微生物生長(zhǎng)檢測(cè)方法微生物生長(zhǎng)繁殖是其在內(nèi)外多種環(huán)境原因相互作用下綜合反應(yīng)。所以生長(zhǎng)繁殖情況就可作為研究多種生理生化和遺傳等問題關(guān)鍵指標(biāo),同時(shí),微生物在生產(chǎn)實(shí)踐上多種應(yīng)用或是對(duì)致病,霉腐微生物防治都和她們生長(zhǎng)抑制緊密相關(guān)。所以有必需介紹一下微生物生長(zhǎng)情況檢測(cè)方法。既然生長(zhǎng)意味著原生質(zhì)含量增加,所以測(cè)定方法也都直接或間接以次為依據(jù),而測(cè)定繁殖則都要建立在計(jì)數(shù)這一基礎(chǔ)上。微生物生長(zhǎng)衡量,能夠從其重量,體積,密度,濃度,做指標(biāo)來進(jìn)行衡量。生長(zhǎng)量測(cè)定法體積測(cè)量法(又稱測(cè)菌絲濃度法)經(jīng)過測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲量來反應(yīng)微生物生長(zhǎng)情況.方法是,取一定量待測(cè)培養(yǎng)液(如10毫升)放在有刻度離心管中,設(shè)定一定離心時(shí)間(如5分鐘)和轉(zhuǎn)速(如5000rpm),離心后,倒出上清夜,測(cè)出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測(cè)定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)一個(gè)關(guān)鍵監(jiān)測(cè)指標(biāo).這種方法比較粗放,簡(jiǎn)便,快速,但需要設(shè)定一致處理?xiàng)l件,不然偏差很大,因?yàn)殡x心沉淀物中夾雜有部分固體營(yíng)養(yǎng)物,結(jié)果會(huì)有一定偏差。稱干重法可用離心或過濾法測(cè)定。通常干重為濕重10-20%。在離心法中,將一定體積待測(cè)培養(yǎng)液倒入離心管中,設(shè)定一定離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速,進(jìn)行離心,并用清水離心洗滌1-5次,進(jìn)行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干,或采取紅外線烘干,也可在80℃或40℃下真空干燥,干燥后稱重.如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾后用少許水洗滌,在40℃下進(jìn)行真空干燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取微生物產(chǎn)品為菌體時(shí),常采取這種方法,如活性干酵母,部分以微生物菌體為活性物質(zhì)飼料和肥料。比濁法微生物生長(zhǎng)引發(fā)培養(yǎng)物混濁度增高。經(jīng)過紫外分光光度計(jì)測(cè)定一定波長(zhǎng)下吸光值,判定微生物生長(zhǎng)情況。對(duì)某一培養(yǎng)物內(nèi)菌體生長(zhǎng)作定時(shí)跟蹤時(shí),可采取一個(gè)特制有側(cè)臂三角燒瓶。將側(cè)臂插入光電比色計(jì)比色座孔中,即可隨時(shí)測(cè)定其生長(zhǎng)情況,而無須取菌液.該法關(guān)鍵用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)。菌絲長(zhǎng)度測(cè)量法對(duì)于絲狀真菌和部分放線菌,能夠在培養(yǎng)基上測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度,或是利用一只一端開口并帶有刻度細(xì)玻璃管,到入適宜培養(yǎng)基,臥放,在開口一端接種微生物,一段時(shí)間后統(tǒng)計(jì)其菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度,借此衡量絲狀微生物生長(zhǎng)。微生物計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板法血球計(jì)數(shù)板是一個(gè)有尤其結(jié)構(gòu)刻度和厚度厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,中央有一短橫溝和兩個(gè)平臺(tái),兩嵴表比兩平臺(tái)表面高0.1mm,每個(gè)平臺(tái)上刻有不一樣規(guī)格格網(wǎng),中央0.1mm2面積上刻有400個(gè)小方格.經(jīng)過油鏡觀察,統(tǒng)計(jì)一定大格內(nèi)微生物數(shù)量,即可算出1毫升菌液中所含菌體數(shù).這種方法簡(jiǎn)便,直觀,快捷,但只適宜于單細(xì)胞狀態(tài)微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生孢子進(jìn)行計(jì)數(shù),而且所得結(jié)果是包含死細(xì)胞在內(nèi)總菌數(shù)。染色計(jì)數(shù)法為了填補(bǔ)部分微生物在油鏡下不易觀察計(jì)數(shù),而直接用血球計(jì)數(shù)板法又無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞不足,大家發(fā)明了染色計(jì)數(shù)法.借助不一樣染料對(duì)菌體進(jìn)行合適染色,能夠更方便在顯微鏡下進(jìn)行活菌計(jì)數(shù).如酵母活細(xì)胞計(jì)數(shù)可用美藍(lán)染色液,染色后在顯微鏡下觀察,活細(xì)胞為無色,而死細(xì)胞為藍(lán)色。百分比計(jì)數(shù)法將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度菌液按一定百分比均勻混合,在顯微鏡視野中數(shù)出各自數(shù)目,即可得未知菌液細(xì)胞濃度。這種計(jì)數(shù)方法比較粗放.而且需要配制已知顆粒濃度懸液做標(biāo)準(zhǔn)。液體稀釋法對(duì)未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋,依據(jù)估量數(shù),從最適宜三個(gè)連續(xù)10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液試管中,經(jīng)培養(yǎng)后統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)試管數(shù),然后查最大或然數(shù)表MPN得出菌樣含菌數(shù),依據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出活菌含量.