第十一章生物技術(shù)與工程課時2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用單擊此處添加文本具體內(nèi)容，簡明扼要地闡述你的觀點(diǎn)考點(diǎn)1微生物的培養(yǎng)技術(shù)考點(diǎn)2微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)03練習(xí)幫練透好題精準(zhǔn)分層01單擊添加標(biāo)題單擊此處添加正文02單擊添加標(biāo)題單擊此處添加正文目錄Contents

課標(biāo)要求1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提；2.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)；3.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物；4.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法；5.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法核心考點(diǎn)五年考情微生物的培

養(yǎng)技術(shù)2023：重慶T9、江蘇T7、北京T16、山東T15、湖南T21(1)、全國乙T37；2022：河北T23(1)、全國乙T37、浙江1月T7、湖北T5；2021：北京T12、天津T1、廣東T21；2020：江蘇T19、浙江7月T19；2019：江蘇T12、全國ⅠT37核心考點(diǎn)五年考情微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)2023：遼寧T9、湖南T21(2)、廣東T10、浙江1月T19；2022：河北T23(2)、江蘇T3、全國甲T37、廣東T21(1)(2)、浙江6月T29(一)、海南T12；2021：山東T14和T20、河北T23、湖南T21、江蘇T18、浙江6月T29(一)；2020：江蘇T31、全國ⅠT37；2019：江蘇T19、北京T3、全國ⅡT37核心素養(yǎng)對接1.生命觀念——結(jié)構(gòu)與功能觀：通過無菌技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室操作，形成生物與環(huán)境相統(tǒng)一的觀念。2.科學(xué)思維——?dú)w納與概括：平板劃線法和稀釋涂布平板法的異同；選擇培養(yǎng)

基和鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別等。3.科學(xué)探究——設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究微生物培養(yǎng)的條件命題分析預(yù)測1.高考對本部分的考查主要是微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、無菌技術(shù)、特定微生物的分離和純化及特定微生物的測定等相關(guān)知識，常聯(lián)系生產(chǎn)、生活情境考查考生的理解能力和科學(xué)探究能力，題目有一定的綜合性。2.預(yù)計(jì)2025年高考可能會結(jié)合污水處理、功能菌的篩選等情境考查此部分內(nèi)容，體現(xiàn)高考試題的綜合性和應(yīng)用性

考點(diǎn)1微生物的培養(yǎng)技術(shù)

1.培養(yǎng)基的配制營養(yǎng)物質(zhì)碳源無機(jī)鹽特殊營養(yǎng)物質(zhì)凝固劑2.無菌技術(shù)(1)含義：在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止[6]

?的方法。(2)消毒和滅菌的比較項(xiàng)目消毒滅菌相同點(diǎn)目的防止雜菌污染原理使蛋白質(zhì)變性來抑制微生物的生命活動或殺死微生物雜菌污染項(xiàng)目消毒滅菌不同點(diǎn)條件較為[7]

?或

生物等方法強(qiáng)烈的理化方法結(jié)果僅殺死物體表面或內(nèi)部的一部分

微生物殺死物體內(nèi)外所有的微生物，

包括[8]

?和孢子溫和的物理、化學(xué)芽孢項(xiàng)目消毒滅菌不同點(diǎn)方法①煮沸消毒法：一般物品，如家

庭餐具等生活用品；②巴氏消毒法：一些不耐高溫的

液體，如牛奶；③化學(xué)藥物消毒法：用酒精擦拭

雙手、用氯氣消毒水源等；④紫外線消毒法：接種室、接種

箱、超凈工作臺①濕熱滅菌：培養(yǎng)基及容器

等；②干熱滅菌：玻璃器皿、金屬

用具等；③灼燒滅菌：接種工具、其他

金屬用具等教材補(bǔ)遺[選必3P10“相關(guān)信息”]生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中

的部分微生物的方法。3.微生物的純培養(yǎng)(1)概念：由[9]

?繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物

的過程就是純培養(yǎng)。(2)單菌落獲得的接種方法：[10]

?、稀釋涂布平板法。單一個體平板劃線法(3)酵母菌的純培養(yǎng)高壓蒸汽滅菌法平板劃線法倒置提醒

平板劃線時每次灼燒的目的不同項(xiàng)目目的第一次劃線前灼燒避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物中間每次劃線前灼燒殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的

菌種均來自上次劃線的末端劃線結(jié)束后灼燒殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染操作

者

基礎(chǔ)自測1.培養(yǎng)基中并不都需要添加碳源和氮源。

(

√

)2.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時先調(diào)節(jié)pH后滅菌。

(

√

)3.液體培養(yǎng)基含有水，而固體培養(yǎng)基不含水。

(

×

)4.日常生活中所用的84消毒液，其消毒方法屬于巴氏消毒法。

(

×

)5.無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)，都可采用高

壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。

(

×

)6.消毒的原則是既要?dú)⑺啦牧媳砻娴奈⑸铮忠獪p少消毒劑對細(xì)胞的傷害。

(

√

)√√×××√7.倒平板時應(yīng)將培養(yǎng)皿蓋打開放到實(shí)驗(yàn)臺一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。

(

×

)8.平板涂布時涂布器使用前必須進(jìn)行消毒[2023山東，T15B]。

(

×

)××9.接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄[2023山東，T15C]。

(

×

)10.通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌[2023

江蘇，T7C]。

(

×

)××深度思考1.結(jié)合構(gòu)成細(xì)胞的元素和化合物的知識，分析培養(yǎng)基中加入的碳源、氮源、水和無

機(jī)鹽的作用。項(xiàng)目作用碳源主要構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，為異養(yǎng)菌提供能源氮源主要合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝物水是良好的溶劑、可以參與生物化學(xué)反應(yīng)，也可以維持生物大分子結(jié)構(gòu)

的穩(wěn)定無機(jī)鹽是細(xì)胞的組成成分、生理調(diào)節(jié)物質(zhì)以及某些化能自養(yǎng)菌的能源物質(zhì)等提示培養(yǎng)基中碳源、氮源、水和無機(jī)鹽的作用如表：2.某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，可能的原因是

什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？3.平板劃線時最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？提示可能的原因是菌液濃度過高、劃線次數(shù)過少或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接

