醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)與技術(shù)操作作業(yè)指導(dǎo)書TOC\o"1-2"\h\u26199第一章實(shí)驗(yàn)室基本規(guī)范與要求 3104231.1實(shí)驗(yàn)室安全常識(shí) 3190421.1.1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 3292961.1.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 4155611.1.3實(shí)驗(yàn)操作 464351.1.4實(shí)驗(yàn)室處理 423281.2實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理 4175661.2.1設(shè)備采購(gòu) 4247191.2.2設(shè)備驗(yàn)收與安裝 438761.2.3設(shè)備使用與維護(hù) 4292781.2.4設(shè)備報(bào)修與報(bào)廢 4228371.3實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生與環(huán)境保護(hù) 468601.3.1實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生 5155191.3.2環(huán)境保護(hù) 521911.3.3實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理 58436第二章實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備操作 5291462.1微量移液器操作規(guī)范 5176262.1.1準(zhǔn)備工作 5324962.1.2移液操作 5273572.1.3移液器清洗與保養(yǎng) 5323162.2離心機(jī)操作與維護(hù) 534822.2.1準(zhǔn)備工作 5220802.2.2離心操作 6241932.2.3離心機(jī)維護(hù) 630282.3顯微鏡使用與保養(yǎng) 6111442.3.1準(zhǔn)備工作 6101282.3.2顯微鏡使用 6275172.3.3顯微鏡保養(yǎng) 623382第三章樣品處理與保存 6281213.1樣品采集與運(yùn)輸 644373.1.1樣品采集 6210613.1.2樣品運(yùn)輸 761413.2樣品保存與儲(chǔ)存 7197583.2.1樣品保存 7314203.2.2樣品儲(chǔ)存 7107843.3樣品處理方法 8218853.3.1樣品預(yù)處理 8168253.3.2樣品分離 885093.3.3樣品檢測(cè) 82164第四章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 8108084.1DNA提取與純化 8175704.1.1實(shí)驗(yàn)原理 893314.1.2實(shí)驗(yàn)材料 8115884.1.3實(shí)驗(yàn)步驟 9147724.2RNA提取與純化 91694.2.1實(shí)驗(yàn)原理 910674.2.2實(shí)驗(yàn)材料 9227754.2.3實(shí)驗(yàn)步驟 10172294.3PCR實(shí)驗(yàn)操作 10302204.3.1實(shí)驗(yàn)原理 10175954.3.2實(shí)驗(yàn)材料 10121234.3.3實(shí)驗(yàn)步驟 102343第五章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1155475.1蛋白質(zhì)定量測(cè)定 11116695.1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?11194335.1.2實(shí)驗(yàn)原理 1190635.1.3實(shí)驗(yàn)材料 1159945.1.4實(shí)驗(yàn)步驟 11220435.2酶活性測(cè)定 11274675.2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1150275.2.2實(shí)驗(yàn)原理 1240555.2.3實(shí)驗(yàn)材料 12298775.2.4實(shí)驗(yàn)步驟 12199955.3電泳技術(shù) 12114145.3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1223175.3.2實(shí)驗(yàn)原理 1292495.3.3實(shí)驗(yàn)材料 12145745.3.4實(shí)驗(yàn)步驟 128729第六章細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1389206.1細(xì)胞培養(yǎng)與傳代 1348756.1.1細(xì)胞培養(yǎng) 13137136.1.2細(xì)胞傳代 13218396.2細(xì)胞染色與觀察 13322816.2.1細(xì)胞染色 13209586.2.2細(xì)胞觀察 14311226.3細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè) 14125756.3.1細(xì)胞計(jì)數(shù) 14305726.3.2細(xì)胞活力檢測(cè) 1413017第七章免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1456347.1抗體制備與純化 14109837.1.1抗體制備 14299617.1.2抗體純化 15287737.2ELISA實(shí)驗(yàn)操作 16216267.2.1實(shí)驗(yàn)原理 16152147.2.2實(shí)驗(yàn)步驟 16194327.3免疫組化實(shí)驗(yàn) 1634947.3.1實(shí)驗(yàn)原理 17259487.3.2實(shí)驗(yàn)步驟 1725627第八章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 18418.1藥物制備與儲(chǔ)存 1895528.1.1藥物制備 18172438.1.2藥物儲(chǔ)存 1852218.2藥物劑量與給藥方法 18257788.2.1藥物劑量 1868448.2.2給藥方法 19287348.3藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 19907第九章生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 19240909.1生理參數(shù)測(cè)量 19248919.1.1測(cè)量設(shè)備的選擇 19283849.1.2生理參數(shù)的測(cè)量方法 20211259.1.3生理參數(shù)測(cè)量的注意事項(xiàng) 20196549.