大單元十一生物技術(shù)與工程第53講微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應用【課標內(nèi)容】1．滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提；2．闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)；3．說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物；4．概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的常用方法；5．概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法?？键c1培養(yǎng)基和無菌技術(shù)考點落實知識1微生物的培養(yǎng)基1．概念：人們按照微生物對__營養(yǎng)物質(zhì)__的不同需求，配制出供其__生長繁殖__的營養(yǎng)基質(zhì)。2．類型(1)根據(jù)物理性質(zhì)分①固體培養(yǎng)基——用于微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)和保藏等。②__液體培養(yǎng)基__——一般用于工業(yè)生產(chǎn)。③半固體培養(yǎng)基。三者的區(qū)別在于是否加入凝固劑及加的量多少。常用的凝固劑有__瓊脂__等。(2)根據(jù)成分分①__天然培養(yǎng)基__——一般用于普通培養(yǎng)和工業(yè)化生產(chǎn)，如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。②合成培養(yǎng)基——多用于研究和育種。(3)根據(jù)用途分eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(基礎(chǔ)培養(yǎng)基,特殊培養(yǎng)基\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(__選擇培養(yǎng)基__,鑒別培養(yǎng)基等))))3．培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成(1)各種培養(yǎng)基一般都含有__水、碳源、氮源__和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)作用主要來源水良好的溶劑、細胞結(jié)構(gòu)的重要組成成分培養(yǎng)基、空氣、代謝產(chǎn)物碳源提供碳元素，有些是異養(yǎng)生物的__能源__物質(zhì)葡萄糖、蔗糖、淀粉、纖維素等氮源提供氮元素，合成__蛋白質(zhì)、核酸__、磷脂以及含氮代謝產(chǎn)物無機氮源，如銨鹽、硝酸鹽等；有機氮源，如酵母粉、__牛肉膏__、__蛋白胨__等無機鹽組成細胞結(jié)構(gòu)和許多化合物，調(diào)節(jié)生命活動；某些化能自養(yǎng)菌的能源如磷酸鹽等無機化合物(2)培養(yǎng)基的其他條件：滿足微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2等的需求。培養(yǎng)微生物種類特殊要求乳酸桿菌培養(yǎng)基中添加__維生素__霉菌培養(yǎng)基的pH調(diào)至__酸性__細菌培養(yǎng)基的pH調(diào)至__中性或弱堿性__厭氧微生物需要提供__無氧__的條件深度指津不同種類的微生物代謝特點不同，因此對培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。如，自養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源、氮源必須由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。知識2無菌技術(shù)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是__防止雜菌污染__。無菌技術(shù)主要包括：__消毒__和__滅菌__。1．消毒和滅菌項目消毒滅菌概念使用較為__溫和__的物理、化學或生物等方法殺死物體__表面__或內(nèi)部一部分微生物使用__強烈__的理化方法殺死物體內(nèi)外__所有__的微生物，包括__芽孢和孢子__常用方法__煮沸__消毒法、巴氏消毒法、__酒精__消毒法、紫外線消毒法__濕熱__滅菌(如高壓蒸汽滅菌法)、干熱滅菌、__灼燒__滅菌區(qū)別最大區(qū)別在于是否殺死芽孢和孢子2．三種滅菌方法的比較類型濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌媒介沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽熱空氣火焰的充分燃燒層方法高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃，維持15～30min160～170℃、1～2h(2023年人教版)直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對象__培養(yǎng)基__等耐高溫的和需要保持干燥的物品，如__玻璃器皿__、__金屬用具__等__接種工具__、試管口、瓶口等原理高溫或高溫、高壓使蛋白質(zhì)__變性失活__，導致微生物活體以及芽孢和孢子全部死亡3．操作對象或注意點(1)對實驗操作的__空間__、操作者的衣著和手進行清潔和__消毒__。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行__滅菌__。(3)為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作都應在超凈工作臺并在__酒精燈火焰__附近進行。(4)實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與__周圍的物品__接觸。解疑釋惑教材中的高壓蒸汽滅菌鍋利用的是濕熱滅菌原理。關(guān)于手動式高壓蒸汽滅菌鍋的使用如下：操作步驟操作要領(lǐng)①加水向外層鍋內(nèi)加水(蒸餾水或純化水)，水面達到水位標記線即可(水量過少會燒干)②裝鍋將待滅菌物品放在滅菌桶中(不要裝得太滿，至少留__1/3__空間)，加蓋，__對稱__旋緊固定螺栓③加熱排氣加熱滅菌鍋，打開排氣閥，等冷空氣__充分排出__后，關(guān)閉排氣閥(壓強達標時，溫度上不去，蒸汽的穿透力低，影響滅菌效果)④保溫、保壓100kPa、121℃下，15～30min(蘇教版為103kPa、121℃下15～20min)⑤出鍋壓力表指針降至“0”點，溫度下降后再打開排氣閥概念思辨1．