第三章

消毒滅菌與病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全第一節(jié)消毒滅菌的常用術(shù)語(yǔ)滅菌:殺死物體上所有微生物的方法。消毒：殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物。消毒劑----用于消毒的藥品。防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。清潔：通過(guò)除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過(guò)程。

無(wú)菌：無(wú)活菌存在。

無(wú)菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。第二節(jié)消毒滅菌的方法（一）熱力滅菌法

高溫對(duì)細(xì)菌有明顯的致死作用---

蛋白質(zhì)變性；核酸斷裂。

有干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類(lèi)，在同一溫度下，后者比前者的效力大。

*濕熱中菌體蛋白較易凝固。*濕熱的穿透力比干熱大。*濕熱的蒸汽有潛熱存在。物理消毒滅菌法干熱滅菌干熱的殺菌作用是通過(guò)脫水、干燥和大分子變性。

1.焚燒法：直接點(diǎn)燃或在焚燒爐內(nèi)焚燒。是一種徹底的滅菌方法。適用于廢棄物品或動(dòng)物尸體。

2.燒灼法：直接用火焰滅菌。適用于接種環(huán)，試管口等的滅菌。

3.干烤法：將物品置干烤箱內(nèi)，加熱至160~170℃，2h。

適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品。

4.紅外線：利用電磁波的熱效應(yīng)滅菌。1~10

m波長(zhǎng)的熱效應(yīng)最強(qiáng)。適用于醫(yī)療器械的滅菌。濕熱滅菌

1.巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。

61.1~62.8℃，30min;71.7℃,15~30s

用于牛乳制品、酒類(lèi)等的消毒。

2.煮沸法:

100℃水浴，30min。食具、刀剪等消毒。

3.流動(dòng)蒸氣消毒法：

100℃汽浴，30min。

4.間歇蒸汽滅菌法：100℃汽浴，30min/次。

5.高壓蒸汽滅菌法：121.3℃汽?。?03.4kPa)，15~20min。

培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕物品的滅菌。（二）輻射殺菌法

紫外線殺菌波長(zhǎng)200~300nm的紫外線有殺菌作用，其中以265~266nm最強(qiáng)。

殺菌機(jī)制：形成TT,干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。

殺菌作用特點(diǎn)：穿透力弱，表面消毒。

適用范圍：手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒,或不耐熱物品的表面消毒。電離輻射：高速電子、Ｘ射線、γ射線等。

殺菌機(jī)制：產(chǎn)生游離基，破壞DNA。

應(yīng)用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品；食品。微波：波長(zhǎng)為1mm到1m左右的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì)，不能穿透金屬表面。

檢驗(yàn)室用品、非金屬器械、無(wú)菌病室的食品用具、藥杯及其它用品的消毒。（三）濾過(guò)除菌法

用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，以達(dá)到無(wú)菌的目的。抽氣（四）干燥與低溫抑菌法

干燥可使菌體內(nèi)的水分逸出，使細(xì)菌生命活動(dòng)停止。

低溫可使細(xì)菌的新陳代謝減慢，影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。

冷凍真空干燥法一、化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制

促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固。

如酚類(lèi)、醇類(lèi)、重金屬鹽類(lèi)、酸堿類(lèi)、醛類(lèi)等。

干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝。

如氧化劑、重金屬鹽類(lèi)。

損傷菌細(xì)胞膜，降低菌細(xì)胞的表面張力并增加其通透性，胞外液體內(nèi)滲，致使細(xì)胞破裂。

如酚類(lèi)表面活性劑、脂溶劑等?；瘜W(xué)消毒滅菌法二、消毒劑的主要種類(lèi)

酚類(lèi)—石炭酸、來(lái)蘇、洗必泰等

醇類(lèi)---乙醇（70~75%）、異丙醇。

重金屬鹽類(lèi)---硝酸銀、汞

氧化劑---過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、過(guò)氧乙酸、碘酒、漂白粉、次氯酸等。

表面活性劑---新潔爾滅、、杜滅芬

烷化劑---甲醛、還氧乙烷、戊二醛等。

染料---龍膽紫

酸堿類(lèi)---醋酸第三節(jié)

消毒滅菌的運(yùn)用（一）高危器械物品

用時(shí)需進(jìn)入無(wú)菌組織的物品。所有這些物品都應(yīng)該滅菌。。

（二）中危器械物品

用時(shí)不進(jìn)入無(wú)菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。（三）低危器械物品

只接觸未損傷皮膚但不進(jìn)入無(wú)菌組織和不接觸黏膜的物品。

一般用后清洗、消毒即可。（四）快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械

一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌（二）室內(nèi)空氣消毒滅菌

1.物理消毒法

①紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；

②濾過(guò)除菌：空氣通過(guò)孔徑小于0.2μm的高效過(guò)濾裝置以除去細(xì)菌和帶菌塵埃。

2．化學(xué)消毒法

包括化學(xué)消毒劑噴霧和熏蒸：①過(guò)氧乙酸噴霧、熏蒸；②過(guò)氧化氫噴霧；③二氧化氯溶液噴灑；④中草藥點(diǎn)燃煙熏。（三）手和皮膚的消毒