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作 20198829.2.1動(dòng)物選擇與飼養(yǎng) 2078049.2.2動(dòng)物麻醉與手術(shù) 2026189.2.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng) 20251699.3生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 2097989.3.1數(shù)據(jù)收集與整理 20233359.3.2數(shù)據(jù)分析方法 20189319.3.3數(shù)據(jù)處理的注意事項(xiàng) 2126161第十章實(shí)驗(yàn)室信息管理與數(shù)據(jù)分析 212579410.1實(shí)驗(yàn)室信息管理軟件使用 21195010.1.1軟件概述 211486410.1.2軟件功能 211167210.1.3使用方法 212421510.2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與整理 222566610.2.1數(shù)據(jù)收集 22588210.2.2數(shù)據(jù)整理 221909710.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與報(bào)告撰寫 221833210.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 222236910.3.2報(bào)告撰寫 22第一章實(shí)驗(yàn)室基本規(guī)范與要求1.1實(shí)驗(yàn)室安全常識(shí)實(shí)驗(yàn)室安全是實(shí)驗(yàn)工作的基礎(chǔ)，以下是實(shí)驗(yàn)室安全常識(shí)的基本要求：1.1.1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)充分了解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、方法和操作步驟，掌握實(shí)驗(yàn)中所涉及的危險(xiǎn)化學(xué)品、生物材料和儀器設(shè)備的安全使用方法。1.1.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持整潔、有序，不得亂放雜物。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、飲食，不得私拉亂接電源、氣源。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)配備必要的消防器材和急救箱。1.1.3實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行，不得擅自更改。操作時(shí)應(yīng)穿戴合適的實(shí)驗(yàn)服、手套和護(hù)目鏡等防護(hù)用品。對(duì)于易燃、易爆、有毒、腐蝕性強(qiáng)的化學(xué)品，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩胧?.1.4實(shí)驗(yàn)室處理實(shí)驗(yàn)過程中如發(fā)生，應(yīng)立即采取緊急措施，如切斷電源、氣源，使用消防器材等。同時(shí)及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和相關(guān)部門。1.2實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理是保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要環(huán)節(jié)，以下為實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理的基本要求：1.2.1設(shè)備采購(gòu)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，合理采購(gòu)實(shí)驗(yàn)設(shè)備。設(shè)備采購(gòu)應(yīng)遵循性價(jià)比、安全可靠、易于維護(hù)的原則。1.2.2設(shè)備驗(yàn)收與安裝設(shè)備到貨后，應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)收，保證設(shè)備符合技術(shù)指標(biāo)。設(shè)備安裝應(yīng)由專業(yè)人員進(jìn)行，并按照說明書進(jìn)行調(diào)試。1.2.3設(shè)備使用與維護(hù)實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟練掌握設(shè)備操作方法，按照操作規(guī)程使用設(shè)備。定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，保證設(shè)備正常運(yùn)行。1.2.4設(shè)備報(bào)修與報(bào)廢設(shè)備出現(xiàn)故障時(shí)，應(yīng)及時(shí)報(bào)修。對(duì)于無法修復(fù)或嚴(yán)重?fù)p壞的設(shè)備，應(yīng)按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行報(bào)廢處理。1.3實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生與環(huán)境保護(hù)實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生與環(huán)境保護(hù)是實(shí)驗(yàn)室正常運(yùn)行的重要保障，以下為實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生與環(huán)境保護(hù)的基本要求：1.3.1實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境整潔，定期清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)、儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室地面。