種環(huán)灼燒滅菌。采取的措施是增大稀釋倍數(shù)、增加劃線次數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將

接種環(huán)灼燒滅菌。提示最后一次劃線已經(jīng)將菌液稀釋到較低濃度，如果與第一次劃線相連，則增加

了菌種數(shù)目，達(dá)不到純化的效果。

命題點(diǎn)1

培養(yǎng)基的成分、功能和應(yīng)用分析1.[浙江7月高考]下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯誤的是(

A

)A.利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B.配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pHC.酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒D.適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化A123456[解析]利用尿素固體培養(yǎng)基篩選尿素分解菌時，尿素固體培養(yǎng)基并不直接殺死其

他微生物，而是其他微生物不能以尿素為氮源，無法在尿素固體培養(yǎng)基中存活，A

錯誤；不同的微生物生長所需的最適pH不同，因此配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種

類調(diào)整培養(yǎng)基的pH，B正確；酵母菌不能直接利用淀粉進(jìn)行酒精發(fā)酵，需要在淀粉

酶作用下將淀粉水解成葡萄糖，C正確；醋化醋桿菌可以以酒精為發(fā)酵底物，適宜

濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化，D正確。1234562.[全國Ⅲ高考，15分]回答下列與細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。(1)在細(xì)菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是

(填“蛋白

胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)

節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因是

?。硝化細(xì)菌在沒

有碳源的培養(yǎng)基上

(填“能夠”或“不能”)生長，原因是

?

?。蛋白胨不同細(xì)菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細(xì)菌可以

利用空氣中的CO2作為碳源[解析]

細(xì)菌培養(yǎng)時常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸

鹽、維生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、維生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3

不能為微生物提供碳源。不同細(xì)菌生長繁殖所需要的最適pH是不同的，應(yīng)該根據(jù)培

養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。硝化細(xì)菌是化能自養(yǎng)型細(xì)菌，可以空氣中的CO2

為碳源，因此其在沒有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長。123456(2)用平板培養(yǎng)細(xì)菌時一般需要將平板

(填“倒置”或“正置”)。[解析]

在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時，一般需將平板倒置，這樣可以防止培養(yǎng)皿

蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。倒置(3)單個細(xì)菌在平板上會形成菌落，研究人員通常可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等

特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是

?

?。[解析]

不同種類的微生物所形成的菌落，在大小、形狀和顏色等方面具有一定

的特征，不同種微生物在一定培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，可以作為菌

種鑒定的重要依據(jù)。在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表

現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征123456(4)有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過

?處理，這種處理可以殺死丟棄物

中所有的微生物。[解析]使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。滅菌123456命題點(diǎn)2

無菌操作技術(shù)3.[2022湖北]滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的

是(

D

)A.動、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行B.微生物、動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C.為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D.可用濕熱滅菌法對實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌D[解析]動、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無菌條件下進(jìn)行，A錯誤；在體外培養(yǎng)

動物細(xì)胞時，向培養(yǎng)基中添加一定量的抗生素可以防止污染，但在體外培養(yǎng)微生物

時，向培養(yǎng)基中加入抗生素可能會抑制微生物的生長，B錯誤；可采用濕熱滅菌法

(高壓蒸汽滅菌法)對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯誤。1234564.[2021天津]下列操作能達(dá)到滅菌目的的是(

C

)A.用免洗酒精凝膠擦手B.制作泡菜前用開水燙洗容器C.在火焰上灼燒接種環(huán)D.防疫期間用石炭酸噴灑教室[解析]用免洗酒精凝膠擦手、制作泡菜前用開水燙洗容器、防疫期間用石炭酸噴

灑教室，這三種操作都屬于消毒，A、B、D不符合題意；在火焰上灼燒接種環(huán)屬于

滅菌，C符合題意。C123456命題點(diǎn)3

微生物的純培養(yǎng)5.[江蘇高考]為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如

圖所示。下列敘述正確的是(

B

)A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色B123456[解析]倒平板后無需間歇晃動，A錯誤；圖中Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量太多，Ⅲ區(qū)的細(xì)

菌數(shù)量較少，可從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；Ⅲ區(qū)中存在單菌落，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果能達(dá)

到菌種純化的目的，C錯誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，但不能和纖維素

水解后的產(chǎn)物形成紅色復(fù)合物，因此菌落周圍的纖維素被降解后，不能被剛果紅染

成紅色，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)透明圈，D錯誤。1234566.[2024濟(jì)南檢測]聚丙烯(PP)是近海海水和沉積物中存在的主要的塑料碎片，造成了

嚴(yán)重的海洋生態(tài)問題，分離并富集PP降解菌可為緩解塑料碎片污染提供菌種資源。

下列說法正確的是(

C

)A.可以設(shè)計(jì)以PP為唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基來分離PP降解菌B.因海水和沉積物中存在大量不能降解PP的菌種，因此樣品采集所用容器只需無毒

即可C.用無菌水沖洗附著在PP顆粒上的細(xì)菌，涂布于平板進(jìn)行純培養(yǎng)，依據(jù)菌落的大

小、形態(tài)、顏色等特征挑取單菌落，獲得純培養(yǎng)物D.本實(shí)驗(yàn)使用平板較多，為避免混淆，最好在皿蓋上做好標(biāo)記C123456[解析]牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有碳源，不能保證以PP為唯一碳源，A錯誤；根據(jù)

微生物實(shí)驗(yàn)的要求，樣品采集所用的容器需要無毒無菌，B錯誤；附著在PP顆粒上

的細(xì)菌可能具有分解PP的能力，依據(jù)菌落的大小、形態(tài)、顏色等特征可初步判斷菌

種的類型，挑取單菌落，可獲得純培養(yǎng)物，C正確；由于培養(yǎng)皿需要倒置，為避免

混淆，應(yīng)在皿底上做標(biāo)記，D錯誤。123456考點(diǎn)2微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

1.選擇培養(yǎng)基抑制或阻止2.微生物的選擇培養(yǎng)——稀釋涂布平板法的操作步驟(1)系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過[2]

?的

方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量[3]

?，

細(xì)胞得以分散。操作步驟：液體稀釋減少(2)涂布平板操作培養(yǎng)基表面酒精涂布均勻3.微生物的數(shù)量測定——兩種計(jì)數(shù)方法的比較活菌計(jì)數(shù)法項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計(jì)數(shù)法(顯微計(jì)數(shù)法)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面

生長的一個[7]

?，來源于樣品

稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上

的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有

多少活菌利用特定的[8]

?

