ICS67.060CCSB22DB36DeterminationofaflatoxinB1,zearalenoneanddeoxynivalenolingrain——Quantumdotmicrospherelateralflowi江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB36/Z003—2022 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 27試樣制備 28測(cè)定步驟 29結(jié)果表述 3 3DB36/Z003—2022本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學(xué)、江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局、江西省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證總院、江西維邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：賴(lài)衛(wèi)華、李越凡、余頤、劉文娟、羅凱、張威、郭平、熊華亮、熊勇華、陳媛、李響敏、彭娟、黃小林、唐麗君、肖小月、吳夢(mèng)云、唐艷艷、李雯、蔣峰華。1DB36/Z003—2022食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法本文件規(guī)定了糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析檢測(cè)方法。本文件適用于大米、玉米、小麥中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的快速檢測(cè)。本方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1的檢出限為1μg/kg，定量限為2μg/kg；檢測(cè)玉米赤霉烯酮的檢出限為10μg/kg，定量限為20μg/kg；檢測(cè)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢出限為50μg/kg，定量限為150μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.22食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定GB5009.111食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y(cè)定GB5009.209食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析技術(shù)原理，通過(guò)熒光免疫分析儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，對(duì)黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇進(jìn)行定量檢測(cè)。5試劑和材料除另有說(shuō)明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2氯化鈉（NaCl）。5.3氯化鉀（KCl）。5.4磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。2DB36/Z003—20225.5磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.6試樣提取液（84%乙腈-水溶液）：吸取84mL乙腈（5.1），用水定容至100mL，混勻。5.7試樣稀釋液：分別稱(chēng)取氯化鈉（5.2）8g、氯化鉀（5.3）0.2g5.8磷酸氫二鈉（5.4）1.44g、磷酸二氫鉀（5.5）0.2g于1000mL燒杯中，加水充分?jǐn)嚢枞芙夂蠖ㄈ葜?000mL。6儀器和設(shè)備6.1分析天平：感量為0.01g。6.2微量移液器：量程為20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。6.3旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。6.4恒溫孵育器：設(shè)定溫度為37℃,誤差不超過(guò)±1℃。6.5熒光免疫分析儀：激發(fā)波長(zhǎng)為360nm±5nm，發(fā)射波長(zhǎng)為610nm±5nm。6.6離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.7離心管：1.5mL和50mL。6.8高速粉碎機(jī)：轉(zhuǎn)速≥30000r/min6.9分樣篩：20目。6.10黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇量子點(diǎn)微球免疫層析包裝盒：含量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)內(nèi)置卡（ID卡），ID卡內(nèi)設(shè)對(duì)應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。7試樣制備7.1分樣和粉碎將原始樣品充分混勻，按照GB/T5491方法中的四分樣方法進(jìn)行分樣，用高速粉碎機(jī)（6.8）粉碎后過(guò)20目分樣篩。7.2試樣前處理7.2.1稱(chēng)取5g±0.05g粉碎試樣于50mL離心管中，加入25mL樣品提取液（5.6漩渦震蕩混勻2min，4000rpm離心2min，如無(wú)離心機(jī)可靜置2min。7.2.2檢測(cè)黃曲霉毒素B1：取50μL離心后上清液加入950μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測(cè)。7.2.3檢測(cè)玉米赤霉烯酮：取50μL離心后上清液加入700μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測(cè)。7.2.4檢測(cè)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇：取50μL離心后上清液加入700μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測(cè)。注：不同廠家量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)8測(cè)定步驟8.1測(cè)試前打開(kāi)熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)包裝盒中的ID卡與產(chǎn)品批號(hào)是否匹配，插入ID卡，在儀器測(cè)試界面點(diǎn)擊“讀卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。8.2將恒溫孵育器（6.4）開(kāi)機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。8.3從密封包裝袋中取出量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條，在30min內(nèi)使用。3DB36/Z003—20228.4將檢測(cè)卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測(cè)液于量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。8.5反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條插入熒光免疫分析儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測(cè)試”，儀器會(huì)自動(dòng)給出定量測(cè)試結(jié)果，15min內(nèi)測(cè)試，結(jié)果有效。注：不同廠家熒光免疫分析儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行。9結(jié)果表述樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量由熒光免疫分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為微克/千克(μg/kg）。10.1注意事項(xiàng)：使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，儀器的具體操作詳見(jiàn)儀器操作說(shuō)明書(shū)；檢