1非洲豬瘟監(jiān)測樣品采集、保存及運輸技術規(guī)范本文件規(guī)定了非洲豬瘟監(jiān)測樣品總體要求、采集前準備、樣品采集、樣品包裝、樣品的保存與運輸、監(jiān)測及廢棄物處理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T18648非洲豬瘟診斷技術NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術規(guī)范NY/T561動物炭疽診斷技術《中華人民共和國動物防疫法》（2021年修訂版）《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規(guī)范》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第503《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（2024年修訂）《非洲豬瘟疫情應急實施方案（第六版）》（農(nóng)牧發(fā)〔2024〕17號）《非洲豬瘟防治技術規(guī)范（試行）》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2015〕31號）《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號）《炭疽防治技術規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2007〕12號）3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1監(jiān)測采取規(guī)定的方法，持續(xù)對特定群體中疫病的發(fā)生、流行、分布及相關因素進行觀察和檢測的過程。23.2樣品取自動物或環(huán)境，擬通過檢驗檢測反映動物個體、群體和環(huán)境有關狀況的材料和物品。3.3采樣按照規(guī)定的程序和要求，從動物或環(huán)境取得一定量的樣本，并經(jīng)過適當?shù)奶幚恚糇龃龣z樣品和留樣樣品的過程。3.4滅菌應用物理或化學方法殺滅物品上所有病原微生物、非病原微生物和芽孢的方法。4總體要求4.1采樣原則4.1.1發(fā)生急性死亡的生豬，如懷疑是炭疽，則不得解剖，并按照《炭疽防治技術規(guī)范》和《獸醫(yī)實驗室生物安全管理條例》的規(guī)定個體防護和實驗操作要求采集血樣和實驗操作，炭疽血液涂片按照NY/T561中染色鏡檢，排除炭疽陽性后方可開展非洲豬瘟檢測樣品采樣。4.1.2采集死亡動物的病料及活體采樣時，應符合動物倫理的相關規(guī)定，動物撲殺應符合動物福利。4.1.3做好環(huán)境消毒，動物組織及采樣廢棄物妥善處理，避免污染環(huán)境，防止擴散傳播。4.2無菌操作及安全防護4.2.1采樣過程注意無菌操作，采樣所需的刀、剪刀、鑷子、離心管、自封袋、PBS緩沖液等應事先高壓滅菌，樣品分類、單獨保存。4.2.2采樣人員應做好個人防護，必要時穿防護服佩戴一次性手套和口罩。5采樣前準備5.1采樣人員5.1.1具備相關專業(yè)知識。5.1.2明確采樣目的、樣品類型、樣品數(shù)量。5.1.3具備熟練的采樣技能，可正確使用采樣器械。5.2采樣物品和工具5.2.1防護物品N95口罩、一次性PE手套、乳膠手套、防護帽、護目鏡、防護服、膠靴等。35.2.2采樣工具棉拭子、離心管、裝有磷酸緩沖鹽溶液(phosphatebuffersaline,PBS)的離心管、真空采樣管、10mL注射器、剪刀、鑷子、75%酒精、棉球、樣品箱等，可根據(jù)實際需要增減采樣器具。5.2.3其他物品采樣單、簽字筆、記號筆、密封袋、封口膜、冰袋等。5.2.4金屬器械可采用103kPa高壓30min，或160℃干熱2h滅菌。臨用時75%酒精擦拭，或用時進行火焰消6樣品采集6.1血樣6.1.1采血部位和方法根據(jù)豬只大小確定采血部位，常采用耳靜脈、前腔靜脈、尾靜脈，采血方法按照NY/T541規(guī)定進行操作。6.1.2血樣樣品的處理血清無菌采集5mL血液樣品，室溫下傾斜30°靜置2至4h，有血清析出時，無菌剝離血凝塊，然后置于4℃冰箱過夜，待大部分血清析出時收集血清，必要時低速離心（1000g離心10～15min）分離出血清，冷藏運輸。到達檢測實驗室后，冷凍保存，避免反復凍融。全血樣品無菌采集5mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血，采集過程要輕輕上下顛倒混勻血液和抗凝劑，防止血液凝固的同時避免溶血。6.2病原學檢測組織樣品用常規(guī)解剖器械剝離皮膚，體腔用消毒器械剝開，所需樣品按無菌操作方法采集。首選脾臟，其次為扁桃體、淋巴結(jié)、腎臟、骨髓等，每塊組織單獨放入已消毒處理的容器中，注明日期、組織名稱。6.3鈍緣軟蜱查找豬圈的墻邊、墻縫、屋頂，或挖掘豬圈地面，查看豬體表面，將收集的鈍緣軟蜱放入有螺旋蓋4的樣品瓶/管中，放入少量土壤，蓋內(nèi)襯以紗布。6.4其他樣品口鼻拭子的采集應符合NY/T541中的規(guī)定；糞便樣品采集應符合GB/T25169中的規(guī)定；污水樣品采集應符合GB/T27522中的規(guī)定；土壤樣品用無菌鑷子取2g～5g裝入無菌離心管中，做好標記。7樣品包裝7.1采集的樣品嚴格按照《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規(guī)范》執(zhí)行。7.2樣品外包裝須貼上封條，封條上應有采樣人的簽章，并注明貼封日期、標注放置方向。8樣品的保存和運輸樣品保存及運輸，應符合NY/T541和《非洲豬瘟疫情應急實施方案（第六版）》中的規(guī)定。9監(jiān)測9.1按GB/T18648中的熒光PCR檢測方法檢測非洲豬瘟病毒核酸。9.2按GB/T18648中的間接ELISA、阻斷ELISA或夾心ELISA抗體檢測方法檢測非洲豬瘟感染抗體。10廢棄物處理10.1采樣使用過的器械，如一次性器械應進行生物安全無害化處理，可重復使用的器械應先消毒后清洗再消毒后才能使用。10.2采樣產(chǎn)生的其他廢棄物、剩余組織和動物尸體處置應按