ICS65.020.20

B05

備案號(hào)：58094-2018DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3358—2018

紅花石蒜組培快繁技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationfortissuecultureofLycorisradiata

2018-2-10發(fā)布2018-3-10實(shí)施

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3358—2018

紅花石蒜組培快繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅花石蒜（Lycorisradiata）外植體采集與處理、培養(yǎng)基配置、外植體接種、組織培

養(yǎng)、煉苗移栽、移栽苗管理和記錄等技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于紅花石蒜組培苗的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6001育苗技術(shù)規(guī)程

LY/T1000容器育苗技術(shù)

3外植體采集與處理

3.1外植體采集

3.1.1在3月~10月選擇晴天的天氣，采集表面無(wú)損的鱗莖作為外植體。

3.1.2將紅花石蒜周圍約30cm的土壤挖開(kāi)，用手刨出鱗莖球，撥掉球莖所帶的泥土。采集完球莖后，覆

土填平。

3.2外植體處理

3.3.1剪去紅花石蒜鱗莖球根部，剝?nèi)ネ鈱喻[莖片，帶鱗莖盤(pán)切成長(zhǎng)為2cm~3cm的鱗莖片，放入燒杯

中用1%洗衣粉溶液浸泡5min，然后流水沖洗1h~2h，最后用蒸餾水沖洗，轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)。

3.3.2在超凈工作臺(tái)上，用配制好的75%乙醇浸泡30s，然后用無(wú)菌水沖洗2次~3次。

3.3.3配制終濃度為1%的次氯酸鈉消毒液，用其浸泡材料30min后，用無(wú)菌水沖洗5次~6次，并用無(wú)

菌濾紙吸干水分后備用。

4培養(yǎng)基配制

4.1MS培養(yǎng)基母液配制

4.1.1制作培養(yǎng)基前需先配制培養(yǎng)基母液，MS培養(yǎng)基母液配制比例參見(jiàn)附錄A。

4.1.2母液配制應(yīng)用蒸餾水。

4.1.3配制大量元素母液時(shí)，每個(gè)組分單獨(dú)溶解，避免沉淀發(fā)生。

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4.1.4配制后的母液應(yīng)置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛裝保存，母液配制后應(yīng)及時(shí)

使用，貯存時(shí)間不宜超過(guò)3個(gè)月。

4.1.5母液容器上應(yīng)貼好標(biāo)簽，注明名稱、配制日期，發(fā)現(xiàn)母液中有沉淀或絮狀物出現(xiàn)應(yīng)停止使用。

4.2植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液配制

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制濃度為0.5mg/mL，其配制方法參見(jiàn)附錄B。母液配制好后濾膜過(guò)濾

除菌，濾液貼好標(biāo)簽并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超過(guò)3個(gè)月。

4.3培養(yǎng)基選擇

誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L；增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA5.0mg/L+2,4-D

1.0mg/L+NAA0.5mg/L；生根培養(yǎng)基：MS+IBA1.0mg/L。

4.4培養(yǎng)基制作

4.4.1準(zhǔn)備好配制容器（1L燒杯、玻璃棒和量筒）、蒸餾水、瓊脂粉、蔗糖和各類母液等。

4.4.2先用燒杯盛有少量蒸餾水，參考用量參見(jiàn)附表A。

4.4.3按蔗糖濃度30g/L計(jì)算用量，稱量后用蒸餾水溶解，然后用容量瓶定容。

4.4.4根據(jù)培養(yǎng)基的選擇加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，玻璃棒攪拌均勻。用pH計(jì)測(cè)試酸堿度，調(diào)節(jié)pH值至

5.6~5.8。

4.4.5將稱量好的瓊脂粉（6g/L~7g/L）加入燒杯中加熱攪拌至完全溶解。

4.4.6分裝時(shí)，不應(yīng)將培養(yǎng)基傾倒在培養(yǎng)瓶瓶口。分裝后立即用瓶蓋蓋上，并旋緊。

4.5培養(yǎng)基滅菌

4.5.1將分裝好的盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。打開(kāi)冷凝閥，排盡滅菌鍋內(nèi)的冷空氣。

當(dāng)氣壓達(dá)到0.1Mpa、溫度升至121℃時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，保持溫度并進(jìn)行壓力滅菌20min。

4.5.2關(guān)閉滅菌鍋電源，以慢排方式排放熱氣。待滅菌鍋內(nèi)的氣壓表指針降至0時(shí)再打開(kāi)高壓滅菌鍋蓋，

取出培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基平放置于接種室或培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行冷卻。

4.6培養(yǎng)基保存

滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)注明培養(yǎng)編號(hào)及配制日期，同時(shí)按培養(yǎng)基種類、配制先后順序分別儲(chǔ)存于接種室

