微生物的培養(yǎng)技術及應用什么是培養(yǎng)基？如何配制？什么是無菌技術？怎樣進行酵母菌的純培養(yǎng)？錄目Contents1234培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration無菌技術Aseptictechnique微生物的純培養(yǎng)Pureculture習題鞏固Exercisestoconsolidate問題探討Problemsdiscussed

向經過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細菌，再經過發(fā)酵就可以制成酸奶，由于制作工藝并不復雜，一些人會在家里自制酸奶，自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導致腸胃不適的事件屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？

應該先對制作用具和原料進行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進入。這需要應用無菌技術和微生物的培養(yǎng)技術微生物的類群Thetaxaofmicroorganisms微生物個體無法用肉眼觀察的微小生物。無細胞結構原核細胞真核細胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履蟲、變形蟲等微生物的類群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌體等DNA病毒細菌:藍細菌、大腸桿菌、乳酸菌等；放線菌:鏈霉菌等培養(yǎng)微生物的條件Conditionsforcultureofmicroorganisms①要為人們需要的微生物提供合適的___________條件。②要確保

，并將需要的微生物分離出來。營養(yǎng)和環(huán)境其他微生物無法混入微生物結構簡單、形體微小，眼睛看不到，若想得到純凈的微生物，就必須對其進行培養(yǎng)和分離。實驗室培養(yǎng)微生物的條件——培養(yǎng)基——無菌技術Part1培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration培養(yǎng)基1.概念：3.類型：2.作用：人們按照微生物對

的不同需求，配制出供其_________的營養(yǎng)基質。營養(yǎng)物質生長繁殖用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或

。（①提供微生物繁殖所需各種營養(yǎng)，②異養(yǎng)微生物的能源）積累其代謝物固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無瓊脂分離、計數(shù)、鑒定等擴大培養(yǎng)、工業(yè)生產培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration注意說明①加入培養(yǎng)基中的凝固劑（如瓊脂），一般不能被微生物

利用，只起到凝固作用。②微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。③擴大培養(yǎng)獲得大量菌種時，常用液體培養(yǎng)基。一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration4.營養(yǎng)構成：（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽①碳源：無機碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物②氮源：無機氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有機氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等含C、H、O、N的有機物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源③無機鹽：Ca、K、Mg為大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素牛肉膏、蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質各種有機物蛋白質、核酸培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration（2）特殊需求：滿足微生物對

、

、

的需求。特殊營養(yǎng)物質pHO2④培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供

的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加

；②培養(yǎng)霉菌時，需要將培養(yǎng)基調至

；③培養(yǎng)細菌時，需要將培養(yǎng)基調至

；維生素酸性中性或弱堿性無氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000ml水維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等

主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質化學成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業(yè)生產培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的類型及用途培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細菌?培養(yǎng)基的類型及用途具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基加入青霉素青霉素能抑制細菌生長，對真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮氣不加有機碳源自養(yǎng)型微生物能利用無機碳源鑒別培養(yǎng)基加入酚紅培養(yǎng)基尿素被分解產生氨，培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。加入剛果紅

剛果紅與纖維素能形成紅色復合物，當纖維素被分解后，復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物鑒別分解尿素的細菌鑒別纖維素分解菌Part2無菌技術Aseptictechnique無菌技術Aseptictechnique1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵是

。防止雜菌污染①消毒：是指使用較為

的物理、化學或生物等方法

殺死物體表面或內部一部分微生物。②滅菌：是指使用強烈的理化方法殺死

的微生物，

包括芽孢和孢子。2.防止雜菌污染的方法：溫和物體內外所有目的：①防止培養(yǎng)物被污染；②防止感染實驗操作者。避免已經滅菌的材料用具與周圍物品接觸；為了避免周圍環(huán)境微生物污染，操作應在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進行。無菌技術Aseptictechnique消毒使用較為溫和的物理、化學或生物等方法，殺死物體表面或內部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：①煮沸消毒法：②巴氏消毒法：③化學藥劑消毒法：④紫外線消毒法：用紫外燈照射接種室、接種箱、超凈工作臺。100℃煮沸5-6min。62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

