2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑葉綠素銅鈉鹽本標(biāo)準(zhǔn)適用于桑葉、蠶沙或草類（如高羊茅、紫花苜蓿、蕁麻等）、菠菜、螺旋藻等植物為原料提取葉綠素，或者直接以葉綠素為原料，經(jīng)皂化、銅代等步驟加工制得的食品添加劑葉綠素銅鈉鹽。使用溶劑為丙酮、二氯甲烷、甲醇、乙醇、異丙醇、正己烷和（或）石油醚（沸程為90℃~120℃)。2分子式和相對分子質(zhì)量2.1分子式葉綠酸銅二鈉（C34H30O5N4CuNa2）葉綠酸銅三鈉（C34H31O6N4CuNa3）2.2相對分子質(zhì)量葉綠酸銅二鈉：684.16（按2019年國際相對原子質(zhì)量）葉綠酸銅三鈉：724.16（按2019年國際相對原子質(zhì)量）3技術(shù)要求3.1感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求3.2理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)葉綠素銅鈉鹽含量（以干基計w/%≥總銅（Cuw/%游離銅（Cuw/%干燥減量，w/%≤pH3注：商品化的葉綠素銅鈉鹽產(chǎn)品應(yīng)以符合本標(biāo)準(zhǔn)的葉或符合食品添加劑質(zhì)量規(guī)格要求的乳化劑、抗氧化劑、酸度調(diào)節(jié)劑等，其含量符合聲稱值，4檢驗方法A.1一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水在未注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。試驗中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑和制品在未注明其他要求時，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。A.2鑒別試驗A.2.1溶解性溶于水，幾乎不溶于乙醇、丙醇、丙酮和乙醚，不溶于三氯甲烷。水溶液在酸性情況下（pH＜6.5）或鈣離子存在時，則有沉淀析出。A.2.2最大吸收峰及吸光度比值范圍取A.3.3.1葉綠素銅鈉鹽含量測定中的試樣溶液，在405nm±3nm和630nm±3nm的兩個波長范圍內(nèi)均有最大吸收峰，兩個最大吸收波長處測得的吸光度比值A(chǔ)405nm/A630nm在3.2～4.0之間。A.2.3銅鈉離子試驗A.2.3.1試劑和材料A.2.2.1.1硫酸。A.2.2.1.2鹽酸溶液：1+3。A.2.2.1.3氨水溶液：10%。A.2.2.1.3二乙基二硫代氨基甲酸鈉溶液：1g/L。A.2.3.2分析步驟取1g試樣，置于已在800℃±25℃下灼燒至恒重的坩堝中，緩緩加熱直至試樣完全碳化。將碳化的試樣冷卻，用0.5mL～1mL硫酸潤濕殘渣，繼續(xù)加熱至硫酸蒸汽逸盡，并在800℃±25℃的高溫爐中灼燒殘渣至恒重。在殘渣中加入10mL鹽酸溶液，在水浴上加熱溶解，過濾后補(bǔ)充水至10mL，作為試樣溶液，進(jìn)行如下試驗：a）取5mL試樣溶液，加入氨水溶液，呈藍(lán)色。b）取5mL試樣溶液，加入0.5mL二乙基二硫代氨基甲酸鈉溶液，產(chǎn)生紅褐色沉淀。c）取試樣溶液做焰色試驗，呈黃色。A.3葉綠素銅鈉鹽含量（以干基計）的測定A.3.1試劑和材料A.3.1.10.15mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取53.7g磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O加水溶解，稀釋并定容至1000mL。A.3.1.20.15mol/L磷酸二氫鉀溶液：稱取20.4g磷酸二氫鉀（KH2PO4加水溶解，稀釋并定容至1000mL。A.3.1.3磷酸鹽緩沖液（pH7.50.15mol/L磷酸氫二鈉溶液與0.15mol/L磷酸二氫鉀溶液21:4混合。A.3.2儀器和設(shè)備分光光度計。A.3.3分析步驟5A.3.3.1試樣溶液的制備稱取0.1g試樣，精確至0.0002g，加水溶解并稀釋定容至500mL。取5mL上述溶液，用磷酸鹽緩沖液（pH7.5）稀釋定容至100mL。A.3.3.2測定取試樣溶液置于1cm比色皿中，以磷酸鹽緩沖液（pH7.5）做空白對照，用分光光度計在405nm±3nm波長范圍內(nèi)的最大吸收波長處測定吸光度。吸光度應(yīng)控制在0.3～0.7之間，否則應(yīng)調(diào)整試樣溶液濃度，再重新測定吸光度。A.3.4結(jié)果計算葉綠素銅鈉鹽含量（以干基計）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1，按式（A.1）計算：565×100×m×1?w0565×100×m×1?w0式中：A——試樣溶液的吸光度值；104——體積換算系數(shù)；565——1cm比色皿中濃度為1%（100mL溶劑含1g葉綠素銅鈉鹽）的溶液消光值；100——濃度換算系數(shù)；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（gw0——試樣的干燥減量，%。試驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于算術(shù)平均值的2.0%。A.4游離銅（Cu）的測定A.4.1試劑和材料同GB5009.13。A.4.2儀器和設(shè)備同GB5009.13。A.4.3試樣處理稱取0.1g試樣，精確至0.0002g，加約75mL水溶解，用1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至3.0，用水定容至100mL，雙層濾紙過濾。A.4.4分析步驟除試樣處理外，其余步驟按GB5009.13規(guī)定的方法測定。A.5pH的測定配制濃度為1%的試樣溶液，用酸度計測定其pH。A.6堿性染料的測定配制5mL的0.05%試樣溶液，加1mL的1mol/L鹽酸溶液，再加5mL正己烷，完全混合后分離。正己烷層不深于淡綠色，即為通過試驗。A.7溶劑殘留（二氯甲烷、甲醇、異丙醇、正己烷、正庚烷）的測定6A.7.1試劑和材料A.7.1.1水：符合GB/T6682規(guī)定的一級水。A.7.1.2待測組分標(biāo)準(zhǔn)品：二氯甲烷、甲醇、異丙醇、正己烷、正庚烷，色譜純。A.7.1.3內(nèi)標(biāo)物：3-甲基-2-戊酮，色譜純。A.7.1.4N-甲基吡咯烷酮。A.7.2儀器和設(shè)備氣相色譜儀：配備氫火焰離子化檢測器（FID）和頂空進(jìn)樣器。A.7.3參考色譜條件A.7.3.1色譜柱：石英毛細(xì)管柱(Φ0.53mm×30m），涂層為二甲基聚硅氧烷，厚度為5μm，或同等性能的色譜柱。A.7.3.2載氣：氮氣。A.7.3.3載氣流速：5mL/min。A.7.3.4柱溫：35℃保持5min，以5℃/min升溫至90℃,保持6min。A.7.3.5進(jìn)樣口溫度：140℃。A.7.3.6檢測器溫度：300℃。A.7.3.7進(jìn)樣量：1.0mL。A.7.4參考頂空進(jìn)樣條件A.7.4.1試樣加熱溫度：80℃。A.7.4.2試樣加熱時間：10min。A.7.4.3注射器溫度：90℃。A.7.4.4傳質(zhì)溫度：100℃。A.7.5分析步驟A.7.5.1內(nèi)標(biāo)溶液的制備移取50.0mL水至一個50mL進(jìn)樣瓶中，稱重進(jìn)樣瓶，精確至0.0001g。移取15μL3-甲基-2-戊酮，將其注入進(jìn)樣瓶，混勻，再稱重進(jìn)樣瓶，精確至0.01g。A.7.5.2空白溶液的制備分別量取5.0mL水和1.0mL內(nèi)標(biāo)溶液，移入頂空瓶中，移取20μLN-甲基吡咯烷酮，將其注入頂空瓶，封蓋，80℃加熱10min并劇烈振搖，混勻。A.7.5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別量取5.0mL水和1.0mL內(nèi)標(biāo)溶液，移入頂空瓶中，稱取10mg待測組分標(biāo)準(zhǔn)品（對每個溶劑分別分析），用N-甲基吡咯烷酮溶解稀釋定容至100mL，移取20μL注入頂空瓶，封蓋，80℃加熱10min并劇烈振搖，混勻。A.7.5.4試樣溶液的制備稱取0.2g試樣，精確至0.0001g，置于頂空瓶中，加入5.0mL水和1.0mL內(nèi)標(biāo)溶液，移取20μLN-甲基吡咯烷酮，將其注入頂空瓶，封蓋，80℃加熱10min并劇烈振搖，混勻。A.7.5.5測定在A.7.3和A.7.4參考操作條件下，分別對空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液頂空處理后進(jìn)行色譜分析。A.7.6結(jié)果計算A.7.6.1校準(zhǔn)因子fi7校準(zhǔn)因子fi，按式（A.2）計算：…………式中：mi——標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；50——質(zhì)量換算系數(shù)；ms——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；Af——標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖中待測組分峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值；Ag——空白溶液色譜圖中待測組分峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值。A.7.6.2待測組分含量試樣中待測組分（二氯甲烷、甲醇、異丙醇、正己烷、正庚烷）的含量wi，單位為毫克每千克（mg/kg按式（A.3）計算：…………式中：Ai——試樣溶液色譜圖中待測組分峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值；m0——內(nèi)標(biāo)溶液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，單