1GB5009.286—2022食品安全國家標準食品中納他霉素的測定本標準規(guī)定了食品中納他霉素的液相色譜測定方法。本標準適用于干酪和再制干酪及其類似品、醬鹵肉制品、肉類（熏、燒、烤）、油炸肉類、西式火腿類、2原理樣品經(jīng)甲醇提取或稀釋處理，含油脂或固體樣品采用加水后冷凍或離心的方式去除樣品中的脂肪或固體顆粒成分，提取液過濾后用反相液相色譜，紫外檢測器測定，外標法定量。3試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。3.3標準溶液配制3.3.1納他霉素標準儲備液(250mg/L)：準確稱取25mg納他霉素標準品（精確至0.1mg),加入適量甲醇及1mL冰乙酸超聲溶解，用甲醇定容溫冰箱密封保存，3周內(nèi)使用。3.3.2納他霉素標準中間液(50mg/L)：準確吸取10.0mL納他霉素標準儲備液(3.3.1)于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度混勻，配成濃度為50mg/L標準中間工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。納他霉素系列標準工作液：分別吸取納他霉素標準中于個容量瓶中用甲醇定容配制成10mg/L納他霉素系列標準工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器。2GB5009.286—2022電子天平感量為和4.3超聲波清洗器。離心機轉(zhuǎn)速4.5食物粉碎機。4.6渦旋振蕩器。5分析步驟取多個預包裝的樣品，其中非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機勻漿；固體樣品用研磨機充分粉碎并攪拌均勻，均勻的液體直接混勻，取其中的200g裝入玻璃容器中，密封后于4℃保存。5.2樣品前處理發(fā)酵肉制品類、蛋黃醬、沙拉醬稱取5.0g樣品（精確至0.01g),置于50mL離心管中，加入15.0mL甲醇超聲提取20min,加入水混勻以離心于冰箱中冷凍上清液經(jīng)有機針頭式過濾器過濾，收集濾液約2mL上機測定。稱取5.0g樣品（精確至0.01g),置于50mL離心管中，加入15.0mL甲醇超聲提取20min,加入水混勻以離心上清液經(jīng)上機測定。式過濾器過濾，收集濾液約2mL上機測定。m針式過濾器過濾，收集濾液約2mL上機測定。5.3儀器參考條件色譜柱或性能相當者。流速檢測波長柱溫進樣量5.3.7梯度洗脫程序見表1。3GB5009.286—2022表1梯度洗脫程序表時間/minA/%B/%05.4標準曲線的制作將納他霉素系列標準工作液分別注入液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰面積，以系列標準工作液中納他霉素的濃度為橫坐標，以納他霉素的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，納他霉素標準溶液的色譜圖參見附錄A中圖A.1。5.5試樣溶液的測定將經(jīng)過5.2試驗方法前處理的待測溶液注入液相色譜儀中，得到待測液中納他霉素的峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測液中納他霉素的濃度。6分析結(jié)果的表述試樣中納他霉素的含量按式(1)計算，酒類樣品中納他霉素的含量按式(2)計算：式中：犡—試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);ρ—由標準曲線得到待測溶液中納他霉素的含量，單位為毫克每升(mg/L);犞—樣品中提取溶劑總體積或定容體積，單位為毫升(mL);1000—單位換算系數(shù)。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。式中：犡—試樣中納他霉素的含量，單位為克每升(g/L);ρ—由標準曲線得到待測溶液中納他霉素的含量，單位為毫克每升(mg/L);1000—單位換算系數(shù)。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。4GB5009.286—20227精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。試樣稱取5.0g,按照試驗方法操作并定容，發(fā)酵酒直接測定，各類食品的檢出限和定量限如下：干類、蛋黃醬、沙拉醬、糕點的檢出限為0.14mg/kg,定量限為0.48mg/kg;果蔬汁（漿）、果汁飲料檢出限定量限為發(fā)酵