該法常見于食品中微生物檢測(cè),比如飲用水和牛奶微生物限量檢驗(yàn)。平板菌落計(jì)數(shù)法這是一個(gè)最常見活菌計(jì)數(shù)法。將待測(cè)菌液進(jìn)行梯度稀釋,取一定體積稀釋菌液與適宜固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合,或?qū)⒕和坎加谝涯坦腆w培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后,用平板上出現(xiàn)菌落數(shù)乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液含菌數(shù)。通常以直徑9cm平板上出現(xiàn)50-500個(gè)菌落為宜,但方法比較麻煩,操作者需有熟練技術(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法不僅能夠得出菌液中活菌含菌數(shù),而且同時(shí)將菌液中細(xì)菌進(jìn)行了一次分離培養(yǎng),取得了單克隆。試劑紙法在平板計(jì)數(shù)法基礎(chǔ)上,發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計(jì)數(shù)用.形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有適宜培養(yǎng)基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無色)待蘸取測(cè)試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)一定密度玫瑰色微小菌落與標(biāo)準(zhǔn)紙色板上圖譜比較即可估算出樣品含菌量。試劑紙法計(jì)數(shù)快捷正確,相比而言避免了平板計(jì)數(shù)法人為操作誤差。膜過濾法用特殊濾膜過濾一定體積含菌樣品,經(jīng)丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光,活細(xì)胞會(huì)發(fā)橙色熒光,而死細(xì)胞則發(fā)綠色熒光。生理指標(biāo)法微生物生長(zhǎng)伴伴隨一系列生理指標(biāo)發(fā)生改變,比如酸堿度,發(fā)酵液中含氮量,含糖量,產(chǎn)氣量等,與生長(zhǎng)量相平行生理指標(biāo)很多,它們可作為生長(zhǎng)測(cè)定相對(duì)值。測(cè)定含氮量大多數(shù)細(xì)菌含氮量為干重12.5%,酵母為7.5%,霉菌為6.0%.依據(jù)含氮量×6.25,即可測(cè)定粗蛋白含量.含氮量測(cè)定方法有很多,如用硫酸,過氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas測(cè)N2氣法.Dumas測(cè)N2氣法是將樣品與CuO混合,在CO2氣流中加熱后產(chǎn)生氮?dú)?搜集在呼吸計(jì)中,用KOH吸去CO2后即可測(cè)出N2量。測(cè)定含碳量將少許(干重0.2-2.0mg)生物材料混入1毫升水或無機(jī)緩沖液中,用2毫升2%K2Cr2O7溶液在1000C下加熱30分鐘后冷卻.加水稀釋至5毫升,在580nm波長(zhǎng)下讀取吸光光度值,即可推算出生長(zhǎng)量.需用試劑做空白對(duì)照,用標(biāo)準(zhǔn)樣品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。還原糖測(cè)定法還原糖通常是指單糖或寡糖,能夠被微生物直接利用,經(jīng)過還原糖測(cè)定可間接反應(yīng)微生物生長(zhǎng)情況,常見于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)常規(guī)監(jiān)測(cè).方法是,離心發(fā)酵液,取上清液,加入斐林試劑,沸水浴煮沸3分鐘,取出加少許鹽酸酸化,加入Na2S2O3臨近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉溶液,繼續(xù)加Na2S2O3至終點(diǎn),查表讀出還原糖含量。氨基氮測(cè)定方法是:離心發(fā)酵液,取上清液,加入甲基紅和鹽酸作指示劑,加入0.02NNaOH調(diào)色至顏色剛剛褪去,加入底物18%中性甲醛,反應(yīng)數(shù)刻,加入0.02N使之變色,依據(jù)NaOH用量折算出氨基氮含量.依據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮含量,可間接反應(yīng)微生物生長(zhǎng)情況。其她生理物質(zhì)測(cè)定P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙酰胞壁酸)等含量以及產(chǎn)酸,產(chǎn)氣,產(chǎn)CO2(用標(biāo)識(shí)葡萄糖做基質(zhì)),耗氧,黏度,產(chǎn)熱等指標(biāo),都可用于生長(zhǎng)量測(cè)定.也能夠依據(jù)反應(yīng)前后基質(zhì)濃度改變,最終產(chǎn)氣量,微生物活性三方面測(cè)定反應(yīng)微生物生長(zhǎng)。商業(yè)化微生物快速檢測(cè)法微生物檢測(cè),其發(fā)展方向是快速,正確,簡(jiǎn)便,自動(dòng)化,目前很多生物制品企業(yè)利用傳統(tǒng)微生物檢測(cè)原理,結(jié)合不一樣檢測(cè)方法,設(shè)計(jì)了形式各異微生物檢測(cè)儀器設(shè)備,正逐步廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)微生物檢測(cè)和科學(xué)研究領(lǐng)域。1、抗干擾培養(yǎng)基和微生物數(shù)量快速檢測(cè)技術(shù)結(jié)合處理了傳統(tǒng)微生物檢測(cè)手段不能處理難題,為建立一套完整抗干擾微生物檢測(cè)系統(tǒng)奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。環(huán)凱提供抗干擾微生物培養(yǎng)基,新型生化判定管,微生物計(jì)數(shù)卡,環(huán)境質(zhì)量檢測(cè)試劑盒等,可方便用于多項(xiàng)檢測(cè)。2、Smartcounte