對(duì)于廢棄的化學(xué)品、生物材料和實(shí)驗(yàn)器材，應(yīng)按照規(guī)定進(jìn)行分類處理。1.3.2環(huán)境保護(hù)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取有效措施，防止化學(xué)品、生物材料和儀器設(shè)備對(duì)環(huán)境造成污染。對(duì)于有害氣體、廢水、廢棄物等，應(yīng)按照國(guó)家和地方環(huán)境保護(hù)法規(guī)進(jìn)行處理。1.3.3實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理實(shí)驗(yàn)室廢棄物應(yīng)按照國(guó)家和地方環(huán)境保護(hù)法規(guī)進(jìn)行分類、收集、包裝和運(yùn)輸。禁止將廢棄物隨意丟棄或排入下水道。第二章實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備操作2.1微量移液器操作規(guī)范2.1.1準(zhǔn)備工作在進(jìn)行微量移液器操作前，需保證以下準(zhǔn)備工作已完成：（1）檢查移液器是否完好無損，各部件是否松動(dòng)。（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的移液器頭。（3）將移液器頭安裝在移液器上，保證安裝牢固。（4）調(diào)整移液器至所需體積。2.1.2移液操作（1）用力按下移液器的按鈕，使移液器頭插入液體中。（2）緩慢釋放按鈕，使液體進(jìn)入移液器頭。（3）移液器頭離開液體后，立即按下按鈕，將液體排出。（4）重復(fù)以上步驟，完成所需移液次數(shù)。2.1.3移液器清洗與保養(yǎng)（1）使用完畢后，及時(shí)卸下移液器頭，用蒸餾水清洗。（2）檢查移液器內(nèi)部是否有液體殘留，如有，用紙巾擦干凈。（3）將移液器放在干燥、通風(fēng)的環(huán)境中保存。2.2離心機(jī)操作與維護(hù)2.2.1準(zhǔn)備工作（1）檢查離心機(jī)是否平衡，若有不平衡現(xiàn)象，及時(shí)調(diào)整。（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的離心管和轉(zhuǎn)子。（3）將離心管放入轉(zhuǎn)子中，保證離心管與轉(zhuǎn)子配合緊密。2.2.2離心操作（1）將轉(zhuǎn)子放入離心機(jī)中，關(guān)閉離心機(jī)蓋。（2）設(shè)置離心機(jī)轉(zhuǎn)速、時(shí)間等參數(shù)。（3）開啟離心機(jī)，待離心過程完成后，關(guān)閉離心機(jī)。（4）取出離心管，觀察離心效果。2.2.3離心機(jī)維護(hù)（1）使用完畢后，及時(shí)清理離心機(jī)內(nèi)部和轉(zhuǎn)子。（2）檢查離心機(jī)是否有異常聲音，如有，及時(shí)維修。（3）定期檢查離心機(jī)電源和線路，保證安全。2.3顯微鏡使用與保養(yǎng)2.3.1準(zhǔn)備工作（1）檢查顯微鏡各部件是否完好，鏡頭是否清潔。（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的物鏡和目鏡。（3）調(diào)整顯微鏡光源，使視野明亮。2.3.2顯微鏡使用（1）將待觀察的樣本放置在顯微鏡載物臺(tái)上。（2）調(diào)整物鏡和目鏡，使圖像清晰。（3）使用顯微鏡調(diào)焦裝置，觀察樣本細(xì)節(jié)。（4）記錄觀察結(jié)果。2.3.3顯微鏡保養(yǎng)（1）使用完畢后，用鏡頭紙擦拭鏡頭，避免灰塵和污垢。（2）檢查顯微鏡光源和線路，保證安全。（3）將顯微鏡放在干燥、通風(fēng)的環(huán)境中保存，避免潮濕和腐蝕。第三章樣品處理與保存3.1樣品采集與運(yùn)輸3.1.1樣品采集樣品采集是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)與技術(shù)操作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其目的是獲取具有代表性的樣本，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在進(jìn)行樣品采集時(shí)，應(yīng)遵循以下原則：（1）保證采集工具的清潔、無菌，避免交叉污染。（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，選擇合適的采集方法，如血液、尿液、組織等。（3）在采集過程中，盡量減少樣品的損失和污染。（4）采集后的樣品應(yīng)盡快進(jìn)行處理和保存，以保持樣品的活性。3.1.2樣品運(yùn)輸樣品運(yùn)輸是樣品采集后的重要環(huán)節(jié)，應(yīng)采取以下措施保證樣品的安全運(yùn)輸：（1）選擇合適的運(yùn)輸工具，如冷鏈運(yùn)輸箱、保溫箱等。（2）根據(jù)樣品的特性，采取相應(yīng)的保護(hù)措施，如防震、防潮、防高溫等。（3）在運(yùn)輸過程中，實(shí)時(shí)監(jiān)控樣品的溫度、濕度等參數(shù)，保證樣品質(zhì)量。（4）運(yùn)輸過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)法規(guī)，保證樣品的安全、合規(guī)。3.2樣品保存與儲(chǔ)存3.2.1樣品保存樣品保存是為了保持樣品的活性、穩(wěn)定性和完整性，以下為樣品保存的幾種方法：（1）冷藏保存：將樣品放置在4℃冰箱中，適用于大部分生物樣品。（2）冷凍保存：將樣品放置在20℃或更低溫度的冰箱中，適用于長(zhǎng)期保存的生物樣品。（3）凍干保存：將樣品凍干后，放置在干燥、低溫的環(huán)境中，適用于易降解的生物樣品。（4）真空保存：將樣品真空封裝，減少氧氣和微生物的影響，適用于易氧化、易腐敗的樣品。3.2.2樣品儲(chǔ)存樣品儲(chǔ)存是為了長(zhǎng)期保存樣品，以下為樣品儲(chǔ)存的幾種方式：（1）低溫儲(chǔ)存：將樣品放置在80℃或更低溫度的冰箱中，適用于長(zhǎng)期保存的生物樣品。