?，在顯微鏡下觀

察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積

的樣品中微生物的數(shù)量單菌落細(xì)菌計(jì)數(shù)板或

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計(jì)數(shù)法(顯微計(jì)數(shù)法)公式每克樣品中的菌株數(shù)＝(

C

÷

V

)×

M

，其

中

C

代表某一稀釋度下平板上生長的平

均菌落數(shù)，

V

代表涂布平板時所用的稀釋

液的體積(mL)，

M

代表稀釋倍數(shù)每毫升原液中所含的微生物數(shù)＝

每小格的平均微生物數(shù)

×400×104×稀釋倍數(shù)缺點(diǎn)當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上

觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分死菌與活菌結(jié)果與實(shí)際值相比[9]

?與實(shí)際值相比[10]

?偏小偏大提醒

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板比細(xì)菌計(jì)數(shù)板厚，常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的

計(jì)數(shù)。用細(xì)菌計(jì)數(shù)板可對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。4.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)3～8cm30～30030～37菌落教材補(bǔ)遺[選必3P18“探究·實(shí)踐”]本活動只是初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌，還

需要借助生物化學(xué)的方法來鑒定所分離的菌種：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶可以將

尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑

變紅，可確定該細(xì)菌能夠分解尿素。

基礎(chǔ)自測1.平板劃線法和稀釋涂布平板法都用固體培養(yǎng)基，接種工具都為接種針，都能計(jì)

數(shù)。

(

×

)2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

(

×

)3.用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成

單個菌落。

(

√

)4.分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使培養(yǎng)基的pH降低。

(

×

)××√×6.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)[2023山東，T15A]。

(

×

)7.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物[2023山東，T15D]。

(

√

)8.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測定[2023江蘇，

T7D]。

(

×

)×√×5.剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維

素分解菌。

(

×

)×深度思考1.請從主要步驟、接種工具、菌種獲取等方面比較分析平板劃線法和稀釋涂布

平板法。提示平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較如表：項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面

連續(xù)劃線系列稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器菌體獲取在具有顯著的菌落特征的

區(qū)域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征、分離

混合菌落可以計(jì)數(shù)、觀察菌落特征、分離混合菌落項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，平板不干燥則效果不好，容易蔓

延共同點(diǎn)都要用固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單菌

落；都可用于觀察菌落特征2.在進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時為什么要選擇菌落數(shù)為30～300的平板？能否只選擇一個菌落

數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？提示

(1)因?yàn)槿羝桨逯械木鋽?shù)小于30，說明稀釋倍數(shù)太大，會造成誤差；若平板

中的菌落數(shù)大于300，則菌落的生長受到抑制，并且難以區(qū)分各個菌落，也不能準(zhǔn)

確計(jì)數(shù)，會造成誤差。(2)不能。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性原則，為排除偶然因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)

果的影響，同一稀釋度的菌液涂布后至少要選擇三個平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。3.利用稀釋涂布平板法純化分解尿素的細(xì)菌時，經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌

落，可能的原因有哪些？4.為什么稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？提示出現(xiàn)多種菌落的可能原因：培養(yǎng)基制備過程中被雜菌污染；接種過程中，無

菌操作不符合要求；系列稀釋時，無菌操作不符合要求等。提示因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。

命題點(diǎn)1

微生物的選擇培養(yǎng)1.[2023廣東]研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋

白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖所示)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下

列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是(

D

)A.a點(diǎn)時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點(diǎn)時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基D123[解析]由圖可知，隨著堆肥時間的延長，堆肥溫度先升高后保持穩(wěn)定，a點(diǎn)時堆肥

溫度最低，c點(diǎn)時堆肥溫度最高。該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄

物中角蛋白的嗜熱菌，應(yīng)該用以角蛋白為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選培養(yǎng)，且應(yīng)該

在高溫條件下取樣，即c點(diǎn)時取樣，D符合題意。1232.[2022江蘇]下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是(

D

)A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌[解析]在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使

培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，D錯誤。D123命題點(diǎn)2

微生物的分離與計(jì)數(shù)3.[全國Ⅰ高考，15分]某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會對環(huán)境造

成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能

高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、

水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y。123回答下列問題：(1)實(shí)驗(yàn)時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用

?的方法進(jìn)行滅菌。乙

培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是

。甲、乙培養(yǎng)基均屬于

?培養(yǎng)基。[解析]

實(shí)驗(yàn)過程中，對盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶進(jìn)行滅菌時，常采用高壓蒸汽滅

菌法。據(jù)題圖分析可知，乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，與甲培養(yǎng)基相比，其特有的組分

Y物質(zhì)應(yīng)是凝固劑瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均只允許能利用物質(zhì)S作為氮源和碳源的微生

物生長，因此均為選擇培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇123(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100

μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶

M中的菌液稀釋

?倍。[解析]據(jù)題意，假設(shè)至少將搖瓶M中的菌液稀釋

x

倍，才能保證稀釋后的100μL

菌液中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)不超過200個，初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，則

有200÷(100×10－3)×

x

＝2×107，得

x

＝104，因此至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋

104倍。104

123(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解

量反而下降，其原因可能是

(答出1點(diǎn)即

可)。[解析]在篩選過程中，若培養(yǎng)基中S濃度過高，可能會導(dǎo)致細(xì)胞失水，進(jìn)而抑制

菌株的生長。(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請寫出主要實(shí)驗(yàn)步驟：

?