判斷下列說法的正誤：(1)液體培養(yǎng)基含有水，而固體培養(yǎng)基不含水。(×)提示：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基都含有水，它們的區(qū)別為是否含有凝固劑。(2)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，其中碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)。(×)提示：CO2為無機碳源，不能作為能源物質(zhì)。(3)無菌技術(shù)能有效避免操作者被微生物感染。(√)(4)用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進行消毒。(×)提示：用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進行滅菌。(5)巴氏消毒法用于牛奶、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體。(√)(6)對接種環(huán)灼燒滅菌時，只需要在酒精燈火焰上燒紅環(huán)狀部分。(×)提示：需要灼燒接種環(huán)的金屬部分以及手柄，凡是能夠深入試管的部分都需要灼燒滅菌。2．在科研和生產(chǎn)上，研究和應用微生物的前提是__防止雜菌污染__，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。在實驗室中培養(yǎng)微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的__營養(yǎng)__和環(huán)境條件，另一方面確保其他微生物無法混入。典題說法考向1培養(yǎng)基的選擇下列關(guān)于培養(yǎng)基和所含營養(yǎng)物質(zhì)的說法，正確的是(C)A．通常情況下，瓊脂既可作為凝固劑，也可作為微生物的碳源B．蛋白胨為微生物的生長主要提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素C．培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)維生素D．被污染的培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌后還能繼續(xù)使用解析：一般情況下，瓊脂可以作為凝固劑，但不能作為微生物的碳源，A錯誤；蛋白胨可以為微生物的生長主要提供碳源、氮源和維生素等，不能提供磷酸鹽，牛肉膏提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等，B錯誤；為了滿足乳酸桿菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求，保證乳酸桿菌能正常生長繁殖，培養(yǎng)乳酸桿菌的時候需要在培養(yǎng)基中添加維生素，C正確；污染的培養(yǎng)基不能再次滅菌后使用，因為可能導致營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生變化，從而使培養(yǎng)基失去營養(yǎng)價值，D錯誤?？枷?無菌技術(shù)(2019·江蘇卷)下列關(guān)于微生物實驗操作的敘述，錯誤的是(A)A．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進行高壓蒸汽滅菌B．接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進行灼燒C．接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)污染D．菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基解析：接種室、接種箱等常用紫外線消毒法處理，接種環(huán)等常用灼燒滅菌法處理，吸管、培養(yǎng)皿等常用干熱滅菌法處理，培養(yǎng)基及多種器材用高壓蒸汽滅菌法處理。獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，以下敘述錯誤的是(B)A．接種過程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，通過火焰灼燒來滅菌B．為防止雜菌污染，在配制培養(yǎng)基時都需要加入適量的抗生素C．在接種室噴灑適量煤酚皂溶液，再進行紫外線消毒，可以加強消毒效果D．有的微生物能夠寄生于多種細菌體內(nèi)，用其來凈化污水屬于生物消毒法解析：在存放時，試管口、瓶口與空氣接觸容易被雜菌污染，接種時通過酒精燈火焰灼燒來滅菌，A正確；抗生素能夠殺死細菌，如果想獲得的微生物是細菌，則細菌不能在加入抗生素的培養(yǎng)基上生長，B錯誤；在接種室噴灑適量煤酚皂溶液，屬于化學藥物消毒，再進行紫外線消毒，可以加強消毒效果，C正確；有的微生物能夠寄生于多種細菌體內(nèi)使細菌裂解，常用于凈化污水、污泥，屬于生物消毒法，D正確?？键c2微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)考點落實知識1微生物的純培養(yǎng)1．純培養(yǎng)：在微生物學中，將接種于__培養(yǎng)基__內(nèi)，在合適條件下形成的含__特定種類微生物__的群體稱為培養(yǎng)物。由__單一個體繁殖__所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得__純培養(yǎng)物__的過程就是純培養(yǎng)。2．微生物純培養(yǎng)的步驟：__配制培養(yǎng)基__、__滅菌__、倒平板、__接種__、分離和培養(yǎng)等步驟。3．酵母菌的純培養(yǎng)(1)菌落：分散的微生物在適宜的__固體培養(yǎng)基__表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的__子細胞群體__。(2)獲得單菌落的兩種方法：__平板劃線法__和__稀釋涂布平板法__。(3)酵母菌的純培養(yǎng)步驟eq\a\vs4\al(,\x(\a\al(制備,培養(yǎng)基)),)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(\a\vs4\al(配制培養(yǎng)基：,)去皮馬鈴薯200g切塊，加水1000mL，煮爛，用紗布過濾，,

加20ga．__葡萄糖__，15～20gb．__瓊脂__，,