（2）液氮儲(chǔ)存：將樣品放置在液氮中，適用于需要長(zhǎng)期保存的珍貴樣品。（3）石蠟儲(chǔ)存：將樣品嵌入石蠟中，適用于組織切片等樣品。（4）真空儲(chǔ)存：將樣品真空封裝，放置在干燥、低溫的環(huán)境中，適用于易氧化、易腐敗的樣品。3.3樣品處理方法3.3.1樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理是實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作，主要包括以下步驟：（1）樣品清洗：去除樣品表面的雜質(zhì)和微生物。（2）樣品勻漿：將樣品打碎成均勻的糊狀物，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。（3）樣品過濾：去除樣品中的雜質(zhì)和顆粒。3.3.2樣品分離樣品分離是根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將樣品中的目標(biāo)成分與其他成分分離，以下為常用的分離方法：（1）離心分離：利用離心力將樣品中的不同成分分離。（2）層析分離：利用層析柱將樣品中的不同成分分離。（3）免疫學(xué)分離：利用抗原抗體反應(yīng)將樣品中的特定成分分離。3.3.3樣品檢測(cè)樣品檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以下為常用的檢測(cè)方法：（1）光譜檢測(cè)：利用光譜儀分析樣品中的成分。（2）色譜檢測(cè)：利用色譜儀分析樣品中的成分。（3）電化學(xué)檢測(cè)：利用電化學(xué)方法分析樣品中的成分。第四章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)4.1DNA提取與純化4.1.1實(shí)驗(yàn)原理DNA提取與純化的目的是從細(xì)胞中分離出純凈的DNA分子。本實(shí)驗(yàn)采用酚氯仿法進(jìn)行DNA的提取與純化。酚氯仿法利用酚氯仿混合液能夠使蛋白質(zhì)變性和DNA沉淀的特性，將DNA與蛋白質(zhì)分離。4.1.2實(shí)驗(yàn)材料（1）細(xì)胞樣品（2）酚氯仿混合液（3）無水乙醇（4）75%乙醇（5）TE緩沖液（6）離心管（7）離心機(jī)（8）紫外可見光光度計(jì)4.1.3實(shí)驗(yàn)步驟（1）細(xì)胞樣品處理：將細(xì)胞樣品加入離心管，加入適量酚氯仿混合液，充分混勻。（2）離心：將離心管放入離心機(jī)，以12000r/min的速度離心10min。（3）取上層水相：將上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管。（4）DNA沉淀：加入等體積的無水乙醇，混勻，放入20℃冰箱冷藏30min。（5）離心：將離心管放入離心機(jī)，以12000r/min的速度離心10min。（6）洗滌：棄去上清，加入75%乙醇洗滌，離心10min。（7）干燥：將離心管倒置于濾紙上，晾干DNA沉淀。（8）溶解：將DNA沉淀加入TE緩沖液，充分溶解。4.2RNA提取與純化4.2.1實(shí)驗(yàn)原理RNA提取與純化的目的是從細(xì)胞中分離出純凈的RNA分子。本實(shí)驗(yàn)采用異硫氰酸胍酚氯仿法進(jìn)行RNA的提取與純化。該方法利用異硫氰酸胍能夠使RNA與蛋白質(zhì)分離，酚氯仿法則用于進(jìn)一步純化RNA。4.2.2實(shí)驗(yàn)材料（1）細(xì)胞樣品（2）異硫氰酸胍酚氯仿混合液（3）無水乙醇（4）75%乙醇（5）DEPC水（6）離心管（7）離心機(jī)（8）紫外可見光光度計(jì)4.2.3實(shí)驗(yàn)步驟（1）細(xì)胞樣品處理：將細(xì)胞樣品加入離心管，加入適量異硫氰酸胍酚氯仿混合液，充分混勻。（2）離心：將離心管放入離心機(jī)，以12000r/min的速度離心10min。（3）取上層水相：將上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管。（4）RNA沉淀：加入等體積的無水乙醇，混勻，放入20℃冰箱冷藏30min。（5）離心：將離心管放入離心機(jī)，以12000r/min的速度離心10min。（6）洗滌：棄去上清，加入75%乙醇洗滌，離心10min。（7）干燥：將離心管倒置于濾紙上，晾干RNA沉淀。（8）溶解：將RNA沉淀加入DEPC水，充分溶解。4.3PCR實(shí)驗(yàn)操作4.3.1實(shí)驗(yàn)原理聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的方法。PCR利用DNA模板、引物、四種脫氧核苷酸（dNTPs）和DNA聚合酶在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行DNA復(fù)制。通過循環(huán)進(jìn)行變性、退火和延伸三個(gè)步驟，使特定DNA片段得到大量擴(kuò)增。4.3.2實(shí)驗(yàn)材料（1）DNA模板（2）引物（3）dNTPs（4）DNA聚合酶（5）PCR緩沖液（6）離心管（7）紫外可見光光度計(jì)（8）熱循環(huán)儀4.3.3實(shí)驗(yàn)步驟（1）配制PCR反應(yīng)體系：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將DNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶和PCR緩沖液按照一定比例混合。（2）加入離心管：將配制好的PCR反應(yīng)體系加入離心管。（3）熱循環(huán)：將離心管放入熱循環(huán)儀，按照以下程序進(jìn)行循環(huán)：變性：95℃，5min退火：根據(jù)引物的Tm值設(shè)定溫度，30s延伸：72℃，1min循環(huán)次數(shù)：3035次（4）終止反應(yīng)：將離心管從熱循環(huán)儀中取出，置于4℃冰箱保存。（5）電泳檢測(cè)：將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，觀察擴(kuò)增結(jié)果。第五章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)5.1蛋白質(zhì)定量測(cè)定5.1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)旨在掌握幾種常用的蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法，以準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。