第59講DNA相關的兩個重要實驗【課標內容】1．實驗：DNA的提取與鑒定；2．實驗：利用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增DNA片段并完成電泳鑒定或運用軟件進行虛擬PCR實驗。實驗17DNA的粗提取與鑒定實驗回歸1．實驗思路、原理(1)提取的基本思路：DNA、RNA、蛋白質和脂質等在物理和化學性質方面存在差異，利用這些差異，對DNA進行提取。(2)相關原理2．材料選擇(1)依據：選用__DNA含量高__的組織，成功的可能性更大。(2)常用材料：新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花、雞血和豬肝等(方法可能稍有不同)。3．實驗過程解疑釋惑(1)研磨液的成分和作用研磨液成分作用SDS使蛋白質變性EDTA抑制DNA酶Tris－HCl緩沖液穩(wěn)定DNA(2)研磨的目的：破碎細胞，使核物質容易溶解在研磨液中。(3)低溫放置幾分鐘(或酒精預冷)的作用：①可抑制核酸水解酶的活性，進而抑制DNA降解；②抑制DNA分子運動，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA的柔韌性，減少其斷裂。(4)攪拌時應輕緩、并沿一個方向的目的：減少DNA斷裂，以便獲得較完整的DNA分子。實驗延伸用雞血細胞作為實驗材料的操作流程(蘇教版)步驟材料/方法說明制備雞血細胞液新鮮雞血哺乳動物成熟的紅細胞沒有細胞核(或不含有DNA)，故不能選用提取血細胞核物質加入一定量的蒸餾水，破碎細胞，并用玻璃棒攪拌，過濾，獲取含有DNA的濾液細胞吸水漲破，玻璃棒攪拌加速細胞破裂析出DNA①取濾液加入物質的量濃度為2mol·L－1的NaCl溶液；②緩緩加入一定量的蒸餾水，調節(jié)物質的量濃度至0.14mol·L－1，析出DNA，絲狀物不再增加時停止加蒸餾水；③用玻璃棒挑起絲狀物，獲得含一定雜質的DNADNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同向濾液中加入等體積的、冷卻的體積分數為95%的酒精，靜置2～3min，并用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起白色絲狀物DNA酒精能夠減少DNA的降解，同時也能夠溶解雜質實驗素養(yǎng)一、實驗基本理論——實驗變量與原則取兩支20mL的試管，各加入2mol·L－1的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。1．上述實驗中，自變量是__絲狀物或沉淀物的有無__，因變量是__溶液顏色__，無關變量是__2mol·L－1的NaCl溶液、二苯胺試劑和沸水及加熱5min__等。2．實驗遵循的原則：兩支20mL的試管說明實驗需要__分組__，2mol·L－1的NaCl溶液5mL、4mL的二苯胺試劑和沸水中加熱5min中的數字則說明實驗要遵循__等量__原則，“將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中”則說明實驗需遵循__單一變量__原則。二、試劑的選擇和使用DNA提取過程中可以選用雞血或者菜花作為實驗材料。請回答下列關于DNA粗提取和鑒定的問題：1．使用雞血提取DNA時，需在雞血中加入檸檬酸鈉，目的是__防止血液凝固__；在雞血細胞溶液中加入蒸餾水，目的是__使雞血細胞破裂__。2．使用洋蔥提取DNA時，需要加入研磨液，研磨液能夠__防止DNA被水解__，另外有利于蛋白質與DNA發(fā)生分離。3．DNA在物質的量濃度為__0.14__mol·L－1的NaCl溶液中溶解度最低。使用體積分數為95%的冷卻酒精可使DNA__析出__(選填“析出”或“溶解”)。4．此實驗中二苯胺試劑的作用是__鑒定DNA__，需要現配現用。題組訓練1．(2019·江蘇卷)下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是(A)A．用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近B．DNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂C．預冷的乙醇可用來進一步純化粗提的DNAD．用二苯胺試劑鑒定DNA需要進行水浴加熱解析：兔屬于哺乳動物，其成熟的紅細胞沒有細胞核及各種細胞器，提取不到DNA，而雞屬于鳥類，其紅細胞內含有細胞核與各種細胞器，DNA含量較多，A錯誤；DNA分子是非常容易斷裂的，輕柔攪拌的目的是獲得較完整的DNA分子，B正確；DNA不溶于酒精，蛋白質可以溶于酒精，所以冷卻的體積分數為95%的酒精溶液可以進一步純化粗提的DNA，C正確；將析出的DNA溶解在2mol·L－1的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑后需要沸水浴加熱才會呈現藍色，D正確。