用蒸餾水定容至1000mL,↓,\a\vs4\al(滅菌：配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中進行c.__高壓蒸汽__滅菌；,

培養(yǎng)皿進行d．__干熱__滅菌),↓,\a\vs4\al(倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至e.__50__℃左右，在f.__酒精燈火焰__,

附近倒平板)))eq\a\vs4\al(,\x(\a\al(接種和分,離酵母菌)),)—eq\b\lc\[(\a\vs4\al\co1(通過g.__接種環(huán)__在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線,的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面))eq\x(培養(yǎng)酵母菌)eq\a\vs4\al(—)eq\b\lc\[(\a\vs4\al\co1(完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的,平板和h．__一個未接種__的平板i.__倒置__，,放入28℃左右的j．__恒溫培養(yǎng)箱__中培養(yǎng)24～48h))注：倒平板的具體操作步驟如下圖所示：①拔出錐形瓶的棉塞↓②將瓶口迅速通過火焰↓③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基(10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋↓④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿k．__倒過來__放置解疑釋惑平板倒置培養(yǎng)的目的主要有：既可以__防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基__造成污染，又可以__避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)__，等等。知識2分離純化，獲得單菌落的兩種方法1．純化方法eq\o(\s\up7(),\s\do5(A))eq\o(\s\up7(),\s\do5(B))(1)上圖A可表示用__平板劃線__法接種獲得的平板，菌體的分離是通過__連續(xù)劃線__操作實現(xiàn)的。(2)上圖B可表示用__稀釋涂布平板__法接種獲得的平板，菌體的分散是通過一系列的__梯度(等比)稀釋__操作實現(xiàn)的。(3)獲得圖A用到的接種工具是接種環(huán)，而圖B是__涂布器__。圖A、B都可用于觀察菌落特征。2．平板劃線的具體操作①將接種環(huán)放在火焰(外焰)上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅↓②在火焰旁冷卻接種環(huán)(防止__溫度過高殺死菌種__)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞↓③將試管口通過火焰↓④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液↓⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞↓⑥在火焰附近將皿蓋__打開一條縫隙__(不能完全打開，防止__雜菌污染__)，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃__三至五條平行線__，蓋上皿蓋↓⑦灼燒接種環(huán)，待其__冷卻__后，從第一次劃線的__末端__開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將__最后一次__的劃線與第一次的劃線相連解疑釋惑三次灼燒接種環(huán)的目的不同①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染__培養(yǎng)物__；②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線__末端__；③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。概念思辨1．判斷下列說法的正誤：(1)由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)。(×)提示：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌。(×)提示：培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿的操作屬于倒平板，在配制培養(yǎng)基的過程中要先滅菌后倒平板。(3)轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線。(√)(4)平板冷凝后應將平板倒置，防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。(√)2．如何判斷在制備和培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是否被污染？提示：設(shè)置一組未接種微生物的空白培養(yǎng)基，與接種了微生物的平板放在相同的條件下培養(yǎng)，若空白培養(yǎng)基上未長出菌落，說明培養(yǎng)基未被污染。典題說法考向1培養(yǎng)基的配制下列有關(guān)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是(A)A．培養(yǎng)基的配制全程都要在酒精燈火焰旁進行B．溶化時，將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．平板冷凝后要將其倒置，以防皿蓋上的冷凝水滴入培養(yǎng)基D．可以通過適宜條件下培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基以確定培養(yǎng)基是否被污染解析：培養(yǎng)基的配制不需要全程都在酒精燈火焰旁進行，只有滅菌后的各項操作要在酒精燈火焰旁進行，A錯誤；溶化時，將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱，B正確；平板冷凝后要將其倒置，使皿蓋在下，皿底在上，以防皿蓋上的冷凝水滴入培養(yǎng)基，造成雜菌污染，C正確；可以通過適宜條件下培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基以確定培養(yǎng)基是否被污染，如果未接種的培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基被污染了，D正確?？