?。[解析]將含有能降解S的細(xì)菌的淤泥加入無菌水中，進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，利用稀釋

涂布平板法，取適量的菌液涂布到乙培養(yǎng)基上，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一段時間

后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，即可估算出淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長取淤泥加入無

菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)123(5)上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提

供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即

?。[解析]

本實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的

生長提供的營養(yǎng)物質(zhì)是水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。水、碳源、氮源和無機(jī)鹽123

1.[2023山東]平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是(

D

)A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B.平板涂布時涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C.接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物[解析]不含氮源的平板可用于篩選具有固氮能力的微生物，A錯誤。平板涂布時涂

布器使用前必須進(jìn)行滅菌，B錯誤。接種后未長出菌落的培養(yǎng)基中也可能含有微生

物，需進(jìn)行滅菌，再丟棄，C錯誤。能分解尿素的細(xì)菌(能合成脲酶)能夠在以尿素為

唯一氮源的培養(yǎng)基上正常生長和繁殖，D正確。D123452.[2021北京]人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下

述操作不正確的是(

C

)A.對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷[解析]通常采用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，A正確；欲從皮膚表面的多種

微生物中分離出葡萄球菌，可用無菌棉拭子從皮膚表面取樣，B正確；不能直接用

取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布，C錯誤；一般情況下，不同微生物表現(xiàn)出的

菌落的形態(tài)和顏色等特征不同，可根據(jù)菌落的特征進(jìn)行初步判斷，D正確。C123453.[2023全國乙，15分]某研究小組設(shè)計(jì)了一個利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)

驗(yàn)。其主要步驟是：先將粉碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤中，噴水浸潤、

接種菌T，培養(yǎng)一段時間后，再用清水淋洗秸稈堆(清水淋洗時菌T不會流失)，在裝

有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進(jìn)行乙醇發(fā)酵(酒精發(fā)酵)。實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。12345回答下列問題。(1)在粉碎的秸稈中接種菌T，培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩捴械睦w維素大量分

解，其原因是

?。[解析]纖維素的分解需要纖維素酶的催化。菌T可以分泌纖維素酶12345(2)采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以用淋洗液為原料制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中還需要

加入氮源等營養(yǎng)成分，氮源的主要作用是

?

(答出1點(diǎn)即可)。通常，可采用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。在使用該方法

時，為了達(dá)到良好的滅菌效果，需要注意的事項(xiàng)有

?

?

?

(答出2點(diǎn)即可)。用于合成蛋白質(zhì)、核酸等含氮物質(zhì)待滅菌的物品不宜放置過擠；

必須將鍋內(nèi)的冷空氣充分排出；滅菌完畢后，不可立即打開排氣閥，待壓力表的壓

力降到零時，才能打開；錐形瓶與試管口不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包裹瓶

口的紙而透入棉塞12345[解析]

氮源主要用于菌體細(xì)胞中蛋白質(zhì)、核酸等含氮物質(zhì)的合成。在使用高壓

蒸汽滅菌法時，為達(dá)到良好的滅菌效果，需注意的事項(xiàng)有①待滅菌的物品不要裝得

太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果；②錐形瓶與試管口不要與桶壁接觸，以

免冷凝水淋濕包裹瓶口的紙而透入棉塞；③充分排出鍋內(nèi)的冷空氣；④滅菌結(jié)束

后，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降到零時，打開排氣閥，旋松螺

栓，打開蓋子，取出滅菌物品。12345(3)將酵母菌接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，擰緊瓶蓋，置于適宜溫度下培養(yǎng)、發(fā)酵。擰

緊瓶蓋的主要目的是

?。但是在酵母菌發(fā)酵過程

中，還需適時擰松瓶蓋，原因是

?

。發(fā)酵液中的乙醇可用

?

?溶液檢測。[解析]

酒精發(fā)酵離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型微生物，在有氧條件下，

酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，在無氧條件下，酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵。要使酵母

菌進(jìn)行酒精發(fā)酵，需要創(chuàng)造無氧環(huán)境。酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精的過程中，會

不斷產(chǎn)生CO2，要適時擰松瓶蓋放出CO2，以免發(fā)酵瓶破裂。在酸性條件下，橙色的

重鉻酸鉀溶液可與乙醇發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變成灰綠色。創(chuàng)造無氧環(huán)境，利于酒精的產(chǎn)生酒精發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2會導(dǎo)致瓶內(nèi)壓強(qiáng)升

高，適時擰松瓶蓋可及時排出CO2，防止發(fā)酵瓶破裂酸

性重鉻酸鉀12345(4)本實(shí)驗(yàn)收集的淋洗液中的

?可以作為酵母菌生產(chǎn)乙醇的原料。與以糧食

為原料發(fā)酵生產(chǎn)乙醇相比，本實(shí)驗(yàn)中乙醇生產(chǎn)方式的優(yōu)點(diǎn)是

?

?。[解析]菌T可分泌纖維素酶，纖維素酶可以將纖維素分解成葡萄糖。用秸稈替代

糧食生產(chǎn)乙醇，一方面提高了能量利用率，減少了環(huán)境污染，另一方面減少了對糧

食的消耗，從而保障糧食安全。葡萄糖提高了能量利用率、

減少了對環(huán)境的污染、保障糧食安全123454.[2022廣東節(jié)選，7分]研究深海獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境對于開發(fā)海洋資源具有重要

意義。近期在“科學(xué)號”考察船對中國南?？瓶贾校袊茖W(xué)家采集了某海域

1146米深海冷泉附近沉積物樣品，分離、鑒定得到新的微生物菌株并進(jìn)一步

研究了其生物學(xué)特性。12345回答下列問題：(1)研究者先制備富集培養(yǎng)基，然后采用

?法滅菌，冷卻后再接入沉

積物樣品，28℃厭氧培養(yǎng)一段時間后，獲得了含擬桿菌的混合培養(yǎng)物，為了獲得純

種培養(yǎng)物，除了稀釋涂布平板法，還可采用

?法。據(jù)圖分析，擬桿菌新

菌株在以

?為碳源時生長狀況最好。高壓蒸汽滅菌平板劃線纖維素[解析]

富集培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌?？梢圆捎孟♂屚坎计桨?/p>

法或平板劃線法對微生物進(jìn)行分離純化。分析題圖可知，在以纖維素為碳源的培養(yǎng)

基中細(xì)胞數(shù)最多，故擬桿菌新菌株在以纖維素為碳源時生長狀況最好。12345(2)研究發(fā)現(xiàn)，將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩

選出來，推測其原因可能是

?