2．(2022·山東卷)關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是(B)A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了減少DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現藍色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質解析：低溫能夠降低酶的活性，故將過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了減少DNA降解，A正確；離心研磨液的目的是加速細胞膜、細胞器、一些較大雜質的沉淀，B錯誤；DNA遇二苯胺(沸水浴)會形成藍色，因此，二苯胺試劑可以鑒定DNA，C正確；若提取的絲狀物為黃色，說明提取的DNA純度不高，可能含有蛋白質等雜質成分，D正確。實驗18利用PCR技術擴增DNA片段并電泳鑒定實驗回歸1．實驗原理(1)擴增原理：PCR利用了DNA的熱變性原理，通過調節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結合。PCR儀實質上就是一臺能夠__自動調控溫度__的儀器。一次PCR一般要經歷30次循環(huán)。(2)電泳原理：DNA分子具有可解離的基團，在一定的pH下，這些基團可以帶上正電荷或負電荷。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與它所帶電荷__相反__的電極移動，這個過程就是電泳。(3)鑒定原理：PCR的產物一般通過__瓊脂糖凝膠__電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的__大小__和構象等有關。凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為__300nm__的紫外燈下被檢測出來。2．設備：__PCR儀__、電泳裝置等。3．實驗過程(1)PCR操作過程循環(huán)程序變性復性延伸預變性__94__℃，5min——30次94℃，30s__55__℃，30s__72__℃，1min最后1次94℃，1min55℃，30s72℃，1min注：預變性可使DNA充分變性，以利于引物更好地和模板結合。(2)電泳鑒定：配制__瓊脂糖__溶液，加入核酸染料混合→制備凝膠→加緩沖液(沒過凝膠1mm為宜)→加樣(PCR產物與含指示劑的凝膠載樣緩沖液混合，留一個孔加__標準參照物__)→進行電泳(根據電泳槽陽極至陰極之間的距離來設定電壓，一般為1～5V·cm－1。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時，停止電泳)→__紫外燈__下鑒定。題組訓練1．(2021·湖北卷)某實驗利用PCR技術獲取目的基因，實驗結果顯示除目的基因條帶(引物與模板完全配對)外，還有2條非特異條帶(引物和模板不完全配對)。為了減少反應中非特異條帶的產生，以下措施中有效的是(D)A．增加模板DNA的量 B．延長熱變性的時間C．延長延伸的時間 D．提高復性的溫度解析：PCR過程中，引物和模板不完全配對會形成非特異條帶，增加模板DNA的量不會減少反應中非特異條帶的產生；延長熱變性的時間有利于雙鏈DNA解聚為單鏈，不能減少反應中非特異條帶的產生；延長延伸的時間有利于合成新的DNA鏈，但不能減少反應中非特異條帶的產生；在一定溫度范圍內，選擇較高的復性溫度可減少引物和模板間的非特異性結合。2．巢式PCR擴增反應在兩次PCR反應中使用兩組不同引物，先使用外引物對目標區(qū)域DNA片段進行第一次PCR擴增，產生中間產物，然后使用內引物對中間產物進行第二次PCR擴增，產生目標產物。圖1是巢式PCR工作原理示意圖。請回答：eq\o(\s\up7(),\s\do5(圖1巢式PCR工作原理示意圖))eq\o(\s\up7(),\s\do5(圖2電泳結果圖示))(1)巢式PCR反應體系中需加入模板、__dNTP(4種脫氧核苷酸)__、__Taq酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)__、引物、Mg2+、緩沖液等。(2)巢式PCR進行時，若用外引物擴增產生了錯誤片段，再用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率__低__，因此，相較于常規(guī)PCR獲得的產物而言，巢式PCR獲得產物特異性__強__。