枷?微生物的分離與純化(2020·江蘇卷)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細菌，培養(yǎng)結(jié)果如下圖所示。下列敘述正確的是(B)A．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色解析：倒入培養(yǎng)基后的培養(yǎng)皿加蓋，放置在水平桌面等待培養(yǎng)基冷卻凝固后倒置，完成倒平板，不需要輕微晃動，A錯誤；圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；觀察圖知，實驗結(jié)果出現(xiàn)了單菌落，能達到菌種純化的目的，C錯誤；纖維素會與剛果紅形成紅色復合物，纖維素被分解后，紅色消失，D錯誤。(2023·蘇錫常鎮(zhèn)一模)下列關(guān)于微生物純培養(yǎng)的敘述，正確的是(A)A．待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置培養(yǎng)B．在皿蓋或皿底作標記，均不會影響對菌落的觀察C．涂布器進行涂布的速度越快越好，可有效防止雜菌污染D．未接種的空白培養(yǎng)基上若無菌落出現(xiàn)，可再次利用解析：涂布后的平板待菌液被培養(yǎng)基吸收后應倒置培養(yǎng)，可防止水分蒸發(fā)過快，A正確；微生物培養(yǎng)過程中通常在皿底作標記，這樣不會影響對菌落的觀察，B錯誤；用涂布器進行涂布時需要將菌液涂布均勻，否則會影響觀察，在酒精燈火焰旁進行接種操作可有效防止雜菌污染，C錯誤；未接種的空白培養(yǎng)基作為空白對照，其上若無菌落出現(xiàn)，可說明本次實驗數(shù)據(jù)可靠，但空白培養(yǎng)基不能再次使用，D錯誤?？键c3微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)知識1微生物的選擇培養(yǎng)1．選擇培養(yǎng)的作用原理：人為提供__有利于目的菌生長__的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時__抑制或阻止其他微生物的生長__。2．稀釋涂布平板法操作過程取樣，將10g土樣加入盛有90mL無菌水的瓶中，搖勻，取__1mL上清液__加入盛有__9mL無菌水__的試管中，依次__等比稀釋__。取最后一支試管中菌液__0.1mL__滴加到培養(yǎng)基表面進行涂布。如下圖所示：注意：(1)稀釋操作時：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需__滅菌__；操作時，試管口和移液管應在離火焰1～2cm處。(2)涂布平板時：①__涂布器__用體積分數(shù)為70%的酒精消毒，取出時，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上__灼燒__；②不要將__過熱__的涂布器放入盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管槍頭不要接觸任何物體；④培養(yǎng)皿蓋不能完全打開，應只掀開一條縫。知識2微生物的計數(shù)1．測定微生物數(shù)量常用的方法(1)稀釋涂布平板法(間接計數(shù)法、活菌計數(shù)法)①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②為了使結(jié)果接近真實值，應設(shè)置三個或三個以上的平板(平行重復原則，增強實驗的說服力和準確性)，計算菌落平均數(shù)。另外，為了保證結(jié)果的準確，要求選擇同一稀釋度的平板菌落數(shù)在__30～300__的平板進行計數(shù)。③用此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目__少__。這是因為__當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落__。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。(2)__顯微鏡直接計數(shù)__法2．土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)(1)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成__脲酶__，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起到__催化__作用。CO(NH2)2＋H2Oeq\o(―――→,\s\up7(脲酶))CO2＋2NH3(2)分離方法：利用以__尿素__為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)。(3)鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入__酚紅__指示劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細菌。(4)統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)一般用__稀釋涂布平板__法。(5)實驗流程：土壤取樣→__樣品的稀釋__→微生物的培養(yǎng)與觀察→細菌的__計數(shù)__。深度指津微生物的鑒別方法(1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的__形狀__、大小、隆起程度和__顏色__等特征進行鑒別。(2)指示劑鑒別法：如在上述以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入__酚紅__指示劑。(3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的__透明圈__來篩選分解纖維素的微生物。注：后兩種方法需要利用__鑒別__培養(yǎng)基，是利用微生物的特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品，產(chǎn)生特定的顏色或其他變化。再如，__伊紅—亞甲藍__瓊脂培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌，生長在此培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤。概念思辨判斷下列說法的正誤：(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類。(×)(2)對細菌進行計數(shù)只能采用稀釋涂布平板法。(×)(3)土壤取樣時需要對紙袋和鐵鏟都預先滅菌。(√)(4)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。(×)(5)統(tǒng)計菌落數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)目。(×)(6)菌落計數(shù)可以每隔12h統(tǒng)計一次，且菌落數(shù)目穩(wěn)定。(×)(7)剛果紅可以與纖維素形成透明復合物，所以可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(×)典題說法考向1微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)(2023·蘇州期中)如圖為兩種微生物分離純化的方法，下列敘述正確的是(B)eq\o(\s\up7(),\s\do5(甲))乙A．甲圖中3號試管的稀釋倍數(shù)為103倍B．甲圖所測定的微生物數(shù)量一般用菌落數(shù)表示C．乙圖所示的操作過程中接種環(huán)需要灼燒5次D．甲、乙兩種操作均可以用于微生物的計數(shù)解析：甲圖中3號試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A錯誤；甲圖所測定的微生物數(shù)量的方法為稀釋涂布平板法，該方法一般用菌落數(shù)表示微生物數(shù)量，B正確；采用平板劃線法接種微生物時，每次劃線前后都要灼燒接種環(huán)，因此乙圖所示的操作過程中接種環(huán)需要灼燒6次，C錯誤；甲圖采用稀釋涂布平板法接種微生物，該方法可對微生物進行計數(shù)，乙圖采用平板劃線法接種微生物，該方法不能對微生物進行計數(shù)，D錯誤?？枷?微生物培養(yǎng)的應用(2022·江蘇卷)下列是某同學分離產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是(D)A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌解析：農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物；為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應選擇尿素作為唯一氮源，只有產(chǎn)脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長；當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌；產(chǎn)脲酶菌分解尿素，不分解酚紅指示劑，酚紅指示劑是用來鑒定尿素分解產(chǎn)物的。(2019·江蘇卷)下列關(guān)于產(chǎn)纖維素酶菌分離及運用的敘述，不合理的是(A)A．篩選培養(yǎng)基中應含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生長營養(yǎng)B．可從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌C．在分離平板上長出的菌落需進一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力D．用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可提高其飼用價值解析：篩選產(chǎn)纖維素酶菌的培養(yǎng)基應以纖維素為唯一碳源；木材、秸稈中富含纖維素，故可以從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌；用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選纖維素分解菌后，為了確定得到的是纖維素分解菌，還需要進行實驗進一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力；用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈，可以把纖維素分解成葡萄糖，提高飼用價值。深度指津選擇培養(yǎng)基——4種常見制備方法或?qū)嵗?多選)根據(jù)食品安全國家標準(GB19645—2010)規(guī)定，每毫升合格的牛奶中細菌總數(shù)不超過50000個。某興趣小組利用恒溫水浴鍋對新鮮牛奶進行消毒后，進行細菌總數(shù)測定，主要步驟如下圖所示。相關(guān)敘述正確的是(ABD)A．步驟①中用巴氏消毒法對新鮮牛奶進行消毒，可以減少營養(yǎng)物質(zhì)的損失B．步驟②對牛奶進行梯度稀釋可以使聚集的微生物分散，便于在培養(yǎng)基表面形成單菌落C．步驟③中牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基要先高壓蒸汽滅菌再調(diào)pH，以防止高溫影響pH的穩(wěn)定D．實驗結(jié)束時培養(yǎng)基上的菌落可能不止一種，若平均菌落總數(shù)少于50個，則表明消毒合格解析：80℃、15s處理新鮮牛奶屬于巴氏消毒法，采用短時高溫處理的目的是盡量減少食物中營養(yǎng)物質(zhì)的損失，A正確。步驟②將牛奶進行梯度稀釋的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于在培養(yǎng)基表面形成單個菌落，B正確。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制時應先調(diào)pH再滅菌，C錯誤。由于生牛奶中的微生物可能不止一種，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基屬于天然培養(yǎng)基，細菌、真菌等均可生長，因此，在實驗中，培養(yǎng)基上可能不止出現(xiàn)一種菌落；依據(jù)樣品液稀釋1000倍，接種液體積為1mL，計算推測若平均菌落總數(shù)少于50個，則表明消毒后牛奶中細菌總數(shù)不超過50000個，消毒合格，D正確。1．(2023·江蘇卷)下列關(guān)于細菌和酵母菌實驗的敘述，正確的是(A)A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細菌的數(shù)量測定解析：本題主要考查細菌和酵母菌的培養(yǎng)。