5.1.2實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法主要包括紫外吸收法、考馬斯亮藍(lán)法、Lowry法、BCA法等。各種方法基于不同的原理，適用于不同類型的蛋白質(zhì)樣品。5.1.3實(shí)驗(yàn)材料（1）實(shí)驗(yàn)儀器：紫外可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、移液器等。（2）實(shí)驗(yàn)試劑：蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、紫外吸收液、考馬斯亮藍(lán)試劑、Lowry試劑、BCA試劑等。5.1.4實(shí)驗(yàn)步驟（1）紫外吸收法：將蛋白質(zhì)樣品與紫外吸收液混合，利用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。（2）考馬斯亮藍(lán)法：將蛋白質(zhì)樣品與考馬斯亮藍(lán)試劑混合，經(jīng)過一定時(shí)間的反應(yīng)后，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。（3）Lowry法：將蛋白質(zhì)樣品與Lowry試劑混合，經(jīng)過一定時(shí)間的反應(yīng)后，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。（4）BCA法：將蛋白質(zhì)樣品與BCA試劑混合，經(jīng)過一定時(shí)間的反應(yīng)后，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。5.2酶活性測(cè)定5.2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)旨在掌握酶活性測(cè)定的基本方法，以評(píng)估酶的催化效率。5.2.2實(shí)驗(yàn)原理酶活性測(cè)定通常采用分光光度法、熒光法、電化學(xué)法等。本實(shí)驗(yàn)以分光光度法為例，通過測(cè)定酶促反應(yīng)速率，計(jì)算酶活性。5.2.3實(shí)驗(yàn)材料（1）實(shí)驗(yàn)儀器：分光光度計(jì)、離心機(jī)、移液器等。（2）實(shí)驗(yàn)試劑：酶溶液、底物溶液、緩沖溶液等。5.2.4實(shí)驗(yàn)步驟（1）配制酶溶液：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，配制適當(dāng)濃度的酶溶液。（2）底物溶液：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，配制適當(dāng)濃度的底物溶液。（3）加入酶溶液：將酶溶液加入底物溶液中，啟動(dòng)酶促反應(yīng)。（4）測(cè)定吸光度：在反應(yīng)過程中，定時(shí)測(cè)定混合溶液的吸光度，記錄數(shù)據(jù)。（5）計(jì)算酶活性：根據(jù)吸光度變化，計(jì)算酶活性。5.3電泳技術(shù)5.3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)旨在掌握電泳技術(shù)的基本原理和操作方法，用于分離和分析生物大分子。5.3.2實(shí)驗(yàn)原理電泳技術(shù)是基于生物大分子在電場(chǎng)作用下，根據(jù)其電荷性質(zhì)和大小進(jìn)行分離的方法。主要包括聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳、毛細(xì)管電泳等。5.3.3實(shí)驗(yàn)材料（1）實(shí)驗(yàn)儀器：電泳儀、電泳槽、凝膠成像系統(tǒng)等。（2）實(shí)驗(yàn)試劑：凝膠制備試劑、蛋白質(zhì)或核酸樣品、染料等。5.3.4實(shí)驗(yàn)步驟（1）制備凝膠：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，制備適當(dāng)濃度的聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠。（2）加樣：將蛋白質(zhì)或核酸樣品與染料混合，加入凝膠孔中。（3）電泳：將凝膠放入電泳槽中，加入電極緩沖液，接通電源，進(jìn)行電泳。（4）成像：電泳結(jié)束后，將凝膠取出，進(jìn)行成像分析，觀察分離效果。標(biāo)題：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)與技術(shù)操作作業(yè)指導(dǎo)書第六章細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)6.1細(xì)胞培養(yǎng)與傳代6.1.1細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)技術(shù)，它是指在體外模擬細(xì)胞生長(zhǎng)所需的環(huán)境，使細(xì)胞得以生長(zhǎng)、繁殖。細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括細(xì)胞種類的選擇、培養(yǎng)液的配置、細(xì)胞接種、培養(yǎng)條件的控制等。細(xì)胞種類的選擇應(yīng)依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行，常用的細(xì)胞有原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞。原代細(xì)胞來源于機(jī)體組織，具有較為完整的生物學(xué)特性；傳代細(xì)胞則是在體外培養(yǎng)條件下，經(jīng)過多代繁殖形成的細(xì)胞株，具有較強(qiáng)的繁殖能力。培養(yǎng)液的配置包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、添加劑和抗生素等?；A(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型選擇，添加劑主要包括血清、生長(zhǎng)因子等，抗生素則用于預(yù)防細(xì)胞污染。細(xì)胞接種是將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)容器中，接種密度應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求確定。