(3)巢式PCR通常在一個試管中進行第一階段反應，然后將中間產物等轉移到第二試管中進行第二階段反應，不在同一試管中進行的主要原因是__防止內引物在第一階段PCR中發(fā)揮作用，無法實現巢式PCR高精確擴增的目的__。(4)PCR技術的原理是__DNA半保留復制__。為使PCR產物能被限制酶切割，需在引物上添加相應的限制酶的識別序列，該序列應添加在引物的__5′端__(選填“3′端”或“5′端”)。(5)科研人員利用多重巢式PCR技術同時擴增Y染色體上的性別決定基因(SRY)和常染色體上的酪蛋白基因(CSN1S1)，并進行電泳。電泳結果如圖2所示，1～5號為取自不同胚胎的樣品進行巢式PCR的結果，A和B條帶中代表SRY的是__B__。可以確定1～5號中的3和5號胚胎為__雄__性。解析：巢式PCR通過兩輪PCR反應，使用兩套引物擴增特異性的DNA片段，第二對引物的功能是特異性的擴增位于首輪PCR產物內的一段DNA片段。第一輪擴增中，外引物用以產生擴增產物，此產物在內引物的存在下進行第二輪擴增，從而提高反應的特異性，獲得的產物特異性更強。利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率降低。題中利用多重巢式PCR技術同時擴增Y染色體上雄性決定基因(SRY)和常染色體上的酪蛋白基因(CSN1S1)進行電泳，雌性個體沒有SRY，只有一個條帶，雄性有兩個條帶，因此1、2、4是雌性，3、5是雄性，雌性和雄性共有的是常染色體上的酪蛋白基因(CSN1S1)，因此A是CSN1S1，B是SRY。1．(2023·廣東卷)“DNA粗提取與鑒定”實驗的基本過程是：裂解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯誤的是(D)A．裂解：使細胞破裂釋放出DNA等物質B．分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質等C．沉淀：可反復多次以提高DNA的純度D．鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現藍色解析：加入二苯胺試劑后，還需沸水浴處理才能出現藍色，D錯誤。2．(2024·蘇州期初)下列關于瓊脂糖凝膠電泳的敘述，錯誤的是(A)A．加熱熔化的瓊脂糖完全冷卻后加入適量的核酸染料B．電泳緩沖液加入電泳槽時，需沒過凝膠1mm為宜C．可調容量的微量移液器應先做容量設定再安裝槍頭D．停止電泳后應將凝膠置于紫外燈下，觀察和照相解析：瓊脂糖凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結合，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，需待凝膠溶液冷卻至常溫后(不能完全冷卻后加入)，再加入適量的核酸染料攪拌混勻；將電泳樣液加入電泳槽中，電泳緩沖液太多則電流加大；移液槍的使用方法：設定移液的體積，進行吸液及放液。3．(2024·海安期初監(jiān)測)下列關于“DNA的粗提取與鑒定”“DNA片段的擴增與電泳鑒定”實驗的敘述，錯誤的是(D)A．選取細胞分裂旺盛的菜花表層花進行研磨是因為DNA含量高B．研磨時需加入緩沖液，防止DNA在pH發(fā)生變化時降解或變性C．在凝膠中，DNA分子的遷移速率與DNA分子的大小、構象等有關D．PCR產物出現拖尾可能是非特異性擴增過多，可適當降低退火溫度解析：新鮮的菜花DNA含量豐富，易獲取，A正確；研磨時需加入緩沖液，穩(wěn)定溶液的pH，防止DNA在pH發(fā)生變化時降解或變性，B正確；電泳鑒定DNA利用了DNA在電場的作用下，會向著與它所帶電荷相反方向的電極移動，因此在凝膠中，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度、DNA分子的大小、構象等有關，C正確；退火溫度越低，引物和底物越容易結合，錯配情況越多，造成PCR特異性降低，故PCR產物出現拖尾可能是非特異性擴增過多，可適當提高退火溫度，D錯誤。4．下列與DNA相關實驗的敘述，錯誤的是(A)選項實驗方法/原理A證明DNA半保留復制通過檢測14N和15N的放射性強度區(qū)分不同的DNA分子BDNA的粗提取與鑒定利用體積分數為95%的酒精去除部分蛋白質CDNA片段的PCR擴增PCR反應緩沖溶液中的Mg2+能夠激活TaqDNA聚合酶DDNA片段的電泳鑒定在凝膠溶液凝固前加入核酸染料以便對DNA進行染色解析：證明DNA半保留復制利用的是同位素相對原子質量的不同，結合密度梯度離心來區(qū)分不同的DNA分子。配套精練一、單項選擇題1．關于“DNA的粗提取和鑒定”實驗，下列說法正確的是(D)A．研磨時倒入的研磨液，是為了破壞細胞壁B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在DNA提取物中加入二苯胺試劑，迅速呈現藍色D．