。(答一點(diǎn)即可)[解析]

深海冷泉中某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)才能生存，故將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來。某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)才能生存

(或某些微生物只有在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活)

123455.[2022全國乙，15分]化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)。用菌株C可生

產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過實(shí)驗(yàn)比較不

同碳源對菌體生長和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。碳源細(xì)胞干重(g/L)S產(chǎn)量(g/L)葡萄糖3.120.15淀粉0.010.00制糖廢液2.300.1812345回答下列問題。(1)通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時，需要對所用的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法

有

(答出2點(diǎn)即可)。干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌葡萄糖制糖廢液水、氮源、無機(jī)鹽[解析]

在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時，對玻璃器皿進(jìn)行滅菌的方法有干熱滅菌和高壓

蒸汽滅菌等。(2)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長的最適碳源是

；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳

源是

。菌株C的生長除需要碳源外，還需要

(答

出2點(diǎn)即可)等營養(yǎng)物質(zhì)。[解析]

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，以葡萄糖作為碳源時，細(xì)胞干重最大，最有利于菌株C生長；而以制糖廢液作為碳源時，S產(chǎn)量最高，此時更有利于生產(chǎn)S。微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)除碳源外，一般還包括水、氮源和無機(jī)鹽等。12345(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時菌株C不能生長，其原因是

?

?。菌株C缺乏能分解

淀粉的酶，不能分解利用淀粉[解析]

碳源為淀粉時菌株C不能生長，可能是因?yàn)榫闏缺乏能分解淀粉的酶，不能分解利用淀粉。12345(5)利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是

(答出1點(diǎn)即

可)。[解析]

利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，減少環(huán)境污染。減少環(huán)境污染(4)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相

關(guān)實(shí)驗(yàn)。請簡要寫出實(shí)驗(yàn)思路：

?

?

?。分別向一系列含有不同濃度制糖廢液的培養(yǎng)基中

接種等量且適量的菌株C，放在相同且適宜的條件下培養(yǎng)，一段時間后檢測培養(yǎng)液

中S的含量，S含量最高時對應(yīng)的制糖廢液濃度即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度[解析]若要進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適制糖廢液濃度，可分別向一系列含有不同濃度制糖廢液的培養(yǎng)基中接種等量且適量的菌株C，放在相同且適宜的條件下培養(yǎng)，一段時間后檢測培養(yǎng)液中S的含量，S含量最高時對應(yīng)的制糖廢液濃度即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度。12345

一、選擇題1.[2024惠州一調(diào)]微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。下列

相關(guān)敘述正確的是(

A

)A.消毒和滅菌的殺菌程度存在差異B.培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對微生物的生長越有利C.微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物D.操作者要對操作的空間、自己的衣服和手進(jìn)行滅菌A12345678910111213141516171819[解析]消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或者生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部

一部分微生物，滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽

孢和孢子，二者的殺菌程度存在差異，A正確；培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度過高，有

可能使培養(yǎng)的微生物脫水死亡，對微生物的生長不利，B錯誤；由單一個體繁殖所

獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，其中含有代謝廢物，C錯誤；操作者要對操作的

空間、自己的衣服和手進(jìn)行清潔和消毒，將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培

養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌，D錯誤。123456789101112131415161718192.[2024廣東七校第一次聯(lián)考]下列關(guān)于微生物選擇培養(yǎng)的敘述，錯誤的是(

D

)A.用纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基分離獲得纖維素分解菌B.用尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離獲得尿素分解菌C.用缺少有機(jī)碳源的選擇培養(yǎng)基分離獲得自養(yǎng)型微生物D.用含有青霉素的選擇培養(yǎng)基分離獲得酵母菌和細(xì)菌[解析]篩選纖維素分解菌時，需用以纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基，A正確；篩選

尿素分解菌時，需用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基，B正確；自養(yǎng)型微生物可以自

身合成有機(jī)物，培養(yǎng)分離自養(yǎng)型微生物時，培養(yǎng)基中可以不加有機(jī)碳源，C正確；

青霉素是一種抗生素，可以抑制細(xì)菌的生長繁殖，但對真核生物不起作用，故用含

有青霉素的選擇培養(yǎng)基可分離獲得酵母菌，但分離不出細(xì)菌，D錯誤。D123456789101112131415161718193.[2023綏化檢測]如圖為用平板劃線法接種微生物的示意圖，下列說法正確的是

(

B

)A.觀察或比較各種細(xì)菌菌落形態(tài)的最佳區(qū)域是①B.圖中所示的4次劃線后，都應(yīng)將接種環(huán)放在酒精燈上灼燒C.圖中所示的4次劃線前在酒精燈上灼燒的目的相同D.圖中④區(qū)域最可能出現(xiàn)單菌落，①區(qū)域不可能出現(xiàn)單菌落B12345678910111213141516171819[解析]由圖可知，劃線應(yīng)該是從區(qū)域①開始的，隨著在平板上連續(xù)劃線，菌體數(shù)

目越來越少，因此，觀察或比較各種細(xì)菌菌落形態(tài)的最佳區(qū)域是④，A錯誤；圖中

所示的4次劃線后，都應(yīng)將接種環(huán)放在酒精燈上灼燒，其中前三次灼燒的目的是保

證接種環(huán)上的菌種來自上次劃線的末端，而最后一次灼燒的目的是防止菌種污染環(huán)

境和操作者，B正確；圖中所示4次劃線前在酒精燈上灼燒的目的相同，都是滅菌，

C錯誤；當(dāng)菌體稀釋到一定程度后，圖中④區(qū)域最可能出現(xiàn)單菌落，而菌液中菌體

數(shù)目較少時，①區(qū)域也可能出現(xiàn)單菌落，D錯誤。123456789101112131415161718194.[結(jié)合生活實(shí)際/2023成都樹德中學(xué)檢測]為檢測自制冰激凌是否符合國家食品安全

標(biāo)準(zhǔn)，樹德中學(xué)學(xué)生進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測自制冰激凌中的大腸桿菌含量。下列有關(guān)