接種后，將細(xì)胞置于適宜的培養(yǎng)條件下，如溫度、濕度、二氧化碳濃度等。6.1.2細(xì)胞傳代細(xì)胞傳代是指將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)容器中，以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和繁殖。細(xì)胞傳代的關(guān)鍵步驟包括細(xì)胞的消化、離心、重懸和接種。細(xì)胞消化常用胰蛋白酶或EDTA等消化液。消化過程中，應(yīng)注意控制消化時(shí)間，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。消化完成后，將細(xì)胞懸液離心，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。將細(xì)胞接種于新的培養(yǎng)容器中，繼續(xù)培養(yǎng)。6.2細(xì)胞染色與觀察6.2.1細(xì)胞染色細(xì)胞染色是利用染料與細(xì)胞組分結(jié)合，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)或功能部位顯色的技術(shù)。常用的細(xì)胞染色方法有普通染色、熒光染色和免疫熒光染色等。普通染色主要用于觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，如蘇木精伊紅染色、甲基綠派若寧染色等。熒光染色則利用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞組分，通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞特定結(jié)構(gòu)或功能部位，如細(xì)胞器、細(xì)胞骨架等。免疫熒光染色則是利用特異性抗體與細(xì)胞內(nèi)抗原結(jié)合，通過熒光標(biāo)記抗體，觀察細(xì)胞內(nèi)抗原分布。6.2.2細(xì)胞觀察細(xì)胞觀察是利用顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能等方面的觀察。常用的顯微鏡有光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等。光學(xué)顯微鏡主要用于觀察細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞大小、形狀、核形態(tài)等。熒光顯微鏡則用于觀察細(xì)胞內(nèi)特定結(jié)構(gòu)或功能部位，如細(xì)胞器、細(xì)胞骨架等。共聚焦顯微鏡是一種高級(jí)顯微鏡，能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞內(nèi)三維結(jié)構(gòu)的觀察。6.3細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè)6.3.1細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)是評(píng)估細(xì)胞數(shù)量的實(shí)驗(yàn)方法。常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法有顯微鏡計(jì)數(shù)、自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)等。顯微鏡計(jì)數(shù)是將細(xì)胞懸液滴加至計(jì)數(shù)板，通過顯微鏡觀察計(jì)數(shù)板上的細(xì)胞數(shù)量。該方法操作簡(jiǎn)單，但受主觀因素影響較大。自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)則利用儀器自動(dòng)識(shí)別和計(jì)算細(xì)胞數(shù)量，具有較高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。6.3.2細(xì)胞活力檢測(cè)細(xì)胞活力檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞生存狀況的實(shí)驗(yàn)方法。常用的細(xì)胞活力檢測(cè)方法有臺(tái)酚藍(lán)染色、MTT法等。臺(tái)酚藍(lán)染色是將臺(tái)酚藍(lán)染料加入細(xì)胞懸液，活細(xì)胞不能被染色，死細(xì)胞則呈藍(lán)色。通過觀察細(xì)胞染色情況，可評(píng)估細(xì)胞活力。MTT法則是利用MTT染料與細(xì)胞內(nèi)線粒體脫氫酶反應(yīng)，藍(lán)色產(chǎn)物。通過檢測(cè)藍(lán)色產(chǎn)物的吸光度，可反映細(xì)胞活力。第七章免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)7.1抗體制備與純化7.1.1抗體制備抗體制備是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，主要包括抗原的制備、免疫動(dòng)物的選擇與免疫、抗血清的獲取以及抗體的分離。（1）抗原制備抗原制備包括抗原的提取、純化、鑒定和保存。具體操作如下：（1）提?。焊鶕?jù)抗原的性質(zhì)，選擇適當(dāng)?shù)奶崛》椒?，如物理法、化學(xué)法或生物技術(shù)法。（2）純化：通過離心、過濾、凝膠層析等方法對(duì)提取的抗原進(jìn)行純化。（3）鑒定：采用紫外光譜、高效液相色譜、電泳等方法對(duì)純化后的抗原進(jìn)行鑒定。（4）保存：將純化后的抗原分裝，置于20℃以下冰箱保存。（2）免疫動(dòng)物的選擇與免疫免疫動(dòng)物的選擇應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體的類型和用途來確定。常用的免疫動(dòng)物有小鼠、大鼠、兔子和山羊等。免疫過程包括以下步驟：（1）選擇合適的免疫動(dòng)物。（2）制備抗原佐劑混合物。（3）進(jìn)行免疫注射，包括初次免疫和加強(qiáng)免疫。（4）收集抗血清。（3）抗血清的獲取抗血清的獲取主要包括以下步驟：（1）免疫動(dòng)物達(dá)到預(yù)期免疫效果后，采集血液。（2）分離血清，置于20℃以下冰箱保存。（4）抗體的分離抗體的分離主要包括以下方法：（1）鹽析法：利用抗體在不同濃度鹽溶液中的溶解度差異進(jìn)行分離。（2）親和層析法：利用抗體與抗原的特異性結(jié)合進(jìn)行分離。（3）凝膠過濾法：利用抗體分子大小差異進(jìn)行分離。