提取DNA時要用玻璃棒沿一個方向緩緩攪動解析：研磨液是用于破壞細胞結構和細胞膜的試劑，其作用是將細胞破壞，釋放出細胞內的DNA，A錯誤；離心研磨液是為了加速細胞膜、細胞器、一些較大雜質等的沉淀，B錯誤；需要沸水浴加熱才可以看到藍色，C錯誤；提取DNA時用玻璃棒沿一個方向緩緩攪動是為了使DNA分子不斷裂，D正確。2．(2024·高郵10月學情調研)某實驗小組進行“DNA的粗提取與鑒定”實驗，如下為實驗流程：取材→破碎細胞→獲得濾液→去除雜質→進一步提純→DNA鑒定，相關敘述正確的是(B)A．取材時可選用豬血、洋蔥、香蕉、菜花等富含DNA的材料進行實驗B．在液體培養(yǎng)液中培養(yǎng)的大腸桿菌也可作為實驗材料C．提純時在濾液中加入2mol·L－1的NaCl溶液后會出現白色絲狀物DNAD．DNA鑒定時可通過是否加入二苯胺試劑設置對照實驗來觀察實驗現象解析：哺乳動物成熟的紅細胞中沒有細胞核和細胞器，因此不能采用豬血來提取DNA，A錯誤；在液體培養(yǎng)液中培養(yǎng)的大腸桿菌也可作為實驗材料，大腸桿菌是細菌，含有擬核和質粒，DNA含量也較多，適合提取DNA，B正確；DNA在0.14mol·L－1的氯化鈉中溶解度最低，在2mol·L－1的氯化鈉中溶解度最大，因此在2mol·L－1的NaCl溶液中，不會析出白色絲狀物DNA，C錯誤；DNA鑒定時可通過是否加入DNA設置對照實驗來觀察實驗現象，D錯誤。3．下列關于實驗“PCR片段的擴增及電泳鑒定”的敘述，正確的是(D)A．PCR反應中，變性階段需要耐高溫的解旋酶參與B．PCR反應中，復性階段需要DNA聚合酶連接磷酸二酯鍵C．PCR反應中，延伸階段可將脫氧核苷酸連接到引物的5′端D．電泳時，DNA分子在凝膠中的遷移速率與DNA的大小和構象等有關解析：PCR反應中，變性階段需要高溫解開DNA雙螺旋，無需解旋酶，A錯誤；復性階段是指引物與模板結合，無需DNA聚合酶，B錯誤；延伸可將脫氧核苷酸連接到引物的3′端，C錯誤；電泳時，DNA分子在凝膠中的遷移速率與DNA的大小和構象等有關，瓊脂糖凝膠的濃度也會影響遷移速率，D正確。4．下列關于DNA粗提取與鑒定、DNA片段的擴增及電泳鑒定的原理的敘述，正確的是(C)A．利用DNA溶于酒精，但蛋白質不溶于酒精的原理，可分離DNA與蛋白質B．將白色絲狀物加入二苯胺試劑后沸水浴，待試管冷卻后觀察顏色變化C．PCR擴增四輪循環(huán)后，產物中同時含有兩種引物的DNA片段所占比例為7/8D．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著它所帶電荷相同的電極移動的原理解析：DNA不溶于酒精，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精，可將DNA與蛋白質分離，A錯誤；將白色絲狀物溶于2mol·L－1的NaCl溶液中，再加入二苯胺試劑后沸水浴，待冷卻后觀察顏色變化，B錯誤；PCR擴增四輪循環(huán)后，共合成了16個DNA，其中有2個DNA攜帶母鏈，只有一種引物，因此產物中同時含有兩種引物的DNA片段所占比例為14/16＝7/8，C正確；由于同性相斥、異性相吸，帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動，D錯誤。5．(2023·江蘇大聯考)下列關于DNA的粗提取和DNA片段的擴增及電泳鑒定的敘述，錯誤的是(C)A．新鮮的洋蔥、雞血、豬肝等均可作為DNA粗提取的實驗材料B．在提取白色絲狀物時單向攪拌比雙向攪拌更有利于獲得結構完整的DNAC．PCR實驗中使用的槍頭、蒸餾水和移液器等在使用前都必須進行高壓蒸汽滅菌D．PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，將電泳緩沖液加入電泳槽并沒過凝膠1mm后，電泳、觀察解析：理論上只要含有DNA的生物組織均可作為該實驗的材料，因此洋蔥、雞血、豬肝等均可作為提取DNA的材料，A正確；由于DNA成絲狀，因此，在提取白色絲狀物時單向攪拌比雙向攪拌更有利于獲得結構完整的DNA，B正確；PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水等在使用前都必須進行高壓滅菌處理，移液器需要清洗，C錯誤；PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，將電泳緩沖液加入電泳槽并沒過凝膠1mm后，電泳、觀察，這樣可以保證DNA片段在緩沖液中進行遷移，D正確。6．如圖是堿裂解法提取大腸桿菌質粒DNA的簡要步驟。下列說法錯誤的是(D)A．堿性試劑2可破壞大腸桿菌的細胞膜，從而釋放細胞內容物B．試劑3利用了擬核DNA與質粒DNA的長度差異，僅使前者沉淀C．①步驟結束后應敞開管蓋，待殘余酒精完全揮發(fā)后再進行②步驟D．