一種快速測定醬油和醋中對羥基苯甲酸酯的方法對羥基苯甲酸酯又稱羥苯甲酯或尼泊金酯，因其存在酚羥基結(jié)構(gòu)，可破壞細胞膜，使細胞內(nèi)的蛋微生物的酶系統(tǒng)活性，造成微生物的新陳代謝白色、無味，不會影響產(chǎn)品的色澤和風味，在人本東京都衛(wèi)生研究所報道，即使微量攝入對羥基苯甲酸丁酯，也會造成實驗大鼠精子數(shù)量和濃度的顯鼠生殖系統(tǒng)造成不良影響[4];2008年，DARBRE等[5]的研究發(fā)現(xiàn)，對羥基苯甲酸酯具有雌激素和抗雄激素活性，不僅會影響男性生殖功能，還有可能增加乳腺癌的發(fā)病率；2012年，SUGANDH女性患乳腺癌的風險。對羥基苯甲酸酯的激素活性被越來越多的人所重視，在食品工業(yè)中的應用也受到了一定的限制。目前，我國要求醬油、醋中對羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽(以對羥基苯甲酸計)最大使用量均為0.25g-kg-1[7],食樣品前處理方法，該方法前處理工作操作簡單1.1材料與試劑4種對羥基苯甲酸酯類混合標準溶液(1000mg·L-1):購自國家標物中心；乙酸乙酯：HPLC級，德國Merk公1.3方法飽和NaCl的飽和NaHCO3溶液：在飽和NaHCO3溶1.3.2樣品前處理稱取5g(精確至0.001g)均勻樣品于50mL離心管中，加入10mL乙酸乙酯，振搖3min后，5000r·min-1離心5min,取上清液于新的50mL離心管中，加入10mL飽和NaCI的飽和NaHCO3溶液，振搖3min后，50001.3.3色譜條件進樣口溫度：250℃;進樣模式：不分流；進樣體積：1μL。程序升溫：100℃保持1min;20℃min-1升溫至170℃;12℃·min-1升溫至220℃,保持1min;10℃·min-1升溫至250℃,保持8min。2.1鹽酸酸化步驟的去除在樣品前處理過程中加入1:1鹽酸1mL對樣品進行酸化，可以將對羥基苯甲酸的鈉鹽酸化為對羥基苯甲酸，但是對羥基苯甲酸的沸點為336.2℃,不易被汽化，需經(jīng)甲酯化后方能使用氣相色譜法由于對羥基苯甲酸的酸度比碳酸強，使用飽和碳酸氫鈉洗對羥基苯甲酸鈉鹽，因此原方法中加入1:1鹽酸1mL對樣品進行酸化，對檢測結(jié)果無影響。本文使用含有對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸乙酯的醬油樣品就是否需要酸化樣品進行了6個平行樣的對比，結(jié)果如表1所示。在樣品前處理過程中加入1:1鹽酸對樣品酸化和不進行酸化，測定結(jié)果無顯著差異。另外，考慮到節(jié)儉、環(huán)保的要求，本文方2.2萃取試劑的選擇在實驗用水和18%的NaCl溶液(模擬醬油的含鹽量)中加入終濃度均為10mg·L-1的4種對羥基苯甲酸酯類，按1.3.2的操作經(jīng)離心、氮吹、復溶、過膜后測定，結(jié)果如圖1所示，用乙醚和乙酸乙酯提取實驗用水中的對羥基苯甲酸酯類，上機檢測，采用乙酸乙酯萃取時，4種對羥基苯甲酸酯的加標回收率基本在105%左右，明顯優(yōu)于乙醚；用乙醚、乙酸乙酯和乙腈提取18%NaCI溶液中的對羥基苯甲酸酯類，使用乙酸乙酯萃取時，4種對羥基苯甲酸酯的加標回收率基本在100%～105%,整體上優(yōu)于乙醚和乙腈。因此，最終選擇乙酸乙酯作為萃取試劑。乙酸乙酯提取18%NaCl溶液中對羥基苯甲酸酯類的回收率相對提取實驗用水的回收率偏低，可能是由于乙酸乙酯在實驗用水和18%NaCI溶液中的溶解度不同，溶于實驗用水中的乙酸乙酯相對NaCl溶液更多一些，造成乙酸乙酯2.3凈化溶劑的選擇在5g醬油樣品中加入10mg4種對羥基苯甲酸酯的標準物質(zhì)，使用乙酸乙酯提取，分別采用20mL10g·L-1的NaHCO3溶液、20mL飽和NaCl溶液、10mL飽和NaCI溶液+10mL10g-L-1NaHCO3溶液、10mL的NaHCO3溶液、10mL飽和NaCl溶液、5mL飽和NaCI溶液+5mL10g-L-1NaHCO3溶液對提取液進行凈化。實驗過程中發(fā)現(xiàn)，提取液經(jīng)含有NaHCO3的溶液凈化后，有機層中的深色雜質(zhì)會轉(zhuǎn)移至水相中；若凈化液中無NaHCO3,深顏色的雜質(zhì)仍留存在有機層中，說明NaHCO3對提取液中的深色雜質(zhì)含有NaHCO3。凈化后的有機層，按1.3.2的操作氮吹、復溶、過膜后測定，結(jié)果如圖2所示。使用20mL10g-L-1的NaHCO3溶液凈化提取液后，4種對羥基苯甲酸酯的加標回收率大多高于110%,對羥基苯甲酸乙酯的加標回收率的NaHCO3溶液凈化，凈化溶液濃度相同，加入的體積不同導致加標回收率明顯差異，再次驗證了乙酸乙酯在水溶液中的溶解量增加，會導致加標回收率的上升。同理，對比20mL飽和NaCI溶液和10mL飽和NaCl溶液凈化后的加標回收率，對比10mL飽和NaCl溶液+10mL10g·L-1NaHCO3溶液和5mL飽和NaCl溶液+5mL10g-L-1NaHCO3圖2不同凈化溶液的對羥基苯甲酸酯類回收率圖前期的實驗已經(jīng)證明NaHCO3對去除提取液中雜質(zhì)具有重要的作用，而且凈化溶液的使用量會影響實驗的最終結(jié)溶液，飽和NaHCO3的飽和NaCl溶液，飽和NaCl的10g·L-1NaHCO3溶液的凈化效果。分別取10mL凈化溶液凈化10mL提取液，提取液中的深色雜質(zhì)都能轉(zhuǎn)移至水相中。通過圖3的加標回收率比較，采用飽和NaCI的飽和NaHCO3溶液凈化后，4種對羥基苯甲酸酯的綜合回收率相對更優(yōu)。2.5討論圖3不同凈化溶液的對羥基苯甲酸酯類回收率圖mg·L-1和300mg-L-1進行測試，分別以4種對羥基苯甲酸酯類的峰面積A為縱坐標，以質(zhì)量濃度p(mg·L-1)為橫坐標繪制標準曲線，詳見表2。表24種目標物的線性關系、相關系數(shù)表在未檢出對羥基苯甲酸酯類的醬油樣品和醋樣品中，分別添加6平行的0.6mg-kg-1(GB5009.31—2016的檢出4種目標物在不同添加水平的回收率基本在70%～120%,相對標準偏差在0.90%~7.06%,表明該方法的準確度和精密度均較好。按照國標方法檢出限水平添加，表3方法回收率和精密度實驗表(n=6)本文樣品前處理方法可以準確、快速高效、經(jīng)濟環(huán)保地測定醬油、醋中的對羥基苯甲酸酯類，時間約30min,批量樣品的前處理時間與單個樣品