說法正確的是(

B

)A.培養(yǎng)大腸桿菌時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至弱酸性B.在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落將呈現(xiàn)黑色C.將冰激凌融化后進(jìn)行梯度稀釋，用平板劃線法進(jìn)行接種D.培養(yǎng)結(jié)束統(tǒng)計(jì)到的大腸桿菌的菌落數(shù)即為大腸桿菌的活菌數(shù)B12345678910111213141516171819[解析]大腸桿菌屬于細(xì)菌，培養(yǎng)細(xì)菌時一般需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，

A錯誤；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基通常用于鑒別大腸桿菌，其原理是大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)

生大量的混合酸，菌體帶H＋，故菌落被伊紅(酸性染料)染成紅色，再與美藍(lán)(堿性染

料)結(jié)合呈現(xiàn)黑色，B正確；由題干信息可知，實(shí)驗(yàn)要檢測自制冰激凌中的大腸桿菌

含量，則需要將冰激凌融化后進(jìn)行梯度稀釋，用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，C錯

誤；菌落計(jì)數(shù)時，當(dāng)兩個或多個菌落連在一起時，觀察到的只是一個菌落，故培養(yǎng)

結(jié)束統(tǒng)計(jì)到的大腸桿菌的菌落數(shù)并不一定是大腸桿菌的活菌數(shù)，D錯誤。123456789101112131415161718195.[2024山東聯(lián)考]某生物興趣小組進(jìn)行了“探究不同濃度鏈霉素(一種抗生素)對細(xì)菌

的作用”的實(shí)驗(yàn)。下列說法正確的是(

D

)A.實(shí)驗(yàn)開始前需用鏈霉素處理細(xì)菌，使其產(chǎn)生耐藥性突變B.實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基均可采用干熱滅菌法滅菌C.實(shí)驗(yàn)中抑菌圈直徑越大，說明細(xì)菌的耐藥性越強(qiáng)D.細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)，與細(xì)菌不斷適應(yīng)抗生素環(huán)境有關(guān)D12345678910111213141516171819[解析]細(xì)菌的耐藥性突變發(fā)生在使用鏈霉素之前，用鏈霉素處理細(xì)菌，是為了篩

選出耐藥性的細(xì)菌，A錯誤；實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)皿可用干熱滅菌法滅菌，而培養(yǎng)基采

用高壓蒸汽滅菌法滅菌(濕熱滅菌法)，B錯誤；實(shí)驗(yàn)中抑菌圈直徑越小，說明細(xì)菌的

耐藥性越強(qiáng)，C錯誤；生物進(jìn)化是生物與生物、生物與無機(jī)環(huán)境相互作用的結(jié)果，

細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)，與細(xì)菌不斷適應(yīng)抗生素環(huán)境有關(guān)，D正確。123456789101112131415161718196.[2024贛州模擬]甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三

種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和

丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是(

D

)粉狀硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g(NH4)2SO40.4gH2O100

mLMgSO49.25gCaCl20.5gⅠ＋＋＋＋－＋＋＋Ⅱ＋＋＋－＋＋＋＋Ⅲ＋＋＋＋＋＋＋＋12345678910111213141516171819A.甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B.甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C.甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物D.甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物[解析]

Ⅰ培養(yǎng)基缺少氮源，而甲能在此培養(yǎng)基中正常生長繁殖，說明甲能固氮，屬

于固氮微生物；Ⅱ培養(yǎng)基中缺少碳源，而乙能在此培養(yǎng)基中正常生長繁殖，說明乙

能合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)微生物；Ⅲ是完全培養(yǎng)基，丙在此培養(yǎng)基上才能正常生長

繁殖，在Ⅰ、Ⅱ培養(yǎng)基中不能正常生長繁殖，說明丙是異養(yǎng)微生物，D正確。[答案]

D123456789101112131415161718197.[2024福州一測]某研究小組用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基對新釀米酒中的酵母菌進(jìn)行初步

分離，結(jié)果如圖所示，相關(guān)敘述正確的是(

C

)A.圖a中下一次劃線總是從上一次劃線的首端開始B.配制馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基時，其pH需要調(diào)節(jié)到中性C.浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在火焰上灼燒D.圖a、圖b的方法都可以實(shí)現(xiàn)對酵母菌的分離和計(jì)數(shù)C12345678910111213141516171819[解析]用平板劃線法分離微生物時，下一次劃線應(yīng)該從上一次劃線的末端開始，A

錯誤；酵母菌適合生長在偏酸性的環(huán)境中，對酵母菌進(jìn)行分離時，配制的馬鈴薯瓊

脂培養(yǎng)基的pH需要調(diào)節(jié)到酸性，B錯誤；將涂布器從酒精中取出時，要讓多余的酒

精在燒杯中滴盡，然后放在火焰上灼燒，再繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)規(guī)范操作，C正確；圖a為

用平板劃線法分離微生物得到的結(jié)果，平板劃線法能用于微生物的分離，但不能用

于微生物的計(jì)數(shù)，D錯誤。123456789101112131415161718198.[2023鎮(zhèn)江檢測]下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的描述正確的是(

A

)①分離能分解尿素的細(xì)菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基②對微生物計(jì)數(shù)可以使用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種微生物③鑒定纖維素分解菌時，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果指示劑變紅則能初

步鑒定④在某一濃度下涂布三個平板，若三個平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，且符合計(jì)數(shù)要

求，則以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果⑤進(jìn)行微生物培養(yǎng)時可每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目⑥獲得菌落數(shù)目為30～300的平板就說明實(shí)驗(yàn)操作成功AA.①④⑤B.②③⑥C.②④⑤D.③⑤⑥12345678910111213141516171819[解析]分離能分解尿素的細(xì)菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，①正確；

對微生物計(jì)數(shù)可以使用稀釋涂布平板法接種微生物，平板劃線法接種微生物無法計(jì)

數(shù)，②錯誤；鑒定纖維素分解菌時，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染色劑，而不是酚紅指

示劑，③錯誤；在某一濃度下涂布三個平板，若三個平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，

且符合計(jì)數(shù)要求，則以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果，④正確；進(jìn)行微生物培養(yǎng)時可

每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目，⑤正確；獲得2個或2個以上菌落數(shù)目為30～300的平