通常細菌的生長速度比酵母菌快，酵母菌菌落比細菌大而厚，B錯誤；培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，易為雜菌污染，酵母菌和細菌培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，而過濾除菌法是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去，一般用于不耐高溫的物體的除菌，C錯誤；血細胞計數(shù)板可用于酵母菌的數(shù)量測定，細菌計數(shù)板可用于細菌等較小的細胞的計數(shù)，D錯誤。2．平板涂布是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當?shù)氖?B)A．固體培養(yǎng)基滅菌后，應冷卻至50℃左右時倒平板B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長C．平板涂布分離到的單菌落需進一步劃線純化D．平板涂布法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)解析：倒好的平板需要冷卻凝固后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影響接種后微生物的生長。3．(2023·山東卷)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是(D)A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物解析：不含有氮源的平板可用來培養(yǎng)能利用空氣中氮氣的微生物，A錯誤；平板涂布時，涂布器使用前必須進行滅菌處理，以防止外來雜菌的污染，B錯誤；接種后未長出菌落的培養(yǎng)基，也可能有少量微生物，所以不能直接丟棄，C錯誤；在以尿素為唯一氮源的平板上，若微生物可以產(chǎn)生脲酶，則可以利用脲酶分解尿素而獲得氮源生長，其他不能產(chǎn)生脲酶的微生物則不能生長，可以把合成脲酶的微生物分離出來，D正確。4．(2023·鹽城一模)人們在研究、利用微生物時，需用無菌技術(shù)培養(yǎng)獲取純種微生物，并對其進行計數(shù)或保存。下列有關(guān)敘述正確的是(A)A．用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，結(jié)果往往比實際值低B．培養(yǎng)基配制過程是計算、稱量、溶化、調(diào)pH、定容、滅菌、倒平板C．高壓蒸汽滅菌后，打開排氣閥，待壓力表指針降至“0”后開蓋取物D．獲得純種微生物后，利用涂布平板法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存解析：用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，由于兩個或多個細胞常形成一個菌落，因此結(jié)果往往比實際值低，A正確；培養(yǎng)基配制過程先定容，后調(diào)pH，B錯誤；滅菌后，等壓力表指針降至“0”時，打開排氣閥排氣，打開鍋蓋，取出滅菌物品，C錯誤；獲得純種微生物后，利用劃線分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存，D錯誤。5．(多選)(2021·江蘇卷)為提高一株石油降解菌的凈化能力，將菌涂布于以石油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，以致死率為90%的輻照劑量誘變處理。下列敘述不合理的是(AB)A．將培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)皿中后滅菌，可降低培養(yǎng)基污染的概率B．涂布用的菌濃度應控制在30～300個·mL－1C．需通過預實驗考察輻照時間對存活率的影響，以確定最佳誘變時間D．挑取培養(yǎng)基上長出的較大單菌落，純化后進行降解效率分析解析：培養(yǎng)基應先滅菌再分裝于培養(yǎng)皿中，A不合理；涂布時所用菌液不超過0.1mL，平板上的菌落數(shù)應介于30～300個，又題干中90%的致死率，因此涂布用的菌濃度控制在3000～30000個·mL－1，B不合理；輻照劑量和誘變時間都是正式實驗的無關(guān)變量，可通過預實驗確定，C合理；石油降解菌能分解石油獲得碳源，形成菌落，挑取培養(yǎng)基上長出的較大單菌落，純化后進行降解效率分析，以獲得能高效降解石油的菌種，D合理。配套精練一、單項選擇題1．(2023·南京江寧區(qū)一模改編)下列與微生物培養(yǎng)有關(guān)的說法，錯誤的是(C)A．平板劃線法每次劃線前和最后一次劃線后都需要對接種環(huán)灼燒滅菌B．巴氏消毒法可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，而不破壞其營養(yǎng)成分C．培養(yǎng)基的配制全程都要在酒精燈火焰旁進行D．利用稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)，結(jié)果較真實值低解析：培養(yǎng)基的配制不需要全程都在酒精燈火焰旁進行，只有滅菌后的各項操作要在酒精燈火焰旁進行。2．(2023·常熟中學)下表為某培養(yǎng)基的部分配方，下列有關(guān)敘述正確的是(C)成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4瓊脂F(xiàn)eSO4蒸餾水含量10g10g2g15g0.5g1000mLA．配制培養(yǎng)基、倒平板、接種均需要在酒精燈火焰旁進行B．該培養(yǎng)基的有機碳源包括蛋白胨、葡萄糖和瓊脂C．除去蛋白胨，該培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)固氮微生物D．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長解析：培養(yǎng)基配制好后需要進行滅菌，故配制培養(yǎng)基過程不需要在酒精燈火焰旁進行，A錯誤；瓊脂只是凝固劑，不是碳源，B錯誤；除去蛋白胨，該培養(yǎng)基就是無氮培養(yǎng)基，只有利用空氣中的氮氣作為氮源的固氮微生物能夠在上面生長，C正確；倒好的平板要等冷卻凝固后再使用，D錯誤。3．(2024·南京調(diào)研)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上接種尿素分解細菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(B)A．圖示采用的接種方法為平板劃線法和稀釋涂布平板法B．培養(yǎng)基中的尿素被分解后，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色C．