《基于聚合酶基因序列的HIV-1耐藥突變分析技術(shù)規(guī)范》編制說(shuō)明一、工作簡(jiǎn)況（一）項(xiàng)目背景及目的意義隨著抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（ART）的推廣，接受抗病毒治療的HIV感染者人數(shù)不斷增加。HIV具有高度的變異性，在藥物壓力下易產(chǎn)生耐藥基因突變而出現(xiàn)耐藥毒株，長(zhǎng)期服藥難以保持良好的依從性，增加了耐藥毒株產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。耐藥毒株可進(jìn)一步傳播，導(dǎo)致耐藥毒株的感染。HIV耐藥使病毒對(duì)藥物的敏感性下降并可導(dǎo)致治療失敗，影響抗病毒治療及暴露前后預(yù)防的效果，是艾滋病防治面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。準(zhǔn)確的HIV耐藥檢測(cè)方法是防控耐藥的有力工具，基于聚合酶基因序列的基因型耐藥檢測(cè)是目前主要使用的HIV耐藥檢測(cè)方法，檢測(cè)流程包括樣品采集及處理、核酸提取及純化、聚合酶基因片段擴(kuò)增、測(cè)序及序列編輯、耐藥突變的確定及耐藥解釋等，操作復(fù)雜、影響因素多。為了得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)方法、步驟和流程應(yīng)規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，并采取覆蓋檢測(cè)全過(guò)程的質(zhì)量保證和質(zhì)量控制措施。本標(biāo)準(zhǔn)旨在規(guī)范基于聚合酶基因序列的HIV基因型耐藥檢測(cè)及質(zhì)量控制方法，以指導(dǎo)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。（二）任務(wù)來(lái)源2025年1月，由粵港澳大灣區(qū)標(biāo)準(zhǔn)創(chuàng)新聯(lián)盟批準(zhǔn)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《基于聚合酶基因序列的人免疫缺陷病毒1型基因型耐藥檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》立項(xiàng)。本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心提出，粵港澳大灣區(qū)標(biāo)準(zhǔn)創(chuàng)新聯(lián)盟歸口，標(biāo)準(zhǔn)編制組由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心、軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所、中國(guó)科學(xué)院微生物研究所、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、浙江省疾病預(yù)防控制中心、北京市疾病預(yù)防控制中心、四川省疾病預(yù)防控制中心、上海市疾病預(yù)防控制中心、廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、湖南省疾病預(yù)防控制中心、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬市八醫(yī)院、香港大學(xué)艾滋病研究所、澳門仁伯爵綜合醫(yī)院、澳門衛(wèi)生局、深圳華大智造科技股份有限公司共同組成。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則1.依法原則以現(xiàn)行法律法規(guī)的規(guī)定和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)。本標(biāo)準(zhǔn)中的約束性條款首先應(yīng)與這些法律法規(guī)、強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的要求保持一致，并在必要情況下予以細(xì)化和延伸，但總體上不得有悖于法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的要求。2.實(shí)用性原則標(biāo)準(zhǔn)的編寫結(jié)合了實(shí)驗(yàn)室樣本要求、核酸提取及擴(kuò)增、序列分析、耐藥性分析和質(zhì)量控制等耐藥檢測(cè)的實(shí)際情況，可指導(dǎo)各實(shí)驗(yàn)室和檢測(cè)機(jī)構(gòu)建立自己的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。三、標(biāo)準(zhǔn)編制過(guò)程1.前期準(zhǔn)備階段2024年11月，參編單位成立標(biāo)準(zhǔn)編制組。標(biāo)準(zhǔn)編制組對(duì)目錄、方法內(nèi)容進(jìn)行討論并加以整理分析，起草標(biāo)準(zhǔn)的初步框架。2024年12月，標(biāo)準(zhǔn)編制組召開(kāi)第一次工作會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)制定的目的意義、標(biāo)準(zhǔn)框架進(jìn)行討論，并根據(jù)會(huì)議結(jié)論形成標(biāo)準(zhǔn)草案。