或培養(yǎng)室。儲(chǔ)存時(shí)間不宜超過(guò)2周。

5外植體接種

5.1接種環(huán)境

接種前，接種室和超凈工作臺(tái)內(nèi)要進(jìn)行紫外線消毒20min~30min，操作人員關(guān)閉紫外燈并通風(fēng)15min

后再進(jìn)行操作。操作時(shí)應(yīng)佩戴一次性乳膠手套，并在進(jìn)入超凈臺(tái)前用75%乙醇噴灑消毒。接種結(jié)束后，

應(yīng)及時(shí)清理接種室和超凈工作臺(tái)及雜物。

5.2接種

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5.2.1將接種工具（手術(shù)刀和鑷子）用牛皮紙包好，放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，按照4.5的方法，進(jìn)行高

壓滅菌。將滅菌好的接種工具放入65℃烘箱中干燥24h，噴灑75%的乙醇表面消毒后立即轉(zhuǎn)移至超凈

工作臺(tái)。每轉(zhuǎn)接完一個(gè)培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)材料，均應(yīng)將接種工具放在酒精燈外燃火焰上灼燒10s，同時(shí)更

換接種器皿中的濾紙，以避免交叉污染。

5.2.2在無(wú)菌的培養(yǎng)瓶中，將消毒處理后的鱗莖小塊接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種1塊~2塊。接種完

成后，用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上標(biāo)注接種日期、編號(hào)或名稱。

5.2.3每次接種完畢后，應(yīng)用75%的乙醇將超凈工作臺(tái)的臺(tái)面及兩邊擋板等擦拭干凈，同時(shí)將接種器皿

及接種工具重新按照5.2.1的方法進(jìn)行滅菌消毒處理。

6組織培養(yǎng)

6.1培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室內(nèi)溫度為24±2℃，培養(yǎng)瓶上部的光照強(qiáng)度為100μmol-1m-2s-1~150μmol-1m-2s-1，光照時(shí)間為每

天12h~16h。

6.2誘導(dǎo)培養(yǎng)

將已消毒的鱗莖小塊接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，15d~20d后芽開(kāi)始萌發(fā)，25d左右莖尖變綠并伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，

40d左右芽可長(zhǎng)高至2cm~3cm。

6.3增殖培養(yǎng)

將誘導(dǎo)培養(yǎng)形成的單個(gè)幼芽或叢生芽，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)周期約為30d。

6.4生根培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)后的叢生芽切割成單個(gè)完整的幼芽，并使其基部插入生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)2周

~3周。

7煉苗移栽

7.1煉苗

選取株高大于3cm，根長(zhǎng)1cm~4cm，且形成小鱗莖的組培苗放置溫室自然散射光下，打開(kāi)瓶蓋，加

注少量無(wú)菌水（水深0.5cm左右）煉苗2d~3d，控制溫度在18℃~28℃，濕度控制在70%~80%。

7.2移栽

7.2.1移栽基質(zhì)泥炭土與珍珠巖比例為2:1，并加入0.5g/L的多菌靈攪拌均勻，然后裝入營(yíng)養(yǎng)缽中壓緊

待用。

7.2.2用鑷子將無(wú)菌苗從培養(yǎng)瓶中小心取出，注意保護(hù)根系，將根部粘附的瓊脂用30℃~35℃清水清洗

干凈，移到營(yíng)養(yǎng)缽中，用基質(zhì)將根埋好。移栽后及時(shí)澆透水，外面用遮陽(yáng)網(wǎng)罩著，避免陽(yáng)光直射。

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8移栽苗管理和記錄

8.1水分管理

在遮蔭且通風(fēng)條件下培養(yǎng)2d~3d，向葉面噴水1次，2周后，撤掉遮蔭，但要注意通風(fēng)。此后，每隔2

周~3周澆水1次。

8.2大田移栽時(shí)間

移栽苗移栽完成2個(gè)月以上于當(dāng)年秋季或翌年春季移栽至大田。

8.3記錄

應(yīng)建立完整、真實(shí)的組培栽培管理記錄檔案，檔案保存2年以上。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

MS培養(yǎng)基母液配制表

表A.1MS培養(yǎng)基母液配制表

原配方量稱取量母液體積配制1L培養(yǎng)基應(yīng)

母液化合物擴(kuò)大倍數(shù)

(mg.L-1)（mg）（mL）吸取量（mL）

大量元素NH4NO316502033000100050

KNO3190038000

CaCl2·2H2O4408800

MgSO4·7H2O3707400

KH2PO41703400

微量元素KI0.8320016610005

H3BO36.21240

MnSO4·4H2O22.34460

ZnSO4·7H2O8.61720

NaMoO4·2H2O0.2550

CuSO4·5H2O0.0255

CoCI2·6H2O0.0255

鐵鹽FeSO4·7H2O28.7200556010005

Na2.EDTA·2H2O37.37460

維生素和肌醇1002002000010005

氨基酸煙酸0.5100

鹽酸吡哆醇0.5100

鹽酸硫胺素0.120

甘氨酸2.0400

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BB

附錄B

（資料性附錄）

常用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配制表

表B.1常用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配制表

化學(xué)試劑名稱分子式或英文名配制方法