用肥皂和流動(dòng)水經(jīng)常并正確洗手。

病原微生物污染時(shí)應(yīng)用消毒劑消毒。

（四）黏膜的消毒

過(guò)氧化氫，高錳酸鉀（五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌

次氯酸鈣，漂白粉（六）病人污染物品的消毒

流通蒸汽，過(guò)氧乙酸，漂白粉（七）飲水的消毒

氯氣（八）環(huán)境的消毒過(guò)氧乙酸

第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間二、微生物的種類(lèi)與數(shù)量三、溫度

四、酸堿度五、有機(jī)物第五節(jié)病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全

生物安全（biosafety）是生物技術(shù)安全（safetyofbiotechnology）的簡(jiǎn)稱(chēng)。

狹義地指現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開(kāi)發(fā)、應(yīng)用及轉(zhuǎn)基因生物可能對(duì)生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類(lèi)健康產(chǎn)生潛在的危害。

廣義地指與生物有關(guān)的各種因素對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、人類(lèi)健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險(xiǎn)。

病原微生物實(shí)驗(yàn)室

病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全的核心是防擴(kuò)散和防感染。

關(guān)于病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全，我國(guó)法令包括對(duì)病原微生物的分類(lèi)管理，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)管理，實(shí)驗(yàn)室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任等。

一、病原微生物的分類(lèi)

根據(jù)傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類(lèi)：

第一類(lèi)是指能夠引起人類(lèi)或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的

微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消

滅的微生物。。

第二類(lèi)是指能夠引起人類(lèi)或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較

容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)

物與動(dòng)物間傳播的微生物。

第三類(lèi)是指能夠引起人或動(dòng)物疾病，但一般情況

下對(duì)人、動(dòng)物或環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳

播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重

疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微

生物。

第四類(lèi)是指在通常情況下不會(huì)引起人或動(dòng)物疾病

的微生物。

第一類(lèi)、第二類(lèi)統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物。

二、病原微生物實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)級(jí)別處理對(duì)象一級(jí)對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境危害較低，不具有對(duì)健康成人、動(dòng)植物致病的致病因子。二級(jí)對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子，對(duì)健康成人、動(dòng)植物和環(huán)境不會(huì)造成嚴(yán)重危害，具有有效的預(yù)防和治療措施。三級(jí)對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，主要通過(guò)氣溶膠使人類(lèi)傳染上嚴(yán)重的甚至是致命的疾病，或?qū)?dòng)植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施。四級(jí)對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，通過(guò)氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險(xiǎn)的致病因子。沒(méi)有預(yù)防治療措施。

一、二級(jí)實(shí)驗(yàn)室不得從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。三級(jí)、四級(jí)實(shí)驗(yàn)室從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。

從事高致病性病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)應(yīng)當(dāng)有２名以上的工作人員共同進(jìn)行。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的同一個(gè)獨(dú)立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時(shí)從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度。

三、實(shí)驗(yàn)室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任

感染的控制包括定期檢查實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)、病原微生物菌（毒）種和樣本的保存和使用、安全操作、實(shí)驗(yàn)室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實(shí)施情況。

監(jiān)督的主要內(nèi)容是監(jiān)督病原微生物實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行國(guó)家有關(guān)法律、行政法規(guī)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和要求的記錄、檔案及報(bào)告的情況。

法律責(zé)任的核心是承擔(dān)造成傳染病傳播、流行或者其他嚴(yán)重后果的法律責(zé)任。第四章噬菌體噬菌體(bacteriophage/phage)

是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。分布廣，有細(xì)菌的場(chǎng)所就有相應(yīng)的噬菌體存在。有嚴(yán)格的宿主特異性，只能在活的微生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)：蝌蚪形、微球形、細(xì)桿形二、化學(xué)組成

DNA

核酸或RNA

蛋白質(zhì)尾部尾絲尾板、尾刺頭部尾髓和尾鞘

三、抗原性

具有抗原性；刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體。

四、抵抗力耐低溫；較一般細(xì)菌強(qiáng)；

五、增殖嚴(yán)格的宿主特異性;

以復(fù)制方式增殖。毒性噬菌體（virulentphage）

能在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細(xì)菌。噬菌體溶菌過(guò)程:

吸附:噬菌體與細(xì)菌表面受體發(fā)生特異性結(jié)合的過(guò)程。

穿入：噬菌體核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞的過(guò)程。生物合成：噬菌體利用宿主細(xì)胞的原料，合成自身的核酸和蛋白質(zhì)。成熟與釋放：將合成的核酸和蛋白質(zhì)按一定程序裝配成完整的成熟噬菌體，