1儲糧害蟲抗藥性測定方法第2部分：防護劑抗性測定方法本文件適用于儲糧害蟲對化學儲糧防護劑抗藥性檢測方法，蟲態(tài)以成蟲為檢測對藥膜法適用于拉硫磷、溴氰菊酯、殺螟硫磷、甲基嘧啶磷等防護劑米象（SitophilusoryzaeLinnaeus）、谷蠹（Rhizoperthadominica）、玉米象（Sitophiluszeamais）、銹赤扁谷盜（CryptolestesferrugineusStephens）、大谷盜（TenebroidesmauritanicusLinnaeus）、綠Hübener)等，蟲糧等級劃分及等級指標遵照GB/T29890注：常用于大型糧2造成同一蟲齡儲糧害蟲（實驗生物）群體中產生50%死亡率的某一藥物或毒物的劑注：用LD50表示，單位以mg/kg（糧食）表示。是測試化學儲糧防護劑殺蟲效果的重要參數，即LD50值越小，則其殺抗性系數反應儲糧害蟲群體對防護劑的抗藥性，用注：Rf=供試品系LD50/敏感品系LD50，Rf值越大4飼料混毒法4.2供試蟲源供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農戶小型糧倉等，經實驗室培養(yǎng)1世代4.3設備（儀器）與試劑4.3.1養(yǎng)蟲室4.3.2試蟲飼料將小麥水洗后置于電熱鼓風干燥箱中經60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時取出，冷卻至室溫后，用粉碎機制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎混合飼料，密封低溫（5℃)儲存?zhèn)溆谩Ｗ罡邼舛葎┝拷M死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少于5組，否則4.3.5其他設備34.4檢測方法4.4.1試蟲飼養(yǎng)供試害蟲均培養(yǎng)在30℃±0.5℃,（70%±5%）RH，24h無光照條件的恒溫恒濕培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中。取數百頭成蟲，投入裝有適量4.3.2中制備的基礎飼4.4.2試蟲準備），4.4.3混毒飼料制備按照4.3.3要求制備系列劑量梯度的儲糧防護劑溶液與4.3.2中基礎飼料充分均勻混合制備系列劑4.4.4防護劑抗藥性測定取4.4.2中供試害蟲投入裝有300g4.4.3制備的混毒飼料的培養(yǎng)瓶中，置于25℃±0.5℃,（70%±5%）RH，黑暗恒溫培養(yǎng)箱飼養(yǎng)24h，挑出試蟲轉入放置未添加防護劑飼料的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)飼養(yǎng)14d，每處理不少于5次重復。特殊情況可以適當調整試驗環(huán)境條件。若供試儲糧害蟲成蟲期不足28d，可以4.4.5.1死亡率4.4.5.2校正死亡率4.4.5.3抗性系數(Rf)··················································4抗性系數計算結果均保留到小數點后兩位。依據附錄A中表A.1判定供試儲糧害蟲的抗性水平。5.2供試蟲源供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農戶小型糧倉等，經實驗室培養(yǎng)1世代5.3設備（儀器）與試劑5.3.1養(yǎng)蟲室將小麥水洗后置于電熱鼓風干燥箱中經60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時取出，冷卻至室溫后，用粉碎機制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎混合飼料，亡率≥10%，最高濃度劑量組死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少配制防護劑系列梯度溶液有機溶劑可用丙酮、二甲基亞砜、甲5.4檢測方法取數百頭成蟲，投入裝有適量5.3.2中制備的基礎飼料的500mL玻璃瓶中的基礎飼料收集放回原培養(yǎng)瓶內置于原培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中繼續(xù)培養(yǎng)，待其子代發(fā)育到成蟲后，挑選2周取5.4.1中羽化2周齡健康成蟲，并隨機分組（每組不少于50頭用于防護劑抗藥性測定。5并冷卻后的小麥顆粒表面，確保小麥顆粒表面均勻涂理不少于5次重復。特殊情況可以適當調整試驗環(huán)境條件。若供試儲糧害蟲成蟲期不足28d，可以適當調整處理后培養(yǎng)時間，檢查死亡蟲數。5.4.5.1死亡率5.4.5.2校正死亡率×100%················5.4.5.3抗性系數(Rf)··················································抗性系數計算結果均保留到小數點后兩位。依據附錄A中表A.1判定供試儲糧害蟲的抗性水平。6供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農戶小型糧倉等，經實驗室培養(yǎng)1個世用以實現培養(yǎng)儲糧害蟲所需溫濕度條件的設備或者專用房間，其溫度精準控制在30℃±0.5℃,相將小麥水洗后置于電熱鼓風干燥箱中經60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時取出，冷卻至室溫后，用粉碎機制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎混合飼料，亡率≥10%，最高濃度劑量組死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少配制防護劑系列梯度溶液有機溶劑可用丙酮、二甲基亞砜、甲試蟲均培養(yǎng)在30℃±0.5℃,（70%±5%）RH，24h無光照條件的恒溫恒濕培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中。取數百頭成蟲，投入裝有適量6.3.2中制備的基礎飼料的500mL玻璃瓶中，產基礎飼料收集放回原培養(yǎng)瓶內置于原培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中繼續(xù)培養(yǎng)，待其子代發(fā)育到成蟲后，挑選2周齡取6.4.1中羽化2周齡健康成蟲，并隨機分組（每組不少于50頭用于防護劑抗藥性測定。準備直徑9cm培養(yǎng)皿，取直徑9cm定性濾紙置于皿底將6.4.2中供試害蟲移人墊有濾紙藥膜的培養(yǎng)皿中，待其在濾紙藥膜上爬行1RH，黑暗恒溫培養(yǎng)箱飼養(yǎng)14d，檢查死亡蟲數，觸角展開，用毛筆輕觸試蟲尾部，任何附肢都不動者7×100%················