生物技術(shù)---免疫學(xué)技術(shù)基本概念抗原（antigen）進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)能刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，從而引起動(dòng)物產(chǎn)生抗體或形成致敏淋巴細(xì)胞，并能和抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)分完全抗原和半抗原抗體(antibody)：抗原刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)，由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生分泌的能和相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白第三章食品安全快速檢測技術(shù)4免疫學(xué)技術(shù)--抗原抗體反應(yīng)可對抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測抗體抗原以非共價(jià)鍵結(jié)合不可見反應(yīng)：幾秒-幾分鐘可見反應(yīng)：數(shù)分鐘（小時(shí)、日）影響因素電解質(zhì)溫度酸堿度第三章食品安全快速檢測技術(shù)4免疫學(xué)技術(shù)酶聯(lián)免疫法放射免疫法將同位素分析的靈敏性和抗體抗原反應(yīng)的特異性這兩大特點(diǎn)結(jié)合起來的免疫標(biāo)記測定技術(shù)

缺點(diǎn)：需特殊儀器設(shè)備;一定的防護(hù)條件;半衰期短及試驗(yàn)廢物難以處理熒光免疫法以熒光素和羅丹明作為標(biāo)記物，可在熒光顯微鏡下檢查顯示熒光的復(fù)合物和所在部位主要用于醫(yī)學(xué)實(shí)踐中各類病原微生物的快速診斷以及組織切片中特異抗體的檢測其他

膠體金標(biāo)記第三章食品安全快速檢測技術(shù)4酶聯(lián)免疫法（enzymeimmunoassay)以酶標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗體抗原反應(yīng)酶結(jié)合物應(yīng)具有雙功能：高度特異的免疫反應(yīng)、生物催化放大作用基本方法間接法雙抗體夾心法競爭法生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidinsystem，BAS）某些新進(jìn)展食品安全快速檢測技術(shù)4酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）間接法1、將已知可溶性抗原吸附于載體2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗體的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記的二抗6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測定反應(yīng)顏色深淺食品安全快速檢測技術(shù)4雙抗體夾心法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記特異性抗體6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）食品安全快速檢測技術(shù)4競爭法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液和酶標(biāo)記的已知抗原液4、溫育后清洗5、加入酶作用底物6、測定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）食品安全快速檢測技術(shù)4生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidinsystem）基本概念生物素：是一種維生素H，經(jīng)活化后，可與抗體、抗原、酶以多配一的方式共價(jià)結(jié)合，且不影響它們的活性親和素：從卵蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，可與酶偶合，以1配多的方式對生物素有很強(qiáng)的親和力BAS用于檢測的基本方法：

BAB法或BRAB法

BA法

ABC法酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）食品安全快速檢測技術(shù)4酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）食品安全快速檢測技術(shù)4均相酶免疫測定法無需“固定在載體上”；無需“溫育后清洗”斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)以微孔薄膜為載體，酶免疫反應(yīng)陽性結(jié)果在膜上出現(xiàn)色斑點(diǎn)膠體金標(biāo)記較酶標(biāo)記更為簡便酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）食品安全快速檢測技術(shù)4豬肉和尿液鹽酸克倫特羅的免疫膠體金法快速檢測食品安全快速檢測技術(shù)4

“瘦肉精”學(xué)名為鹽酸克倫特羅，醫(yī)學(xué)上又稱克喘素，常用于治療哮喘。由于鹽酸克倫特羅添加于飼料飼喂動(dòng)物后可明顯促進(jìn)動(dòng)物生長,提高瘦肉率,所以養(yǎng)殖戶稱其為“瘦肉精”，曾在國內(nèi)外廣泛用于動(dòng)物飼養(yǎng)生豬食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，個(gè)別會(huì)出現(xiàn)腿抽搐，站不穩(wěn)，爬坡困難；宰后豬的肌肉特別鮮紅，后臀肌肉飽滿，肥肉非常薄瘦肉精介紹食品安全快速檢測技術(shù)4瘦肉精介紹“瘦肉精”化學(xué)性質(zhì)特別穩(wěn)定，加熱到170℃時(shí)才能被分解，故一般家庭廚房加熱不能將其分解破壞食用后在胃腸道吸收快，作用維持時(shí)間持久。中毒后主要癥狀表現(xiàn)為頭疼、頭暈、心悸、心慌、面色潮紅、四肢發(fā)抖等癥狀違法者使用該物質(zhì)以提高豬的瘦肉率和顏色鮮艷程度，不知情的市民錯(cuò)誤地認(rèn)為這樣的肉才是“好肉”而特別喜歡選購食品安全快速檢測技術(shù)4《食品衛(wèi)生法》《食品添加劑衛(wèi)生管理辦法》（GB2760）《動(dòng)物性食品中獸藥殘留最高限量》（農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)，