板，說明實(shí)驗(yàn)操作比較成功，⑥錯誤。綜上，A符合題意。123456789101112131415161718199.[2023廣東六校聯(lián)考]某興趣小組按如圖所示方法對沒有加工的鮮奶進(jìn)行細(xì)菌檢

測。有關(guān)敘述正確的是(

C

)A.鮮奶常采用濕熱滅菌法進(jìn)行滅菌B.若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌后、培養(yǎng)基凝固前進(jìn)行C.若3個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)分別為35、33、34，則1mL鮮奶中的細(xì)菌數(shù)為3.4×106個D.對鮮奶中的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時，常采用稀釋涂布平板法，用該方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往

比實(shí)際值偏大C12345678910111213141516171819[解析]

常采用巴氏消毒法對鮮奶進(jìn)行消毒，這種消毒方法可以殺死鮮奶中的絕大

多數(shù)微生物，并且不破壞鮮奶的營養(yǎng)成分，A錯誤；若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在

滅菌前進(jìn)行，B錯誤；從圖中可以看出，涂布時吸取0.1mL稀釋液，稀釋倍數(shù)為

104，若3個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)分別為35、33、34，則1mL鮮奶中的細(xì)菌數(shù)為(35＋33

＋34)÷3÷0.1×104＝3.4×106(個)，C正確；使用稀釋涂布平板法對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)

時，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際值偏小，原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上

觀察到的只是一個菌落，D錯誤。1234567891011121314151617181910.[2023漳州檢測]土壤中的解磷菌能分泌磷酸酶或有機(jī)酸，溶解并吸收利用磷酸

鈣。某企業(yè)從土壤中分離純化并發(fā)酵生產(chǎn)解磷菌菌肥，發(fā)酵液中解磷菌濃度達(dá)到

2×108個/mL時發(fā)酵結(jié)束，分裝入庫，投放市場前應(yīng)抽檢活菌濃度。下列敘述正確

的是(

A

)A.從土壤中分離的解磷菌的培養(yǎng)基以磷酸鈣為唯一磷源B.可挑取發(fā)酵液中的單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)C.解磷菌菌肥發(fā)酵生產(chǎn)的中心環(huán)節(jié)是接種及分離提純產(chǎn)物D.抽檢活菌濃度時，取0.1mL發(fā)酵液稀釋104倍后用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)A12345678910111213141516171819[解析]

由題干信息可知，土壤中的解磷菌能分泌磷酸酶或有機(jī)酸，溶解并吸收利

用磷酸鈣，若要從土壤中分離純化并發(fā)酵生產(chǎn)解磷菌菌肥，應(yīng)制作以磷酸鈣為唯一

磷源的培養(yǎng)基，A正確；固體培養(yǎng)基上能形成菌落，液體培養(yǎng)基不能形成菌落，其

能夠用于對菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，B錯誤；發(fā)酵生產(chǎn)一般包括菌種的選育，擴(kuò)大培

養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌，接種，發(fā)酵，產(chǎn)物的分離、提純等方面，其中心環(huán)節(jié)是

發(fā)酵，C錯誤；由題干信息可知，投放市場前需抽檢發(fā)酵液中活菌濃度，而發(fā)酵結(jié)

束時，發(fā)酵液中解磷菌濃度達(dá)到2×108個/mL，取0.1mL發(fā)酵液稀釋104倍后，稀釋

液中解磷菌的濃度為0.2×104個/mL，用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時會因?yàn)榻饬拙粔蚍?/p>

散，影響菌落數(shù)目的統(tǒng)計(jì)，D錯誤。12345678910111213141516171819二、非選擇題11.[結(jié)合生活實(shí)際/2023河南模擬，14分]幽門螺桿菌是一種微厭氧菌，它的侵染是引

發(fā)胃炎的主要原因。胃總是在不停蠕動，里面還有胃酸(pH在1.5左右)，絕大部分的

細(xì)菌都適應(yīng)不了。幽門螺桿菌能產(chǎn)生脲酶，脲酶可將尿素分解成氨和二氧化碳，氨

可以中和胃酸保護(hù)幽門螺桿菌。請回答以下問題：(1)人體的胃可以為幽門螺桿菌的生長繁殖提供水、無機(jī)鹽、

?等營養(yǎng)

物質(zhì)，按功能分類，人體胃中的內(nèi)容物相當(dāng)于

?培養(yǎng)基。碳源、氮源選擇[解析]

幽門螺桿菌是異養(yǎng)型微生物，其生長繁殖需要人體的胃提供水、無機(jī)

鹽、碳源、氮源等；在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻

止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。胃里面含有胃酸，絕大部分的

細(xì)菌都適應(yīng)不了，所以按照功能分類，人體胃中的內(nèi)容物相當(dāng)于選擇培養(yǎng)基。12345678910111213141516171819(2)根據(jù)題干信息可知，若要在體外培養(yǎng)幽門螺桿菌，培養(yǎng)溫度要求是

?

，氧氣條件是

?？稍谔砑恿四蛩氐呐囵B(yǎng)基中加入

?指示劑觀察

菌落周圍是否變紅，對幽門螺桿菌進(jìn)行初步鑒定。37℃左

右無氧酚紅[解析]

人體體溫為37℃左右，幽門螺桿菌是一種微厭氧菌，因此若要在體外培養(yǎng)幽門螺桿菌，培養(yǎng)溫度應(yīng)為37℃左右、氧氣條件應(yīng)為無氧；在添加尿素的培養(yǎng)基中添加酚紅指示劑，當(dāng)幽門螺桿菌將尿素分解成氨后，氨能使酚紅指示劑變紅，若菌落周圍變紅，則可初步鑒定幽門螺桿菌。12345678910111213141516171819(3)有人提取了某胃炎患者家庭的100g剩菜，加入無菌水稀釋至1000mL。取0.1mL

上述稀釋液分別接種到3個適宜的培養(yǎng)基中置于適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，三個平板

上幽門螺桿菌菌落數(shù)均為30～300且相差不大，求平均值得到菌落數(shù)為

A

。實(shí)驗(yàn)過程

中，接種方法一般為

?，由實(shí)驗(yàn)可知，每克剩菜中幽門螺桿菌的

數(shù)量為

?個。稀釋涂布平板法A

×102

[解析]