該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的D．可用干熱滅菌法對盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進行滅菌解析：據(jù)圖可知，圖中的微生物接種方法是平板劃線法，A錯誤；培養(yǎng)基中的尿素被分解后呈堿性，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色，B正確；該接種方法中隨著劃線次數(shù)增加，菌落數(shù)目減少，該實驗Ⅲ區(qū)有單菌落，可以達到菌種純化目的，C錯誤；可用濕熱滅菌法對盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進行滅菌，D錯誤。4．(2024·淮安調(diào)研)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是(D)A．平板涂布時需在酒精燈火焰旁，打開皿蓋放在一邊，用滅菌后的涂布器進行涂布B．空白平板使用前需進行無菌鑒定，接種后未長出菌落的平板可以直接丟棄C．采用稀釋涂布平板計數(shù)時，統(tǒng)計結(jié)果往往多于原始菌液中微生物數(shù)量D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物解析：平板涂布時，不能將皿蓋打開放在一邊，需用左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，用滅菌后的涂布器涂布，A錯誤；接種后未長出菌落的培養(yǎng)基也可能有少量微生物，為避免污染環(huán)境，不能直接丟棄，B錯誤；采用稀釋涂布平板計數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個細胞聚集在一起繁殖形成的，所以統(tǒng)計結(jié)果往往少于實際的活菌數(shù)，C錯誤；在以尿素為唯一氮源的平板上，若微生物可以產(chǎn)生脲酶，則可以利用脲酶分解尿素氨而獲得氮源生長，其他不能產(chǎn)生脲酶的微生物則不能生長，可以把合成脲酶的微生物分離出來，D正確。5．(2022·海南卷)為探究校內(nèi)植物園土壤中的細菌種類，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開展相關(guān)實驗。下列有關(guān)敘述錯誤的是(C)A．采樣時應隨機采集植物園中多個不同地點的土壤樣本B．培養(yǎng)細菌時，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．鑒定細菌種類時，除形態(tài)學鑒定外，還可借助生物化學的方法解析：土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時，才能將聚集的細菌分散開，在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯誤。6．(2023·南京三模)下列有關(guān)微生物的培養(yǎng)與應用的敘述，錯誤的是(D)A．濕熱滅菌后倒的平板和接種后的平板均需倒置B．將未接種的平板培養(yǎng)并觀察有無菌落，以判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格C．同一稀釋度下至少要涂布三個平板，待菌落數(shù)穩(wěn)定后計數(shù)D．纖維素分解菌鑒定時，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅則能初步鑒定解析：平板倒置既可防止皿蓋上凝結(jié)的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染，又可避免培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)，A正確；將未接種的平板培養(yǎng)并觀察有無菌落，若未接種的培養(yǎng)基表面有菌落生長，則培養(yǎng)基滅菌不合格，若未接種的培養(yǎng)基表面無菌落生長，則培養(yǎng)基滅菌合格，B正確；同一稀釋度下至少要涂布三個平板，進行重復實驗，并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時計數(shù)，避免因培養(yǎng)時間不足而引起的菌落計數(shù)出現(xiàn)誤差，C正確；對纖維素分解菌鑒定時，需在培養(yǎng)基中加入剛果紅試劑，D錯誤。7．(2024·南京六校聯(lián)合調(diào)研)熔噴布的主要成分是聚丙烯，會對環(huán)境造成污染。某科研小組從土壤中分離到一種能分解聚丙烯的細菌。下列說法正確的是(B)A．配制固體培養(yǎng)基時，需要在無菌的環(huán)境中進行B．稀釋涂布平板法所用的菌濃度應控制在300～3000個·mL－1C．從土壤中分離能分解聚丙烯的細菌，可采用平板劃線法進行分離與計數(shù)D．純培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿蓋做標記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)解析：配制固體培養(yǎng)基時，不需要在無菌的環(huán)境中進行，因為培養(yǎng)基配制好之后要進行滅菌，A錯誤；涂布時吸取的菌液不超過0.1mL，平板上的菌落數(shù)應介于30～300個，因此，涂布用的菌濃度應控制在300～3000個·mL－1，B正確；平板劃線法只能對微生物進行分離，不能計數(shù)，從土壤中分離能分解聚丙烯的細菌，可采用稀釋涂布平板法進行分離與計數(shù)，C錯誤；純培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿底做標記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，這樣方便觀察，D錯誤。8．(2023·南通期中)根據(jù)國家標準(GB19645—2010)每毫升合格的巴氏殺菌乳中細菌總數(shù)不得超過50000個。某興趣小組進行了新鮮牛奶最合適的消毒溫度的探究，相關(guān)實驗操作不合理的是(C)A．為了使計數(shù)更標準，通常要同一稀釋度下的牛奶接種3個平板，重復計數(shù)B．將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理相同且適宜的時間C．對處理后的牛奶利用平板劃線法進行接種后，在37℃下培養(yǎng)24h，然后計數(shù)D．