………………………1

試劑或材料

5………………1

試驗(yàn)步驟

6…………………2

質(zhì)量控制

7…………………7

Ⅰ

GB/T44829—2024

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任

。。

本文件由全國(guó)工具酶標(biāo)準(zhǔn)化工作組提出并歸口

(SAC/SWG11)。

本文件起草單位交弘生物科技上海有限公司菲鵬生物股份有限公司南生廈門(mén)分析檢測(cè)有

:()、、()

限公司夏禾深圳生物技術(shù)有限公司廈門(mén)銀祥集團(tuán)有限公司深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限

、()、、

公司武漢新華揚(yáng)生物股份有限公司廊坊諾道中科醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司交弘生物工程上海有

、、、()

限公司夏禾杭州生物技術(shù)有限公司福建南生科技有限公司上海交通大學(xué)復(fù)旦大學(xué)山東大學(xué)蘇

、()、、、、、

州大學(xué)廈門(mén)大學(xué)福建農(nóng)林大學(xué)廈門(mén)華廈學(xué)院

、、、。

本文件主要起草人馮雁李忠磊黃發(fā)燦鄭登忠孟媛張志剛杜凱徐麗胖鐵良趙毅陳禮師

:、、、、、、、、、、、

郭延巍劉倩潘威葉星宇孫鵬鐘江陳秀蘭方正偉于海岳余欣鄧永江朱力張永有劉斌

、、、、、、、、、、、、、、

趙超鄭恬燁黃恩銘皺忠愛(ài)潘排鳳黃海燕蘇靜梅

、、、、、、。

Ⅲ

GB/T44829—2024

引言

Pf核酸內(nèi)切酶能夠在磷酸化的引導(dǎo)鏈大于的引導(dǎo)下剪切與引導(dǎo)鏈互

Ago5'DNA(15nt)DNA

補(bǔ)的靶標(biāo)剪切位點(diǎn)一般在引導(dǎo)鏈端開(kāi)始的第個(gè)和第個(gè)堿基相對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)

DNA,DNA5'1011DNA

堿基之間Pf核酸內(nèi)切酶的剪切功能不受靶標(biāo)和剪切位點(diǎn)相鄰堿基序列的限制對(duì)靶標(biāo)

。AgoDNA,

底物的活性較高對(duì)靶標(biāo)底物也有一定活性制定Pf核酸內(nèi)切酶活性檢測(cè)方法的國(guó)

DNA,RNA。Ago

家標(biāo)準(zhǔn)用以推動(dòng)其產(chǎn)業(yè)化對(duì)該類(lèi)工具酶的生產(chǎn)和使用具有重要意義

,,。

Ⅳ

GB/T44829—2024

PfAgo核酸內(nèi)切酶活性檢測(cè)方法

1范圍

本文件描述了Pf核酸內(nèi)切酶活性的檢測(cè)方法

Ago。

本文件適用于Pf核酸內(nèi)切酶活性的檢測(cè)

Ago。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志

GB/T191—2008

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

PfAgo核酸內(nèi)切酶PfAgoendonuclease

依托引導(dǎo)鏈序列與靶標(biāo)序列堿基互補(bǔ)配

DNA(guideDNA,gDNA)DNA(targetDNA,tDNA)

對(duì)繼而特異識(shí)別并剪切靶標(biāo)的核酸內(nèi)切酶

,DNA。

32

.

PfAgo核酸內(nèi)切酶活性單位activityunitofPfAgoendonuclease

在反應(yīng)體積中條件下每分鐘剪切靶標(biāo)所需的酶量為一個(gè)活性單位

25μL,95℃,0.1nmolDNA(U)。

4原理

依托引導(dǎo)鏈序列與靶標(biāo)序列堿基互補(bǔ)配對(duì)Pf核酸內(nèi)切酶能夠在磷酸化的

DNADNA,Ago5'

引導(dǎo)鏈大于的引導(dǎo)下剪切與引導(dǎo)鏈互補(bǔ)的靶標(biāo)剪切位點(diǎn)常發(fā)生在引

DNA(15nt)DNADNA,DNA

導(dǎo)鏈與靶標(biāo)互補(bǔ)序列的靶標(biāo)