1和橙黃決明素的測(cè)定BJS61范圍本方法規(guī)定了食品(含保健食品)中大黃酚和橙黃決明素的高效液相色譜測(cè)定方法。2原理3試劑和材料試劑3.1.1甲醇(CH3OH)：色譜純。3.1.2乙腈(C2H3N)：色譜純。3.1.3磷酸(H3PO4)。3.1.4二氯甲烷(CH2CL2)。3.1.5鹽酸(HCL)。3.1.6無(wú)水乙醇(CH3CH2OH)。23.1.7乙酸乙酯(C4H8O2)。3.1.8甲酸(CH2O2)。劑配制3.2.1磷酸水溶液(0.1%)：取磷酸(3.1.3)1.0mL，加水定容至1000mL。3.2.2稀鹽酸：取鹽酸(3.1.5)234mL，用水溶解并定容至1000mL。mL乙酯250mL，混勻。3.2.4甲酸水溶液(0.1%)：取甲酸(3.1.8)1.0mL，加水稀釋并定容至1000mL。品純度≥98%，大黃酚的純度≥99%。配制3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100μg/mL)：分別稱取大黃酚、橙黃決明素(3.3)各0.0100g(精確至mLL3.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(20μg/mL)：分別準(zhǔn)確吸取大黃酚、橙黃決明素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100μg/mL)(3.4.1)各5mL，置同一25mL棕色量瓶中，用無(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2+1)混合溶液(3.2.3)稀釋至刻度，搖勻。0~4℃冷藏保存，有效期1個(gè)月。分別準(zhǔn)確吸取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用無(wú)水乙醇-乙酸乙酯 (2+1)混合溶液(3.2.3)稀釋成一系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，該標(biāo)準(zhǔn)系列中大黃酚和橙黃決明素濃L4儀器和設(shè)備35分析步驟制備或半固態(tài)試樣適量半固態(tài)試樣(軟膠囊內(nèi)容物)混勻，稱取0.5g~1g(精確至0.001g)，置平底燒瓶中，量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液25mL于平底燒瓶中，蒸干(或氮吹至干)，加入稀鹽酸 水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶液(3.2.3)溶解，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，定容至刻度，溶樣L4殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶液(3.2.3)溶解，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，定容至件5.2.1色譜柱：BDSHYPERSILC18(4.6mm×250mm,5μm)或性能相當(dāng)者。：10μL。梯度時(shí)間(min)0制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.4.3)按液相色譜參考條件(5.2)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定相應(yīng)的色譜峰測(cè)定5將試樣溶液(5.1)按液相色譜參考條件(5.2)進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)樣品溶液的色譜峰6結(jié)果計(jì)算固態(tài)或半固態(tài)試樣中大黃酚和橙黃決明素含量按式(1)計(jì)算：X=XVV0m1000X—試樣中大黃酚或橙黃決明素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；C—試樣中所測(cè)的大黃酚或橙黃決明素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；V—試樣最終定容體積，單位為毫升(mL)；V1—最初加入甲醇的體積，單位為毫升(mL)；V0—試樣加酸水解前取濾液體積，單位為毫升(mL)；m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克(g)；液態(tài)試樣中大黃酚和橙黃決明素含量按式(2)計(jì)算：X=CV1000……………………(2)0V10000X—試樣中大黃酚或橙黃決明素的含量，單位為毫克每升(mg/L)；C—試樣中所測(cè)的大黃酚或橙黃決明素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；V—試樣最終定容體積，單位為毫升(mL)；V0—試樣吸取體積，單位為毫升(mL)；6精密度7息SCAShanol-74-33urantioobtusin-3811決明素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖mAU252050-50.05.010.015.020.025.030.035.0min酚9驗(yàn)b)流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液(3.2.4)；B相為乙腈(3.1.2)；A+B=40+60。C條件f)離子源：電噴霧離子源(ESI)。序號(hào)化合物名稱(min) 0.5012.9297.8*.877C定