血尿淀粉酶及其同工酶活性測(cè)定血清脂肪酶活性測(cè)定血清尿胰蛋白酶活性測(cè)定胰腺疾病的實(shí)驗(yàn)室檢_第1頁(yè)
血尿淀粉酶及其同工酶活性測(cè)定血清脂肪酶活性測(cè)定血清尿胰蛋白酶活性測(cè)定胰腺疾病的實(shí)驗(yàn)室檢_第2頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1.血、尿淀粉酶及其同工酶活性測(cè)定2.血清脂肪酶活性測(cè)定3.血清、尿胰蛋白酶活性測(cè)定

胰腺疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查目前仍以胰腺酶檢測(cè)為主。胰腺疾病檢驗(yàn)

淀粉酶(α-amylase,AMY)又稱α-1,4-葡聚糖水解酶,作用于多糖分子的α-1,4-糖苷鍵,生成麥芽糖和葡萄糖。淀粉酶分子量約為62kD,很易由腎臟排出。α-淀粉酶主要存在于胰腺、唾液腺及其分泌液中,對(duì)食物中多糖化合物的消化起重要作用。血清淀粉酶主要有兩種同工酶,即同工酶P(來(lái)源于胰腺)及同工酶S一、血、尿淀粉酶及同工酶活性測(cè)定淀粉酶是臨床應(yīng)用最早的酶,測(cè)定方法多達(dá)200余種一般可將這些方法歸納為二類:

一類是以天然淀粉為底物的測(cè)定法。由于天然淀粉的分子結(jié)構(gòu)和組成不確定,難以達(dá)到方法學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化,測(cè)定的準(zhǔn)確性和重復(fù)性都較差

另一類是限定底物法,使用分子組成確定的小分子寡聚糖或?qū)?硝基苯酚-糖苷等作為淀粉酶底物,與輔助酶、指示酶共同組成淀粉酶測(cè)定系統(tǒng)。此類方法最突出的優(yōu)點(diǎn)是底物的結(jié)構(gòu)、分子量和水解產(chǎn)物確定,方法簡(jiǎn)便快速,精密度好,線性范圍寬,是目前測(cè)定淀粉酶較為理想的方法(一)淀粉酶的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】血清(或血漿)中α-淀粉酶(AMY)催化淀粉分子中α-1,4-糖苷鍵水解,產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1,6-糖苷鍵支鏈的糊精。在底物過(guò)量且濃度已知的條件下,保溫反應(yīng)到規(guī)定時(shí)間后加入含強(qiáng)酸的碘液終止反應(yīng),并與未被水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物(碘色反應(yīng)),其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管比較,從而計(jì)算出AMY的活力單位1.碘-淀粉比色法

【實(shí)驗(yàn)原理】以對(duì)-硝基苯麥芽庚糖苷(4NP-G7)為底物,經(jīng)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶催化下,水解為葡萄糖和對(duì)-硝基酚。對(duì)-硝基酚的生成量在一定范圍內(nèi)與α-淀粉酶活性成正比。2.限定底物法碘-淀粉比色法血清80~180U/dl尿液100~1200U/dl連續(xù)監(jiān)測(cè)法血清淀粉酶參考值上限:37℃,220U/L尿液淀粉酶參考值上限:37℃,1200U/L【參考區(qū)間】血清AMY主要用于診斷急性胰腺炎及急腹癥的鑒別診斷急性胰腺炎發(fā)病后8~12小時(shí)血清AMY開(kāi)始增高,12~24小時(shí)達(dá)高峰,2~5天下降至正常。如達(dá)350U/dl時(shí)應(yīng)懷疑此病,超過(guò)500U/dl有診斷意義。急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔及嗎啡注射后等均可見(jiàn)血清AMY增高,但常低于500U/dl尿AMY約于急性胰腺炎發(fā)病后12~24小時(shí)開(kāi)始升高,下降也比血清AMY慢,在急性胰腺炎后期測(cè)定尿AMY更有價(jià)值由于正常人血清中AMY主要由肝臟產(chǎn)生,故血清與尿AMY同時(shí)減低主要見(jiàn)于肝炎、肝硬化、肝癌及急性和慢性膽囊炎、急性酒精中毒等【臨床意義】

脂肪酶(lipase,LPS)又稱甘油三酯酶,是胰腺外分泌酶,通常只有小部分進(jìn)入血循環(huán)。血清中的脂肪酶主要來(lái)自胰腺,少量來(lái)自胃腸黏膜

脂肪酶作用于底物和水的交界面,故僅當(dāng)?shù)孜镌谌榛癄顟B(tài)時(shí)脂肪酶才能發(fā)揮作用?,F(xiàn)多用去氧膽酸鈉作乳化劑配制底物

脂肪酶的測(cè)定方法主要有比濁法、色原底物法或酶偶聯(lián)法

二、血清脂肪酶活性測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】甘油三酯與水制成的乳膠,因其膠束對(duì)入射光的吸收及散射而具有乳濁性狀。膠束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下水解,使膠束分裂,其濁度或光散射因而減低。減低的速率與脂肪酶活力有關(guān)。比濁法波長(zhǎng)546nm,比色杯光徑1.0cm,進(jìn)行比色測(cè)定,計(jì)算脂肪酶的活性單位。*TOOS:N-乙酰-N-磺酸丙基苯胺酶偶聯(lián)法【實(shí)驗(yàn)原理】【臨床意義】胰腺是人體LPS最主要來(lái)源。急性胰腺炎血清LPS升高,其升高的時(shí)間較AMY遲,但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),可達(dá)10~15天,有助于發(fā)病后期的診斷。約有40

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