7.1.2抗體純化抗體純化是為了獲得高純度的抗體，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。常用的抗體純化方法有：（1）鹽析法將抗血清與適當(dāng)濃度的鹽溶液混合，使抗體析出，然后離心收集抗體。（2）親和層析法利用抗體與抗原的特異性結(jié)合，將抗體從混合物中分離出來。（3）凝膠過濾法利用抗體分子大小差異，通過凝膠過濾柱分離抗體。7.2ELISA實(shí)驗(yàn)操作ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。7.2.1實(shí)驗(yàn)原理ELISA實(shí)驗(yàn)的基本原理是將抗原或抗體固定在固相載體上，加入待測(cè)抗體或抗原，經(jīng)過孵育、洗滌等步驟，最后加入酶標(biāo)記的二抗或抗原，通過酶底物反應(yīng)產(chǎn)生顏色，從而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。7.2.2實(shí)驗(yàn)步驟（1）包被抗原或抗體將抗原或抗體溶液加入酶標(biāo)板，置于4℃冰箱過夜。（2）封閉將封閉液加入酶標(biāo)板，室溫孵育1小時(shí)。（3）加樣將待測(cè)樣本加入酶標(biāo)板，室溫孵育1小時(shí)。（4）洗滌用洗滌液洗滌酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的成分。（5）加酶標(biāo)二抗或抗原將酶標(biāo)二抗或抗原加入酶標(biāo)板，室溫孵育1小時(shí)。（6）洗滌用洗滌液洗滌酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的成分。（7）加底物將底物溶液加入酶標(biāo)板，室溫避光孵育1030分鐘。（8）終止反應(yīng)加入終止液，終止酶反應(yīng)。（9）測(cè)定吸光度用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度，計(jì)算待測(cè)樣本濃度。7.3免疫組化實(shí)驗(yàn)免疫組化實(shí)驗(yàn)是一種利用抗體與抗原特異性結(jié)合的原理，在組織切片或細(xì)胞涂片上檢測(cè)特定抗原的方法。7.3.1實(shí)驗(yàn)原理免疫組化實(shí)驗(yàn)通過將特異性抗體與組織或細(xì)胞中的抗原結(jié)合，然后通過酶標(biāo)記的二抗或熒光標(biāo)記的抗體進(jìn)行顯色或熒光觀察，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原的定位和定性檢測(cè)。7.3.2實(shí)驗(yàn)步驟（1）組織切片或細(xì)胞涂片制備將組織或細(xì)胞制備成薄片，固定于載玻片上。（2）脫蠟和水化將組織切片進(jìn)行脫蠟處理，然后依次水化。（3）高壓抗原修復(fù)將組織切片進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，以提高抗原的暴露。（4）封閉將封閉液加入組織切片，室溫孵育30分鐘。（5）加一抗將一抗加入組織切片，置于4℃冰箱過夜。（6）洗滌用洗滌液洗滌組織切片，去除未結(jié)合的成分。（7）加二抗將酶標(biāo)記的二抗加入組織切片，室溫孵育1小時(shí)。（8）洗滌用洗滌液洗滌組織切片，去除未結(jié)合的成分。（9）顯色將顯色液加入組織切片，室溫避光孵育1030分鐘。（10）中止反應(yīng)用蒸餾水沖洗組織切片，中止顯色反應(yīng)。（11）復(fù)染和封片將復(fù)染液加入組織切片，進(jìn)行復(fù)染，然后封片。（12）顯微鏡觀察將組織切片置于顯微鏡下觀察，記錄結(jié)果。第八章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)8.1藥物制備與儲(chǔ)存8.1.1藥物制備藥物制備是藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，主要包括藥物的提取、純化、制劑等過程。在進(jìn)行藥物制備時(shí)，應(yīng)遵循以下原則：（1）選擇合適的原料：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮退幬锏男再|(zhì)，選擇合適的原料進(jìn)行提取和制備。（2）優(yōu)化制備工藝：針對(duì)不同藥物的特點(diǎn)，采用相應(yīng)的制備工藝，保證藥物的質(zhì)量和活性。（3）質(zhì)量控制：對(duì)制備過程中各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，保證藥物的純度和含量。（4）安全性評(píng)價(jià)：對(duì)制備的藥物進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，保證其對(duì)人體無毒性作用。8.1.2藥物儲(chǔ)存藥物儲(chǔ)存是保證藥物質(zhì)量和安全的重要環(huán)節(jié)。在儲(chǔ)存過程中，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（1）選擇合適的儲(chǔ)存環(huán)境：根據(jù)藥物的物理和化學(xué)性質(zhì)，選擇適宜的儲(chǔ)存環(huán)境，如溫度、濕度、光照等。（2）避免交叉污染：藥物儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)避免與其他物品接觸，特別是易揮發(fā)、易燃、有毒的物品。（3）定期檢查：對(duì)儲(chǔ)存的藥物進(jìn)行定期檢查，發(fā)覺變質(zhì)、過期等現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)處理。（4）安全管理：建立完善的藥物儲(chǔ)存管理制度，保證藥物的安全使用。8.2藥物劑量與給藥方法8.2.1藥物劑量藥物劑量是指在一定時(shí)間內(nèi)給予動(dòng)物或人體的藥物量。藥物劑量應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⑺幬镄再|(zhì)、動(dòng)物或人體生理特點(diǎn)等因素進(jìn)行合理選擇。以下為藥物劑量確定的幾個(gè)原則：（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模焊鶕?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定藥物劑量，如藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)、毒性實(shí)驗(yàn)等。