第四節(jié)

巴比妥類藥物的質(zhì)量檢測(cè)一、巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式

5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥苯巴比妥司可巴比妥硫噴妥鈉巴比妥類藥物通常為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)在空氣中穩(wěn)定，加熱多能升華該類藥物一般微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而難溶于有機(jī)溶劑六元環(huán)結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，遇酸、氧化劑、還原劑時(shí)，一般情況下環(huán)不會(huì)破裂，但與堿液共沸時(shí)則水解開(kāi)環(huán)，并產(chǎn)生氨氣巴比妥類藥物的主要理化性質(zhì)1.弱酸性巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-丙二酰脲基團(tuán)，能發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，在水溶液中可以發(fā)生二級(jí)電離。由于本類藥物具有弱酸性（pKa7.3～8.4），故可與強(qiáng)堿反應(yīng)生成水溶性的鹽類，一般為鈉鹽2.水解反應(yīng)巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有丙二酰脲結(jié)構(gòu)，與堿液共沸即水解，釋放出氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍(lán)。示例JP15巴比妥的鑒別：取巴比妥0.2g，加氫氧化鈉試液10ml，加熱煮沸，則產(chǎn)生具氨臭的氣體，可使紅色石蕊試紙變藍(lán)。本類藥物的鈉鹽，在吸濕的情況下也能發(fā)生水解。一般情況下，在室溫和pH10以下水解較慢；pH11以上隨著堿度的增加水解速度加快。3.與金屬離子的反應(yīng)巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有丙二酰脲（-CONHCONHCO-）基團(tuán)，在合適pH的溶液中，可與某些重金屬離子，如Ag+、Cu2+、Co2+、Hg2+等反應(yīng)呈色或產(chǎn)生有色沉淀與銀鹽的反應(yīng)與銅鹽的反應(yīng)與鈷鹽的反應(yīng)與汞鹽的反應(yīng)（4）（1）（2）（3）（1）與銀鹽的反應(yīng)丙二酰脲類的反應(yīng)在碳酸鈉溶液中，生成鈉鹽而溶解，再與硝酸銀溶液反應(yīng)，首先生成可溶性的一銀鹽，加入過(guò)量的硝酸銀溶液，則生成難溶性的二銀鹽白色沉淀。此反應(yīng)可用于本類藥物的鑒別和含量測(cè)定（2）與銅鹽的反應(yīng)丙二酰脲類的反應(yīng)在吡啶溶液中生成的烯醇式異構(gòu)體與銅吡啶試液反應(yīng)，形成穩(wěn)定的配位化合物，即：產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應(yīng)巴比妥類藥物

呈

紫堇色

或

生成紫色沉淀含硫巴比妥類藥物則呈現(xiàn)綠色沉淀可以用來(lái)區(qū)別巴比妥類和硫代巴比妥類藥物。（3）與鈷鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物在堿性溶液中可與鈷鹽反應(yīng)，生成紫堇色配位化合物注意事項(xiàng)：反應(yīng)在無(wú)水條件下比較靈敏，生成的有色產(chǎn)物也較穩(wěn)定，因此，所用試劑應(yīng)不含水分。（4）與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物與硝酸汞或氯化汞溶液反應(yīng)，可生成白色汞鹽沉淀，此沉淀能在氨試液中溶解4.與香草醛的反應(yīng)巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中，丙二酰脲基團(tuán)中的氫比較活潑，可與香草醛在濃硫酸存在下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成棕紅色產(chǎn)物示例BP2009戊巴比妥的鑒別：取戊巴比妥10mg，加香草醛10mg，再加硫酸2ml，混合后，水浴加熱2分鐘，顯棕紅色。放冷，小心加入乙醇5ml，顏色先變?yōu)樽仙僮優(yōu)樗{(lán)色。加入甲醇后：5.紫外吸收光譜特征A.0.05mol/LH2SO4溶液（未電離）；

B.pH9.9緩沖溶液（一級(jí)電離）；

C.0.1mol/LNaOH溶液（二級(jí)電離）

巴比妥類藥物的紫外吸收光譜（2.5mg/100ml）紫外吸收光譜特征和其電離的程度有關(guān)

硫噴妥的紫外吸收光譜---:0.1mol/LHCl溶液；—:0.1mol/LNaOH溶液6.薄層色譜行為特征巴比妥類藥物具有不同的分子結(jié)構(gòu)，則其色譜行為亦不同，可用于鑒別，常用方法主要為薄層色譜法。示例

BP2010中苯巴比妥的TLC鑒別：取苯巴比妥供試品和對(duì)照品各適量，分別加乙醇制成每1ml中約含1mg的溶液作為供試品和對(duì)照品溶液，各量取10