2002年12月24日）規(guī)定：禁用藥物，動(dòng)物性食品中不得檢出：瘦肉精、沙丁胺醇、西馬特羅等31種違法者的法律責(zé)任：民事賠償、行政處罰、刑事處罰法律規(guī)定食品安全快速檢測技術(shù)4鹽酸克倫特羅殘留檢測方法

《動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測定》（GB5009.192-2003）第一法：氣相色譜——質(zhì)譜法，檢出限：0.5ppb

第二法：高效液相色譜法，檢出限：0.5ppb

第三法：酶聯(lián)免疫法（ELISA篩選法），檢出限：0.5ppb《動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的測定——?dú)庀嗌V/質(zhì)譜法》

（NY/T468－2006），檢出限：2.0ppb《動(dòng)物尿液中鹽酸克倫特羅的測定——?dú)庀嗌V/質(zhì)譜法》

（NY/XQ421－2003），檢出限：1.0ppb《尿液中鹽酸克侖特羅的測定膠體金免疫層析法（NY/T933-2005），檢出限：3.0ppb

食品安全快速檢測技術(shù)4豬肉全程監(jiān)控中瘦肉精檢測方法的選擇生豬飼養(yǎng)屠宰場大型批發(fā)市場零售市場飼料檢測豬尿檢測豬尿檢測豬肉檢測豬肉檢測豬肉檢測酶聯(lián)免疫法免疫膠體金免疫膠體金酶聯(lián)免疫法免疫膠體金篩檢陽性GC-MS確認(rèn)大型儀器確認(rèn)政府部門監(jiān)督抽檢GC-MS餐飲業(yè)豬肉檢測免疫膠體金銷毀和溯源陽性GC-MS確認(rèn)大型儀器確認(rèn)陽性食品安全快速檢測技術(shù)4免疫膠體金快速檢測板的外觀圖食品安全快速檢測技術(shù)4

免疫膠體金快速檢測板(試劑)的結(jié)構(gòu)圖食品安全快速檢測技術(shù)4檢測原理鹽酸克倫特羅快速檢測試劑板的中央膜面上固定有兩條隱形線，克倫特羅抗原固定在測試區(qū)作為檢測線（T線），二抗固定在質(zhì)控區(qū)作為對照線（C線）。當(dāng)待檢樣品溶液滴入試劑板加樣孔后，樣品溶液因?qū)游鲎饔猛蠑U(kuò)散。如果樣品溶液含有相應(yīng)藥物的殘留，藥物將和膠體金顆粒上的抗體先行反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至T線時(shí)，膠體金顆粒上抗體活性位點(diǎn)將因被樣品溶液中的藥物占據(jù)而無法與T線上藥物抗原結(jié)合；所以當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量1ppb(檢測限)以上時(shí)，試劑板上的T線將較C線顯色淡或甚至無顯色，判定為陽性。反之，當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量在1ppb以下或無殘留時(shí)，試劑板上的T線顯色與C線相近或偏深，判定為陰性食品安全快速檢測技術(shù)4靈敏度肉樣或組織樣：1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理)或5ppb（簡單前處理）尿樣：1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理)特異性：與沙丁胺醇等苯乙胺類藥物沒有交叉反應(yīng)；準(zhǔn)確性：與瘦肉精ELISA試劑盒的檢測結(jié)果符合率>90％有效期：半年（冷藏閉光保存）膠體金免疫層析法檢測瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)食品安全快速檢測技術(shù)4操作步驟

于5ml離心管中加入5g左右剪碎或是高速勻漿過的豬肉組織樣，蓋緊管蓋

1

將裝有樣品的離心管在90℃以上水浴鍋中加熱10分鐘

加熱完成后取出冷卻至室溫；可以明顯看到底部有溶液滲出32

吸取3滴（約100ul）煮出的樣品滲出液到1.5ml的離心管中4食品安全快速