ICS83.180

CCSG39

T/CASME

中國(guó)中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CASMEXXX—2024

I型及V型膠原蛋白制備技術(shù)規(guī)范

TechnicalspecificationsforthepreparationoftypeIandtypeVcolIagen

（征求意見稿）

2024-XX-XX發(fā)布2024-XX-XX實(shí)施

中國(guó)中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布

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目次

前言II

1范圍1

2規(guī)范性引用文件1

3術(shù)語(yǔ)和定義1

4總體要求1

5制備技術(shù)2

6記錄4

附錄A（資料性）魚皮I型和V型膠原蛋白SDS圖譜5

參考文獻(xiàn)6

I

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刖言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第I部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由杭州紐曲星生物科技有限公司提出。

本文件由中國(guó)中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)歸口。

本文件起草單位：杭州紐曲星生物科技有限公司……

本文件主要起草人：……

II

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4.1選址

選址符合下列要求：

a）宜靠近有加工副產(chǎn)物的水產(chǎn)品加工生產(chǎn)區(qū)；

b）所在地應(yīng)有工業(yè)廢水集中排放的處理區(qū)；

c）周圍環(huán)境不應(yīng)影響或污染產(chǎn)品；

d）有充足的電力供應(yīng)。

4.2設(shè)施和生產(chǎn)人員

應(yīng)符合GB14881的要求。

4.3安全管理

應(yīng)符合GB/T27304的要求。

4.4容器和設(shè)備

4.4.1直接接觸原料、半成品、成品的器具應(yīng)由無(wú)毒耐腐蝕的材料制成，易清洗。

4.4.2至少應(yīng)配有以下設(shè)備：

a）烘干機(jī)；

b）粉碎機(jī)；

c）攪拌設(shè)備；

d）離心機(jī)。

4.4.3所有電氣設(shè)備的控制器應(yīng)組裝在一起，由一個(gè)主控制箱操縱，且遠(yuǎn)離排水區(qū)。

4.4.4設(shè)備應(yīng)保持完好、清潔、確保正常運(yùn)轉(zhuǎn)，定期檢查和維護(hù)保養(yǎng)。

4.5質(zhì)量檢驗(yàn)室

應(yīng)建有相應(yīng)的質(zhì)量檢驗(yàn)室，至少應(yīng)配備恒壓或恒流電源、垂直板電泳槽和制膠模具及相關(guān)技術(shù)人員。

4.6原輔料要求

4.6.1魚皮應(yīng)符合GB2733的規(guī)定。

4.6.2水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。

4.6.3氫氧化鈉應(yīng)符合GB1886.20的規(guī)定。

4.6.4氯化鈉應(yīng)符合GB2721的規(guī)定。

4.6.5冰乙酸應(yīng)符合GB1886.10的規(guī)定。

4.6.6胃蛋白酶應(yīng)符合GB1886.174的規(guī)定。

5制備技術(shù)

5.1工藝流程

I型及V型膠原蛋白制備工藝流程見圖1。

2

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圖1I型及V型膠原蛋白制備工藝流程圖

5.2預(yù)處理

5.2.1使用溫度不高于20℃的水清洗魚皮，除去夾雜的頭、鰭、魚肉、內(nèi)臟和其它附于表面的血污、

泥沙等雜質(zhì)，并剔除魚鱗。

5.2.2瀝干，剪碎至(lcm±0.2cm)X(lcm±0.2cm),于55℃±5℃烘干2h,粉碎至50目，按

200g魚皮15L0.Imol/L氫氧化鈉溶液的比例浸泡30h,期間持續(xù)攪拌，于2500g離心lOmin取沉淀，

用水沖洗至pH為7.0,于55c±5℃烘干2h。

5.3粗提

在4c±1℃環(huán)境下進(jìn)行粗提，按100g魚皮、10［，4℃±1℃水、150mL冰乙酸、10g胃蛋白酶的比例

混合，連續(xù)攪拌42h后，100COOg離心60min取上清液，緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為

2.0mol/Lt鹽析過(guò)夜，100000g離心15min,取白色沉淀，為膠原蛋白粗品。

5.4分離

在4c土1C環(huán)境下進(jìn)行分離，將膠原蛋白粗品溶解于含有1.()mol/LNaCl的().()5mol/LTris-HC1緩

沖液中(PH7.5),100000g離心60min取上清液，緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為2.4

mol/L,鹽析過(guò)夜，100000g離心15min,分別收集沉淀和上清液。

5.5純化

5.5.1在4c土1℃環(huán)境下進(jìn)行純化。

5.5.2將沉淀溶解于0.25mol/L冰乙酸中，裝入截留分子量為10kDa的透析袋，用0.025mol/L冰乙

酸溶液透析60h,真空冷凍干燥，所得無(wú)臭無(wú)味白色海綿狀固體即為I型膠原蛋白。

5.5.3向上清液中緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為4.0mol/L,鹽析過(guò)夜，100000g離

心15min,同5.5.1操作，所得無(wú)臭無(wú)味白色海綿狀固體即為V型膠原蛋白。

5.6檢驗(yàn)

3

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按《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）四部通則0541中規(guī)定的第五法SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法

（SDS法）進(jìn)行測(cè)定。I型、V型膠原蛋白純度應(yīng)不低于95%,典型的I型和V型膠原蛋白電泳圖

譜見附錄A。

5.7再純化

若達(dá)不到5.6要求，可將5.5所得I型/V型膠原蛋白再次溶解于預(yù)冷至4℃±1℃的0.5mol/L冰乙酸

（1:100,w/v）中，100000g離心60min,緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為2.4mol/L,鹽

析過(guò)夜，100000g離心15min,分別收集沉淀和上清液。按5.5再純化后，技5.6檢臉。

6記錄

制備過(guò)程中應(yīng)記錄并保存以下內(nèi)容：

a）執(zhí)行各階段操作人員的姓名；

b）操作時(shí)間、地點(diǎn)；

c）執(zhí)行的具體操作內(nèi)容；

d）操作結(jié)果或觀察到的現(xiàn)象；

e）其他。

4

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附錄A

（資料性）

魚皮I型和V型膠原蛋白SDS圖譜

魚皮I型和V型膠原蛋白SDS-PAGE圖譜見圖1。

200.0電廠

1電但,

83*

664跤」

說(shuō)明：

泳道1一一蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)；

泳道2——V型膠原蛋白；

泳道3——I型膠原蛋白“

圖A.1魚皮I型和V型膠原蛋白SDS圖譜