（2）藥物性質(zhì)：考慮藥物的藥理作用、毒副作用、生物利用度等因素，確定合適的劑量。（3）動(dòng)物或人體生理特點(diǎn)：根據(jù)動(dòng)物或人體的生理特點(diǎn)，如體重、年齡、性別等，調(diào)整藥物劑量。（4）安全范圍：保證藥物劑量在安全范圍內(nèi)，避免產(chǎn)生毒性反應(yīng)。8.2.2給藥方法給藥方法是指將藥物給予動(dòng)物或人體的方式。以下為常用的給藥方法：（1）口服：適用于口服藥物，如片劑、膠囊劑等。（2）注射：適用于注射劑，如水針劑、粉針劑等。（3）呼吸道給藥：適用于氣霧劑、吸入劑等。（4）皮膚給藥：適用于外用藥物，如軟膏、乳膏等。（5）黏膜給藥：適用于黏膜用藥，如栓劑、噴霧劑等。8.3藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是評(píng)價(jià)藥物療效和作用機(jī)制的重要手段。以下為藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)：（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模好鞔_實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，如評(píng)價(jià)藥物的療效、作用機(jī)制等。（2）實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停哼x擇與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南喾膶?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，如疾病模型、?xì)胞模型等。（3）給藥方案：根據(jù)藥物性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停O(shè)計(jì)合理的給藥方案。（4）觀察指標(biāo)：選擇與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南嚓P(guān)的觀察指標(biāo)，如生理、生化、病理等。（5）統(tǒng)計(jì)分析：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)價(jià)藥物的療效和作用機(jī)制。（6）實(shí)驗(yàn)記錄：詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果，為后續(xù)研究提供依據(jù)。第九章生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)9.1生理參數(shù)測(cè)量9.1.1測(cè)量設(shè)備的選擇在生理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，選擇合適的測(cè)量設(shè)備是保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。常見的生理參數(shù)測(cè)量設(shè)備包括心電圖機(jī)、血壓計(jì)、呼吸機(jī)等。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的測(cè)量設(shè)備。9.1.2生理參數(shù)的測(cè)量方法（1）心電圖的測(cè)量：將電極貼于動(dòng)物或人體相應(yīng)部位，連接心電圖機(jī)，調(diào)整儀器參數(shù)，記錄心電圖波形。（2）血壓的測(cè)量：采用袖帶法或侵入法測(cè)量血壓。袖帶法適用于人體，侵入法則適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。（3）呼吸的測(cè)量：通過呼吸機(jī)或呼吸傳感器測(cè)量呼吸頻率和深度。9.1.3生理參數(shù)測(cè)量的注意事項(xiàng)（1）保證測(cè)量設(shè)備的準(zhǔn)確性，定期進(jìn)行校準(zhǔn)。（2）在測(cè)量過程中，避免對(duì)動(dòng)物的干擾，以免影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。（3）記錄數(shù)據(jù)時(shí)，注意記錄實(shí)驗(yàn)條件、時(shí)間等信息，以便后續(xù)分析。9.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作9.2.1動(dòng)物選擇與飼養(yǎng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物種類。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需在清潔、安靜的環(huán)境中飼養(yǎng)，保證營(yíng)養(yǎng)充足，避免過度擁擠。9.2.2動(dòng)物麻醉與手術(shù)（1）麻醉：根據(jù)動(dòng)物種類和實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的麻醉方法，如吸入麻醉、注射麻醉等。（2）手術(shù)：在無菌條件下進(jìn)行手術(shù)，操作過程中注意止血、消毒。9.2.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng)（1）保證實(shí)驗(yàn)操作的規(guī)范性，避免對(duì)動(dòng)物的傷害。（2）在實(shí)驗(yàn)過程中，密切觀察動(dòng)物的生命體征，如心率、血壓等。（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖o(hù)理，如給予抗生素、止痛藥等。9.3生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理9.3.1數(shù)據(jù)收集與整理在實(shí)驗(yàn)過程中，及時(shí)記錄生理參數(shù)數(shù)據(jù)。收集到的數(shù)據(jù)應(yīng)進(jìn)行整理，包括編號(hào)、實(shí)驗(yàn)條件、測(cè)量結(jié)果等。9.3.2數(shù)據(jù)分析方法（1）描述性分析：對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，包括平均值、標(biāo)