AbMole|羥基酪醇通過(guò)PI3K/Akt-Nrf2信號(hào)通路和自噬協(xié)同保護(hù)腸道免受氧化損傷近年來(lái)，腸道氧化應(yīng)激被廣泛認(rèn)為是多種腸道疾病，如炎癥性腸?。↖BD）和結(jié)直腸癌（CRC）的主要致病因素。羥基酪醇（Hydroxytyrosol,HT），一種在橄欖油中含量豐富的多酚類化合物，因其強(qiáng)大的抗氧化活性而備受關(guān)注。來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼養(yǎng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的XiaobinWen,ShanlongTang,FanWan等多名研究人員發(fā)表了題為《ThePI3K/Akt-Nrf2SignalingPathwayandMitophagySynergisticallyMediateHydroxytyrosoltoAlleviateIntestinalOxidativeDamage》的研究成果。在該文章中，研究人員使用了Hoechst33258（AbMole，M5110）。研究通過(guò)一系列精心設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，深入探討了HT對(duì)腸道氧化損傷的保護(hù)作用及其潛在的分子機(jī)制。研究團(tuán)隊(duì)首先通過(guò)腹腔注射二吡啶基（Diquat,DQ）構(gòu)建了豬腸道氧化應(yīng)激模型。實(shí)驗(yàn)對(duì)象被隨機(jī)分為四組：對(duì)照組（CON）、DQ組、HT組（基礎(chǔ)飼料中添加500mg/kgHT）和HT+DQ組。在28天的實(shí)驗(yàn)周期后，收集結(jié)腸組織、粘膜及內(nèi)容物樣本進(jìn)行分析。此外，研究還采用了IPEC-J2豬腸上皮細(xì)胞系進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步驗(yàn)證HT的作用機(jī)制。在豬模型中，與DQ組相比，HT處理顯著提高了血清和結(jié)腸粘膜中的總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）水平，同時(shí)降低了丙二醛（MDA）和過(guò)氧化氫（H2O2）水平。這些變化表明，HT顯著增強(qiáng)了機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)，有效對(duì)抗了DQ誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。圖1羥基酪醇（HT）提高了仔豬模型的抗氧化能力并減輕了腸道氧化損傷。通過(guò)H&E染色和透射電鏡（TEM）觀察，研究發(fā)現(xiàn)DQ處理導(dǎo)致結(jié)腸粘膜和上皮顯著損傷，而HT處理則有效減輕了這些損傷，保持了腸道結(jié)構(gòu)的完整性。此外，HT處理還顯著降低了血清中的D-乳酸和二胺氧化酶（DAO）水平，這兩種指標(biāo)常用于評(píng)估腸道通透性。進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示，HT處理增加了緊密連接蛋白（ZO-1、Occludin和Claudin-1）的表達(dá)，這些蛋白對(duì)于維持腸道屏障功能至關(guān)重要。在探索HT的作用機(jī)制時(shí)，研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)HT處理顯著增加了豬和IPEC-J2細(xì)胞中磷酸化PI3K（p-PI3K）和磷酸化Akt（p-Akt）的水平。為了驗(yàn)證PI3K/Akt信號(hào)通路在HT作用中的重要性，研究使用了PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002。結(jié)果顯示，抑制該通路顯著降低了HT對(duì)抗氧化能力和細(xì)胞活力的保護(hù)作用。此外，HT處理還增加了Nrf2的磷酸化（p-Nrf2）和下游抗氧化基因（如HO-1和NQO1）的表達(dá)。當(dāng)使用Nrf2信號(hào)通路抑制劑ML385時(shí)，HT的保護(hù)作用被顯著抑制，進(jìn)一步證實(shí)了PI3K/Akt-Nrf2信號(hào)通路在HT抗氧化作用中的關(guān)鍵作用。圖2羥基酪醇（HT）通過(guò)Nrf2信號(hào)通路增加抗氧化能力并減輕氧化應(yīng)激。除了PI3K/Akt-Nrf2信號(hào)通路外，研究還發(fā)現(xiàn)HT處理誘導(dǎo)了豬和IPEC-J2細(xì)胞中的自噬體形成，并增加了自噬相關(guān)蛋白（如Parkin、LC3II和ATG5）的表達(dá)。為了驗(yàn)證自噬在HT作用中的重要性，研究使用了自噬抑制劑Mdivi-1。結(jié)果顯示，抑制自噬顯著降低了HT對(duì)抗氧化能力和細(xì)胞活力的保護(hù)作用，并增加了ROS水平。此外，研究還發(fā)現(xiàn)抑制Nrf2信號(hào)通路促進(jìn)了自噬，而抑制自噬則增加了Nrf2的磷酸化和下游抗氧化基因的表達(dá)，表明Nrf2信號(hào)通路和自噬之間存在相互作用。圖3羥基酪醇（HT）激活線粒體自噬以調(diào)節(jié)仔豬和IPEC-J2細(xì)胞的氧化應(yīng)激。本研究表明，HT通過(guò)激活PI3K/Akt-Nrf2信號(hào)通路和促進(jìn)自噬來(lái)減輕腸道氧化損傷。這些發(fā)現(xiàn)為HT在腸道疾病治療中的應(yīng)用提供了新的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步探索HT在其他疾病模型中的作用機(jī)制，并考慮與其他抗氧化藥物的聯(lián)合應(yīng)用以提高治