可用任意濃度的NaCl溶液替換②步驟所用的水，以溶解質粒DNA解析：細胞膜主要由脂質和蛋白質構成，堿性試劑可導致蛋白質變性而破壞細胞膜，A正確；擬核中的DNA較大，試劑3處理后在沉淀中，B正確；①步驟利用了DNA不溶解于酒精中的原理，結束后應敞開管蓋，待殘余酒精完全揮發(fā)后再進行②步驟，可提取到質粒DNA，C正確；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在高濃度的NaCl溶液中溶解度高，在特定濃度中處于析出狀態(tài)，需利用2mol·L－1的NaCl溶液溶解，不能用0.14mol·L－1，D錯誤。7．大腸桿菌經溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會纏繞在細胞壁碎片上，靜置一段時間，質粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質粒DNA。用三種限制酶處理提取的產物，電泳結果如圖所示。下列關于質粒的粗提取和鑒定的敘述，錯誤的是(D)A．提取DNA時可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質等物質溶解B．將提取的DNA溶于2mol·L－1NaCl溶液后，可用二苯胺試劑進行鑒定C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著它所帶電荷相反的電極移動的原理D．根據電泳結果，質粒上一定沒有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位點，而有限制酶Ⅲ的切割位點解析：DNA在冷酒精中溶解度很低，提取DNA時加入酒精是為了讓DNA析出，蛋白質等物質溶解，A正確；將提取的DNA溶于2mol·L－1NaCl溶液后，可用二苯胺試劑在沸水浴條件下進行鑒定，DNA遇二苯胺試劑會呈現藍色，B正確；DNA帶負電，電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著它所帶電荷相反的電極移動的原理，C正確；因為質粒的本質是環(huán)狀的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ處理后電泳只有一條條帶，該質粒上可能有一個切割位點，也可能沒有切割位點，D錯誤。8．“SDS法”是提取DNA的常用方法，其提取液成分中的SDS能使蛋白質變性，EDTA是DNA酶抑制劑，Tris作為緩沖劑。下列說法錯誤的是(D)A．SDS能破壞蛋白質空間結構，從而促進DNA和蛋白質分離B．EDTA能減少DNA水解，提高DNA的完整性C．Tris作為緩沖劑能維持pH的穩(wěn)定，保證DNA結構正常D．提取到的DNA可在常溫下用二苯胺試劑進行鑒定解析：SDS能使蛋白質變性，破壞蛋白質空間結構，從而促進DNA和蛋白質分離，A正確；EDTA是DNA酶抑制劑，能減少DNA水解，提高DNA的完整性和總量，B正確；Tris作為緩沖劑能維持pH的穩(wěn)定，可以防止DNA結構被破壞，保證DNA結構正常，C正確；鑒定DNA的方法是沸水浴下用二苯胺試劑鑒定，D錯誤。二、多項選擇題9．“關于DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列敘述正確的是(BD)A．羊的成熟紅細胞可作為提取DNA的材料B．預冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，可防止DNA水解C．在切碎的洋蔥中加入適量研磨液進行研磨，并過濾后棄去濾液D．沸水浴處理加入DNA粗提物、二苯胺試劑的2mol·L－1NaCl溶液會變成藍色解析：羊為哺乳動物，其成熟紅細胞不含細胞核，不能作為提取DNA的材料，A錯誤；預冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解，有利于提取更多的DNA，B正確；提取DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑和食鹽，充分研磨，DNA溶解于氯化鈉溶液，過濾并取濾液，C錯誤；在沸水浴條件下，DNA與二苯胺試劑反應呈現藍色，D正確。10．(2024·南京六校10月聯調)下列有關生物學實驗中出現的異常結果及其可能原因的分析，正確的是(ACD)選項實驗名稱異常結果可能原因A綠葉中色素提取與分離濾紙條上未出現色素帶濾液細線沒入層析液中BDNA擴增后檢測(電泳技術)目的亮帶前后拖尾引物設計過短或退火溫度過高C纖維素分解菌的分離、純化平板培養(yǎng)基表面未出現菌落涂布器涂布時灼燒未冷卻DDNA粗提取與鑒定鑒定后未出現藍色實驗未進行水浴加熱解析：綠葉中色素提取與分離實驗中，濾液細線沒入層析液中，使色素溶解到層析液中，會導致濾紙條上無色素帶出現，A正確；PCR過程中引物過短會引起錯配現象，導致很多DNA并不是目標DNA，如果