由題意可知，該實(shí)驗(yàn)采用的接種方法是稀釋涂布平板法；將100g剩菜加入無菌水稀釋至1000mL，則稀釋倍數(shù)為10，涂布所用的稀釋液的體積為0.1mL，因此每克剩菜中幽門螺桿菌的數(shù)量為

A

/0.1×10＝

A

×102(個)。12345678910111213141516171819

一、選擇題12.[結(jié)合日常生活/2023遼寧]細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌

形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細(xì)菌氣溶膠

的濃度(菌落數(shù)/m3)。下列敘述錯誤的是(

D

)A.采樣前需對空氣微生物采樣器進(jìn)行無菌處理B.細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時需將平板倒置C.同一稀釋度下至少對3個平板計(jì)數(shù)并取平均值D.稀釋涂布平板法檢測的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高D12345678910111213141516171819[解析]

為防止雜菌污染，接種前需要對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行

滅菌，對實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒，A正確；純化培養(yǎng)時，為防止污染培養(yǎng)

基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；微生物計(jì)數(shù)時

在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對3個菌落數(shù)目在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)

結(jié)果取平均值，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；使用稀釋涂布平板法對微生物

計(jì)數(shù)時，結(jié)果往往偏小，原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上只能

觀察到一個菌落，D錯誤。1234567891011121314151617181913.[2023菏澤模擬]北京冬奧會的食堂讓各國運(yùn)動健兒愛上中國味道，其餐余垃圾在

垃圾集中點(diǎn)采用生化＋霧化＋膜過濾技術(shù)處理后，可以達(dá)到無二次污染的標(biāo)準(zhǔn)。為

篩選對抗生素有抗性且能高效降解淀粉的微生物，提高“生化”處理的效率，研究

人員將餐余垃圾機(jī)械化處理后加入裝有無菌水的錐形瓶中制備餐余垃圾浸出液，然

后進(jìn)行如圖所示操作，下列說法錯誤的是(

A

)A.在接種前通常需要對餐余垃圾浸出液進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X培養(yǎng)基上C.X培養(yǎng)基含有淀粉和抗生素，Y培養(yǎng)基是不含瓊脂的液體培養(yǎng)基D.圖中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類型A12345678910111213141516171819[解析]

在接種前對餐余垃圾浸出液進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，會將其中的微生物殺死，

而不能獲得目標(biāo)微生物，A錯誤。根據(jù)圖示分析，應(yīng)采用稀釋涂布平板法將餐余垃

圾浸出液接種在X培養(yǎng)基上，以獲得單菌落，B正確。該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選對抗生素

有抗性且能高效降解淀粉的微生物，故圖中X培養(yǎng)基應(yīng)該是以淀粉為唯一碳源且添

加抗生素的選擇培養(yǎng)基；Y培養(yǎng)基是用于擴(kuò)大培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，其不含瓊脂，C正

確。淀粉遇碘變藍(lán)，加入碘液后，培養(yǎng)基上能夠降解淀粉的菌落周圍出現(xiàn)透明圈，

圖中透明圈最大的菌落是⑤，說明其降解淀粉的效果最好；不同微生物形成的菌落

特征不同，可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。1234567891011121314151617181914.[2024貴陽模擬]某研究小組進(jìn)行了土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)，操

作流程如圖所示。下列敘述錯誤的是(

D

)A.需要配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基并用濕熱滅菌法滅菌B.甲平板上的一個單菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌C.上述實(shí)驗(yàn)中制備3個平板可避免偶然因素導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差D.5號試管的計(jì)數(shù)結(jié)果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為1.7×107個D12345678910111213141516171819[解析]

分離土壤中分解尿素的細(xì)菌時，應(yīng)選用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)

基，并采用高壓蒸汽滅菌法(濕熱滅菌法)滅菌，A正確；當(dāng)樣品的稀釋度足夠

高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，B正

確；進(jìn)行多個重復(fù)實(shí)驗(yàn)的目的是避免偶然因素導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，C正確；由題

圖可知，稀釋倍數(shù)為106，涂布液的體積為0.1mL，平均菌落數(shù)為(168＋175＋

167)÷3＝170(個)，故5號試管的計(jì)數(shù)結(jié)果表明，每克土壤中的活菌數(shù)約為

170÷0.1×106＝1.7×109(個)，D錯誤。1234567891011121314151617181915.[2023成都模擬]如圖所示，科研人員利用誘變方式選育可高產(chǎn)β－胡蘿卜素的三

孢布拉氏霉菌。未突變菌不能在含有β－紫羅酮的培養(yǎng)基上生長。隨β－胡蘿卜素含

量增加，菌體顏色從黃色加深至橙紅色。圖甲為選育菌種及獲得β－胡蘿卜素的流

程，以下相關(guān)敘述錯誤的是(

B

)A.要得到圖乙所示的菌落，可用稀釋涂布平板法進(jìn)行②操作，然后將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)B.經(jīng)過程①紫外線照射的三孢布拉氏霉菌都能在含β－紫羅酮的鑒別培養(yǎng)基上生長C.進(jìn)行③操作時，應(yīng)選擇較大的橙紅色菌落中的菌株繼續(xù)接種培養(yǎng)，目的是純化菌株D.在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，需要對試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等進(jìn)行干熱滅菌B12345678910111213141516171819[解析]圖乙中的菌落均勻分布于平板上，說明②操作(接種)的方法是稀釋涂布平板

法，A正確；過程①紫外線照射的作用是利用物理因素誘導(dǎo)三孢布拉氏霉菌發(fā)生基

因突變，由于突變具有不定向性和低頻性，因此被照射的三孢布拉氏霉菌不一定都

能在含β－紫羅酮的鑒別培養(yǎng)基上生長，B錯誤；橙紅色的菌體為β－胡蘿卜素高產(chǎn)

菌，進(jìn)行③操作時，應(yīng)選擇較大的橙紅色菌落中的菌株繼續(xù)接種培養(yǎng)，C正確；在

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，需要對試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等進(jìn)行干熱滅菌，D正確。1234567891011121314151617181916.[2023邢臺檢測，多選]為測定某種大腸桿菌對糖類的需求情況，某興趣小組配制

了如下培養(yǎng)基：成分NaClK