用70%酒精擦拭雙手；氯氣消毒水源。無菌技術Aseptictechnique滅菌濕熱滅菌法、干熱滅菌法、灼燒滅菌法1.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌鍋內100kPa、121℃下維持15-30min1.原理：高溫蒸汽破壞蛋白質、核酸等結構使其變性。2.優(yōu)點：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體?；颈３峙囵B(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。3.對象：培養(yǎng)基等。無菌技術Aseptictechnique滅菌②干熱滅菌法干熱滅菌箱內160~170℃下加熱2~3h。1.原理：使微生物細胞膜破壞、蛋白質變性和原生質干燥等2.對象：耐高溫，需保持干燥的物品，適用于玻璃器皿

(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌無菌技術Aseptictechnique滅菌③灼燒滅菌法常用于涂布器、接種環(huán)、接種針、試管口或其它金屬用具等的滅菌。直接在酒精燈火焰的充分燃燒層（外焰）灼燒。1.效果：最徹底2.原理：使微生物燃燒3.對象：接種工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產和實驗室常用高壓蒸汽滅菌鍋內,100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺Part3微生物的純培養(yǎng)Pureculture微生物的純培養(yǎng)Pureculture1.培養(yǎng)物：在微生物學中，將接種于

內，在合適條件下形成的含

的群體。培養(yǎng)基特定種類微生物3.純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。2.純培養(yǎng)物：由

所獲得的微生物群體。單一個體繁殖步驟：1）配制培養(yǎng)基2）滅菌3）接種4）分離5）培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast菌落1.概念：2.特征：

分散的微生物(單一個體)在適宜的

表面或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結構的

。

固體培養(yǎng)基子細胞群體形狀、大小、光澤度、顏色、透明度等。——是鑒定菌種的重要依據(jù)3.獲得單菌落的方法：①平板劃線法②稀釋涂布平板法酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟接種和分離培養(yǎng)酵母菌制備培養(yǎng)基1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基滅菌倒平板1）配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟2）滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內，在160-170℃滅菌2h。包器材酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟3）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板注意事項：①溫度：50℃左右②操作：在酒精燈火焰附近③冷凝后平板倒置酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟2.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。平板劃線法平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。單個細胞微生物群單個菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞③試管口通過火焰⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。平板劃線法Platemarking連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法劃3個平板（重復實驗）1個不劃線（空白對照）1）一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；2）存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落?！捌桨鍎澗€”實驗操作平板劃線法Platemarking分區(qū)劃線法12345①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)平板劃線法注意事項:平板劃線法Platemarking1.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。2.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。平板劃線法Platemarking3.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細胞殺死接種環(huán)上原有微生物酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟3.培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染作對照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟4.結果分析與評價1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？

如果有，說明了什么？

在未接種的培養(yǎng)基表面應該沒有菌落生長，如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染或滅菌不徹底。2.你是如何記錄實驗結果的？

可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟4.結果分析與評價3.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點，則說明純化酵母菌的操作成功；如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast評估論點的可信程度

所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法?！敖退亍敝谱骶褪抢梦⑸镞M行無氧呼吸的原理，進行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括-些簡單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(包括多種酶)、有機酸等成分，不存在它獨有的、特殊的營養(yǎng)物質，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產生的有毒物質，食用后可能會危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進消化和提高免疫力”的論點值得懷疑。稀釋涂布平板法平板劃線法Part4習題鞏固Exercisestoconsolidate習題鞏固Exercisestoconsolidate1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關表述是否正確。（1）培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質濃度越高，對微生物的生長越有利。

（）（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。

（）×√×習題鞏固Exercisestoconsolidate2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