l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板

上，以三氯甲烷-乙醇-濃氨水（80︰15︰5）混合液的下層溶液為展開(kāi)劑

，展開(kāi)后，晾干，立即于254nm紫外光下檢測(cè)。供試品溶液的主斑點(diǎn)位置和大小與對(duì)照品溶液的均一致。7.顯微結(jié)晶巴比妥類藥物可根據(jù)其本身或與某種試劑的反應(yīng)產(chǎn)物的特殊晶型，進(jìn)行同類或不同類藥物的鑒別巴比妥與苯巴比妥的顯微結(jié)晶示意圖A.巴比妥結(jié)晶；B.苯巴比妥結(jié)晶巴比妥銅吡啶結(jié)晶示意圖二、鑒別試驗(yàn)（一）丙二酰脲反應(yīng)巴比妥類藥物母核的反應(yīng)銀鹽反應(yīng)銅鹽反應(yīng)硫代巴比妥類分子中含有硫元素，可在氫氧化鈉溶液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀；加熱后，沉淀轉(zhuǎn)變?yōu)榱蚧U。本試驗(yàn)可供硫代巴比妥類與巴比妥類的區(qū)別。（二）特征基團(tuán)反應(yīng)1.硫元素的鑒別試驗(yàn)示例ChP中注射用硫噴妥鈉的鑒別取本品約0.2g，加氫氧化鈉試液5ml與醋酸鉛試液2ml，生成白色沉淀；加熱后，沉淀變?yōu)楹谏?。?）與碘試液的反應(yīng)不飽和鍵可與碘、溴或高錳酸鉀作用，發(fā)生加成反應(yīng)或氧化反應(yīng)，而使碘、溴或高錳酸鉀褪色2.司可巴比妥（不飽和取代基）的鑒別試驗(yàn)（2）與高錳酸鉀的反應(yīng)堿性溶液3.苯巴比妥（芳環(huán)）的鑒別試驗(yàn)苯巴比妥：與硝酸鉀及硫酸共熱，可發(fā)生硝基化反應(yīng)，生成黃色硝基化合物（1）硝化反應(yīng)苯巴比妥：與硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng)，生成橙黃色產(chǎn)物，并隨即變?yōu)槌燃t色?？蓞^(qū)別苯巴比妥和其他不含芳環(huán)巴比妥（原理不明）（2）與硫酸-亞硝酸鈉的反應(yīng)示例ChP2015中苯巴比妥的鑒別取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，混合，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅色產(chǎn)物。巴比妥和其他無(wú)芳環(huán)取代的巴比妥類藥物無(wú)此反應(yīng)，可供區(qū)別（3）與甲醛-硫酸的反應(yīng)示例6ChP2015中苯巴比妥的鑒別（2）取本品約50mg，置試管中，加甲醛試液1ml，加熱煮沸，冷卻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，使成兩液層，置水浴中加熱，接界面顯玫瑰紅色。（三）吸收光譜特征標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法：比較樣品與對(duì)照品的紅外光譜圖是否一致ChP2020收載的巴比妥類藥物，幾乎都采用本法作為鑒別方法。三、特殊雜質(zhì)檢查（一）苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查苯巴比妥的合成工藝苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查酸度控制副產(chǎn)物苯基丙二酰脲在一定量供試品水溶液中，加入甲基橙指示劑不得顯紅色乙醇溶液的澄清度控制中間體Ⅰ雜質(zhì)的量利用雜質(zhì)在乙醇溶液中溶解度小苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)HPLC法中性或堿性物質(zhì)控制雜質(zhì)中間體I的副產(chǎn)物2-苯基丁酰胺、2-苯基頂酰脲或分解產(chǎn)物雜質(zhì)不溶于氫氧化鈉試液但溶于乙醚，而苯巴比妥溶于氫氧化鈉試液（二）司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查司可巴比妥鈉的合成工藝司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)溶液的澄清度檢查水不溶性雜質(zhì)中性或堿性物質(zhì)控制合成過(guò)程中的副產(chǎn)物，如酰脲、酰胺類物質(zhì)雜質(zhì)不溶于氫氧化鈉，而溶于乙醚四、含量測(cè)定（一）銀量法滴定劑：硝酸銀（1︰1反應(yīng)）溶劑：甲醇+3%無(wú)水碳酸鈉終點(diǎn)指示：電位法指示（Ag電極為指示電極，玻璃電極為參比電極）示例

ChP2015中異戊巴比妥的銀量測(cè)定法取本品約0.2g，精密稱定，加甲醇40ml使溶解，再加新鮮配制的3%無(wú)水碳酸鈉溶液15ml，照電位滴定法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O3。38（二）溴量法5位取代基中含有不飽和雙鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，可采用溴量法進(jìn)行含量測(cè)定可用于司可巴比妥鈉原料藥及其膠囊的測(cè)定示例ChP2015中司可巴比妥鈉的溴量測(cè)定法取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加入溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1分鐘，在暗處?kù)o置15分鐘后，注意微開(kāi)瓶塞，加入碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mgC12H17N2NaO3。（三）紫外分光光度法在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無(wú)明顯的紫外吸收在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)藥物λmax（nm）溶劑巴比妥240538pH9.4硼酸鹽緩沖液苯巴比妥253320NaOH液（0.1mol/L）戊巴比妥240310pH9.4硼酸鹽緩沖液異戊巴比妥238440pH9.4硼酸鹽緩沖液司可巴比妥240330pH9.4硼酸鹽緩沖液硫噴妥305930pH9.4硼酸鹽緩沖液

將供試品溶解后，直接測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液的吸光度（λmax處），再計(jì)算藥物的含量示例

ChP2020注射用硫噴妥鈉的含量測(cè)定取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水使硫噴妥鈉溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用0.4%氫氧化鈉溶液定量稀釋制成每1ml中約含有5μg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在304nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取硫噴妥鈉對(duì)照品，精密稱定，加0.4%氫氧化鈉溶液并定量稀釋制成每1ml中約含有5μg的溶液，同法測(cè)定。根據(jù)每支的平均裝量計(jì)算。每1ml硫噴妥相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaS。（四）高效液相色譜法適用于復(fù)方制劑中巴比妥類藥物的分析示例

ChP2015苯巴比妥片的含量采用HPLC測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用辛烷基硅烷建和硅膠為填充劑；以乙腈-水（30︰70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論塔板數(shù)按苯巴比妥峰計(jì)算不低于2000，苯巴比妥與相鄰色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。測(cè)定法取本