2.標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)階段于聚合酶基因序列的人免疫缺陷病毒1型基因型耐藥檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》大灣區(qū)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的立項(xiàng)。3.標(biāo)準(zhǔn)起草階段參會(huì)成員對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案框架結(jié)構(gòu)和各章節(jié)細(xì)節(jié)內(nèi)容等展開(kāi)討論，同時(shí)結(jié)合實(shí)際實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容進(jìn)一步完善，會(huì)后形成了標(biāo)準(zhǔn)工作組討論稿（一稿）。起草單位對(duì)標(biāo)準(zhǔn)整體框架、主要技術(shù)指標(biāo)、試驗(yàn)方法以及術(shù)語(yǔ)定義提出建設(shè)性意見(jiàn)，形成了標(biāo)準(zhǔn)工作組討論稿（二稿）。主要研究討論各項(xiàng)內(nèi)容的準(zhǔn)確性和實(shí)用性。編制組根據(jù)會(huì)議討論結(jié)果對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容進(jìn)一步完善。此外，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容表述和格式做了進(jìn)一步規(guī)范，并形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿。四、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容（一）范圍本文件規(guī)定了采用雙脫氧鏈末端終止法或高通量測(cè)序技術(shù)獲得HIV-1聚合酶基因序列，并進(jìn)行HIV-1基因型耐藥檢測(cè)的方法，以及相應(yīng)的質(zhì)量控制程序。本文件適用于基于聚合酶基因序列進(jìn)行人HIV-1基因型耐藥檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室。（二）規(guī)范性引用文件本章節(jié)主要包括了標(biāo)準(zhǔn)文本中規(guī)范性引用的文件。（三）術(shù)語(yǔ)和定義本章節(jié)主要包括了人免疫缺陷病毒和耐藥等術(shù)語(yǔ)和定（四）基本要求本章節(jié)給出了樣本要求，規(guī)定了樣本類型，并對(duì)不同樣本類型給出具體的保存措施。（五）試驗(yàn)方法原則試驗(yàn)方法遵循基本原則、專業(yè)性、真實(shí)性原則。Sanger法測(cè)序的方法參照GB/T34265Sanger法測(cè)序技術(shù)指南；高通量基因測(cè)序的方法參照GB/T30989高通量基因測(cè)序技術(shù)規(guī)程；實(shí)驗(yàn)室生物安全參照GB/T19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求；艾滋病診斷參照WS293-2019艾滋病和艾滋病病毒感染診斷。五、預(yù)期效益HIV-1耐藥監(jiān)測(cè)是全球艾滋病防控的重要組成部分，隨著抗病毒治療的廣泛實(shí)施，HIV耐藥性問(wèn)題逐漸成為影響治療效果的關(guān)鍵挑戰(zhàn)。隨著治療范圍的進(jìn)一步擴(kuò)大，未來(lái)將有更多臨床和疾控機(jī)構(gòu)參與耐藥檢測(cè)工作。這表明HIV-1耐藥突變檢測(cè)具有廣闊的市場(chǎng)需求。目前，我國(guó)耐藥突變檢測(cè)市場(chǎng)尚處于初級(jí)階段，部分實(shí)驗(yàn)室技術(shù)參差不齊，檢測(cè)結(jié)果缺乏統(tǒng)一性和規(guī)范性。本標(biāo)準(zhǔn)的制定將為實(shí)驗(yàn)室提供統(tǒng)一的技術(shù)框架，有助于提升檢測(cè)質(zhì)量，進(jìn)一步推動(dòng)耐藥檢測(cè)的普及，為治療方案的制定和公共衛(wèi)生決策提供科學(xué)依據(jù)。HIV-1耐藥突變分析技術(shù)正向著高效、精準(zhǔn)、自動(dòng)化的方向發(fā)展。結(jié)合新一代測(cè)序技術(shù)（NGS）和人工智能算法的應(yīng)用，未來(lái)的耐藥檢測(cè)工作不僅能夠大幅提升檢測(cè)通量，還可基于海量數(shù)據(jù)構(gòu)建毒株突變數(shù)據(jù)庫(kù)，優(yōu)化耐藥突變的篩選和判讀流程。六、國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究依據(jù)、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)聚合酶基因序列的HIV-1基因型耐藥檢測(cè)，暫無(wú)國(guó)七、重大分歧意見(jiàn)的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)在編寫過(guò)程中無(wú)重大分歧意