統(tǒng)計培養(yǎng)基上全部菌落數(shù)，不一定以菌落數(shù)最少組的處理溫度作為最適消毒溫度解析：為了使計數(shù)更標準，通常要同一稀釋度下的牛奶接種3個平板，重復計數(shù)，然后取平均值，這樣可以減小誤差，A正確；實驗探究的是新鮮牛奶的最適消毒溫度，因此采用巴氏消毒法的相關(guān)溫度，將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理相同且適宜的時間，B正確；對處理后的牛奶進行梯度稀釋后，利用涂布法接種平板并在37℃下培養(yǎng)24h，然后計數(shù)，C錯誤；由于溫度過高會影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，進而破壞牛奶中的營養(yǎng)成分，所以菌落數(shù)最少的組對應的溫度不一定是最適的消毒溫度，最適的消毒溫度應保證每毫升合格巴氏殺菌乳中細菌總數(shù)不超過50000個，同時還得保證牛奶的營養(yǎng)價值不被破壞，D正確。9．(2024·南京零模)細菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素進行治療。當細菌出現(xiàn)耐藥性時，療效下降。金黃色葡萄球菌(SAU)是細菌性肺炎的病原體之一。A、B、C、D四種抗生素均可治療SAU引起的肺炎。為選出最佳療效的抗生素，研究者分別將含等劑量抗生素A、B、C、D四張大小相同的濾紙片a、b、c、d置于SAU均勻分布的平板培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖。下列相關(guān)敘述不正確的是(C)A．對實驗使用的培養(yǎng)皿進行滅菌，可以采用干熱滅菌的方法B．用一定稀釋倍數(shù)的菌液涂布在不含抗生素的培養(yǎng)基上可獲得SAU均勻分布的平板C．該實驗表明，臨床上療效最佳的是抗生素DD．濾紙片b周圍抑菌圈中出現(xiàn)一菌落，可能是形成該菌落的SAU發(fā)生了基因突變解析：對培養(yǎng)皿等玻璃器皿進行滅菌可采用干熱滅菌的方法，A正確；抗生素會抑制細菌生長，用一定稀釋倍數(shù)的菌液涂布在不含抗生素的培養(yǎng)基上可獲得SAU均勻分布的平板，B正確；抑菌圈越大，說明抗生素的抑菌效果越好，因此A、B、C、D四種抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素A，C錯誤；濾紙片b周圍抑菌圈中出現(xiàn)一菌落，可能是該菌落的SAU發(fā)生了基因突變，產(chǎn)生抗性，D正確。10．(2024·南通海門區(qū)一調(diào))研究者將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)基上，凝固后形成薄層，培養(yǎng)A菌至該薄層變渾濁(如圖)，然后接種某湖泊水樣，嘗試從湖水中分離出有溶菌特性的細菌。下列敘述錯誤的是(A)A．含A菌的少量培養(yǎng)基中含有瓊脂和蛋白胨，為細菌提供碳源和氮源B．若湖泊水樣的含菌量較高，需稀釋后再依次涂布于不同的渾濁薄層上C．待接種的水樣被充分吸收后，將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D．接種水樣后，在能溶解A菌的菌落周圍會出現(xiàn)溶菌圈解析：瓊脂是凝固劑，不為細菌提供碳源，蛋白胨主要來源于動物原料，蛋白胨主要為細菌提供碳源、氮源，A錯誤；為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上，B正確；平板冷凝后皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，故待接種的水樣被充分吸收后，將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，C正確；接種水樣培養(yǎng)一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍不會出現(xiàn)菌體(菌體被破壞)，則其周圍會出現(xiàn)透明圈(溶菌圈)，D正確。二、多項選擇題11．(2023·蘇錫常鎮(zhèn)二模)為篩選出可高效抑制番茄枯萎病菌(一類真菌)的土壤芽孢桿菌菌株，科研人員從土壤中采集、分離、篩選芽孢桿菌菌株作為待測菌株，并采用平板對峙培養(yǎng)法觀察各待測菌株的抑菌能力。如圖為研究過程示意圖，下列敘述正確的是(BD)A．過程①常利用涂布器蘸取0.1mL菌液涂布平板B．過程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、顏色進行挑選C．若甲、乙、丙三個平板的平均菌落數(shù)為12個，則10g土樣中芽孢桿菌約有1.2×109個D．實驗篩選出的菌株仍需進行大田種植試驗，以檢測防治效果解析：過程①常利用移液器移取0.1mL菌液涂布平板，用涂布器在培養(yǎng)基上對菌液進行涂布，A錯誤；每種細菌都有特定的菌落的形態(tài)、大小和顏色，所以過程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、顏色進行挑選，B正確；甲、乙、丙三個培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，多種微生物都能夠在上面生長繁殖，不屬于選擇培養(yǎng)基，即12個菌落不一定都是芽孢桿菌形成的，C錯誤；實驗篩選出的菌株需要進一步確定其效果，通過大田種植試驗，檢測防治效果，D正確。12．(2023·江蘇模擬)亞磷酸鹽是一種特殊的磷源，如圖是研究人員篩選、檢測并保存高效利用亞磷酸鹽細菌的過程。相關(guān)敘述正確的是(CD)A．圖中所用的培養(yǎng)基都應以亞磷酸鹽為唯一磷源，并加入瓊脂B．步驟①的目的是便于精確計算土壤中能利用亞磷酸鹽的微生物數(shù)量C．步驟②采用涂布平板法接種，根據(jù)菌落的形態(tài)、大小、顏色等對菌種做初步鑒定D．步驟③檢測細菌利用亞磷酸鹽的能力，步驟④將優(yōu)良菌種保存于斜面培養(yǎng)基上解析：圖中所用的培養(yǎng)基都應以亞磷酸鹽為唯一磷源，即選擇培養(yǎng)基，但③過程用的是液體培養(yǎng)基，沒有加入瓊脂，A錯誤；利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計微生物的數(shù)量，得到的是估計值，B錯誤；菌落的形態(tài)、大小、顏色等可反映微生物的特征，可做初步鑒定，C正確；步驟③復篩過程目的是檢測細菌利用亞磷酸鹽的能力，步驟④將優(yōu)良菌種保存于斜面培養(yǎng)基上，以便后期利用，D正確。三、非選擇題13．(2024·如皋期初)測定水樣是否符合飲用水的衛(wèi)生標準，常用濾膜法測定大腸桿菌的總數(shù)。大腸桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸造成