ICS?FORMTEXT點擊此處添加ICS號FORMTEXT點擊此處添加中國標準文獻分類號FORMTEXT?????DBFORMTEXT??DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的檢測量子點微球熒光免疫層析法FORMTEXTDeterminationofaflatoxinB1,zearalenoneanddeoxynivalenolingrainQuantumdotmicrospherelateralflowimmunoassayFORMTEXT點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識FORMDROPDOWNFORMTEXT?????FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT????????發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXX前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設備 27試樣制備 28檢測步驟 39結果表述 310其他 4前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江西省市場監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學、江西省市場監(jiān)督管理局、江西省檢驗檢測認證總院、江西維邦生物科技有限公司本文件主要起草人：糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的檢測量子點微球熒光免疫層析法范圍本文件規(guī)定了糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的量子點微球熒光免疫層析檢測方法。本文件適用于大米、糙米、玉米、小麥等糧食及其制品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的快速檢測。本方法檢測黃曲霉毒素B1的檢出限為1μg/kg，定量限為2μg/kg；檢測玉米赤霉烯酮的檢出限為10μg/kg，定量限為20μg/kg；檢測嘔吐毒素的檢出限為50μg/kg，定量限為150μg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2761食品安全國家標準食品中真菌毒素限量GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27417合格評定化學分析方法確認和驗證指南術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理本方法以量子點微球為熒光標記物，基于競爭抑制免疫層析技術原理，通過熒光信號讀取儀進行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設定的標準曲線計算樣品中待測物質的含量，對黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素進行半定量或定量檢測。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純水：應符合GB/T6682，二級水。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素標準物質：純度≥99％，或經(jīng)國家認證并授予標準物質證書的標準物質。乙腈（C2H3N）。氯化鈉（NaCl）。氯化鉀（KCl）。磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。樣品提取液（84％乙腈-水溶液）：吸取84mL乙腈（5.3），用水（5.1）定容至100mL，混勻。樣品稀釋液：分別稱取氯化鈉（5.4）8g、氯化鉀（5.5）0.2g、磷酸氫二鈉（5.6）1.44g、磷酸二氫鉀（5.7）0.2g于1000mL燒杯中，加水（5.1）充分攪拌溶解后定容至1000mL。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素標準品儲存液（1g/L）：準確稱取真菌毒素（5.2）0.01g（精確至0.0001g），用甲醇（5.3）溶解定容至10mL。-20℃冷凍避光保存，有效期12個月。儀器和設備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：量程為20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉速≥2500r/min。恒溫孵育器：設定溫度誤差不超過±1度。熒光免疫分析儀：激發(fā)波長為360±5nm，發(fā)射波長為610±5nm。離心機：轉速≥4000r/min。離心管：1.5mL和50mL。分樣篩：20目。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素量子點微球熒光免疫層析快速檢測卡（含ID卡，內設對應批次標準曲線）。試樣制備分樣和粉碎將原始樣品充分混勻，按照GB/T5491方法中的四分樣方法進行分樣，用粉碎機粉碎后過20目分樣篩。試樣前處理稱取5±0.05g粉碎樣品于50mL離心管中，加入25mL樣品提取液（5.8），漩渦震蕩混勻2min，4000rpm離心2min或靜置2分鐘（無離心機情況下）。檢測黃曲霉毒素B1：取50μL離心后上清液加入950μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測。檢測玉米赤霉烯酮：取50μL離心后上清液加入700μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測。檢測嘔吐毒素：取50μL離心后上清液加入700μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測。注：不同廠家檢測卡所用的樣品前處理方法可能不同，應按照產品使用說明中規(guī)定方法進行操作。檢測步驟測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號是否匹配后插入ID卡，在儀器測試界面點擊“讀ID卡/讀項目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點擊“確認”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開機，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在半小時內使用。將檢測卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于檢測卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應10min。反應時間結束后立即將檢測卡插入讀取儀中，點擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結果，15min后測試無效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設置可能不同，應按照儀器使用說明中規(guī)定方法進行。結果表述樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的含量由熒光分析儀自動計算并顯示，單位為微克/千克（μg/kg）。其他本方法參比標準為GB5009.209《食品安全國家標準食品中玉米赤霉烯酮的測定》和GB5009.111《食品安全國家標準食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y定》。注：性能指標計算方法見附錄A。附錄A（資料性）產品性能指標計算A.1檢出限和定量限通過對20個獨立的空白樣品進行測定，檢出限以空白樣品20次測定結果的均值加3倍標準偏差計算；定量限以空白樣品20次測定結果的均值加10倍標準偏差計算。A.2準確度綜合考慮目標分析物國家標準限量值或禁用目標分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個濃度水平的盲樣，每個濃度水平進行至少6次重復實驗。三個濃度水平的平均加標回收率均應在70-130%（需討論確定）。A.3重復性采用三批驗證產品進行檢測，每批至少6次重復測定中等濃度水平的樣品，相對標準偏差（RSD）應小于15%。A.4特異性目標分析物及其結構類似物的標準品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標準曲線，得出IC5