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小麥抗病蟲性評價技術規(guī)范

第1部分：小麥抗條銹病評價技術規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小麥抗條銹病鑒定技術和抗性評價方法。

本文件適用于普通小麥（包括選育品種/系、地方品種、特殊遺傳材料、近等基因系、重組自交系、

DH群體）、雜交小麥、轉基因小麥、其它栽培小麥種、野生小麥、小麥野生近緣種對小麥條銹病

抗性的田間鑒定和評價。

2術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

2.1

抗病性diseaseresistance

植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。

2.2

慢銹性slowrusting

在適于病害發(fā)生的環(huán)境條件下，寄主植物和病原物相互作用表現(xiàn)侵染型為3型-4型的感病反應，

但田間病害發(fā)展速度相對較慢，終期病情指數(shù)低于25。

2.3

致病性pathogenicity

病原物所具有的破壞寄主和引起病變的能力。

2.4

人工接種artificialinoculation

在適宜條件下，通過人工操作將接種體放于植物體感病部位并使之發(fā)病的過程。

2.5

病情級別diseaseratingscale

植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。

2.6

抗性評價evaluationofresistance

根據(jù)采用的技術標準判別寄主植物對特定病蟲害反應程度和抵抗水平的定性描述。

2.7

分離物isolate

采用人工方法從植物發(fā)病部位獲得的在特定環(huán)境條件下培養(yǎng)的病原物。

2.8

接種體inoculum

能夠侵染寄主并引起病害的病原體。

2.9

生理小種physiologicalrace

病原菌種、變種或專化型內的分類單位，各生理小種之間形態(tài)上無差異、但對具有不同抗病基因的

鑒別品種的致病力存在差異。

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2.10

鑒別寄主differentialhost

用于鑒定和區(qū)分特定病原菌生理小種或菌系的一套帶有不同抗性基因的寄主品種。

2.11

普遍率incidence

或稱發(fā)病率，發(fā)病植物體單元數(shù)占調查植物體單元總數(shù)的百分率，用以表示發(fā)病的普遍程度。在本

文件中，植物體單元為葉片。

2.12

嚴重度severity

發(fā)病植物單元上發(fā)病面積或體積占該單元總面積或總體積的百分率，亦可用分級法表示，即將發(fā)病

的嚴重程度由輕到重劃分出幾個級別，分別用一些代表值表示，說明病害發(fā)生的嚴重程度。

2.13

病情指數(shù)diseaseindex

是全面考慮發(fā)病率與嚴重度兩者的綜合指標。當嚴重度用分級代表值表示時，病情指數(shù)計算公式：

nn

DI(XiSi)/(XiSmax)100

i0i0

其中，DI為病情指數(shù)，i為病級數(shù)（0~n），Xi為i級的單元數(shù)，Si為i級嚴重度的代表值，Smax為

嚴重度最高級值，∑為累加符號，從０級（無病單位）開始累加。

當嚴重度用百分率表示時，則用以下公式計算：

DI＝I×S×100

其中，I為普遍率，為嚴重度。

2.14

侵染型infectiontype

根據(jù)小麥過敏性壞死反應有無和其強度劃分的病斑類型，用以表示小麥品種抗條銹病程度，按0、

0；、1、2、3、4六個類型記載，各類型可附加“＋”或“－”號，以表示偏重或偏輕。

2.15

潛育期latentperiod

病菌侵染小麥建立寄生關系后到被接種小麥表現(xiàn)癥狀之前的這一時期稱為潛育期。

2.16

小麥條銹病wheatyellowrustorstriperust

由小麥條銹病菌PucciniastriiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn所引起的以葉部產(chǎn)生鐵銹狀病斑

癥狀的小麥病害。小麥條銹病主要危害葉片，也可危害葉鞘、莖稈和穗部。小麥受害后，葉片表面長出

褪綠斑，以后產(chǎn)生黃色粉皰，即病菌夏孢子堆，后期長出黑色皰斑，即病菌冬孢子堆。夏孢子堆鮮黃色，

窄長型至長橢圓形，成株期排列成條狀與葉脈平行，幼苗期不成行排列，形成以侵染點為中心的多重輪

狀。冬孢子堆狹長形，埋于表皮下，成條狀。

3病原物接種體制備

3.1條銹菌接種菌株分離

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采集具有典型條銹病病斑的小麥發(fā)病葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中，平展葉片，浸泡16h～24h，

用刀片刮取發(fā)病病斑，將刮下的夏孢子涂抹于感病品種銘賢169上，均勻噴霧，置于9℃～13℃的保濕

間內黑暗保濕18h～24h，15d～17d后觀察發(fā)病情況，獲得分離物。分離物經(jīng)形態(tài)學鑒定確認為Puccinia

striiformisWest.f.sp.triticiEriksetHenn后，進行單孢純化，經(jīng)致病性測定后，擴繁保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2條銹菌分離菌株的生理小種鑒定

對用于抗性鑒定接種的條銹菌應先進行生理小種鑒定。生理小種鑒定采用一套統(tǒng)一的鑒別寄主（見

附錄A），根據(jù)條銹菌與鑒別寄主相互作用產(chǎn)生的抗病或感病模式（見表A.1），確定不同菌株所屬的生

理小種。

3.3條銹菌繁殖和保存

3.3.1育苗

選用直徑為10cm，高度為10cm的花盆，裝富含有機質的土壤，每盆播種20?！?5粒健康飽滿感

病品種銘賢169，覆土1cm，之后將育苗缽置于盛水的育苗盤內，使水從育苗缽底部緩慢吸收至土體表

面完全濕潤，移出，置于15℃～18℃溫室內培養(yǎng)6d～8d，待用。

3.3.2接種和保濕

接種：在操作臺（或接種間）內進行。首先用噴霧法凈化空氣，再用75％的乙醇對操作臺（接種

間）、接種針和手進行消毒。將待接種幼苗放在操作臺（接種間）上，在幼苗轉移時要套袋或采取其它

措施防止空氣中的孢子污染；寫標簽，記錄接種日期及接種的菌種編號；用手沾取小麥葉銹菌夏孢子（或

者從標樣保濕后刮取的少量夏孢子），接種到無菌苗的第一葉片上。

保濕：將接種后幼苗置于接種桶中，用清水噴霧，使葉片表面附著一層均勻的霧滴，密封，在9oC～

13oC黑暗條件下保濕18h～24h。

3.3.3菌種繁殖

菌種繁殖分為初繁和擴繁。

初繁：條銹菌夏孢子在銘賢169上繁殖。待繁菌苗銘賢169第一葉片全部展開后，從液氮中取出保

存菌種的安瓿瓶，在40oC～45oC溫水中活化5min，之后打開安瓿瓶，置于盛有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，

于8oC～10oC黑暗條件下水化10h～12h。

初繁采取涂抹法：此法主要用于繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時應用。從安瓿瓶或指形管中取

出少許條銹菌夏孢子放在潔凈的毛玻璃上，用滴管加入少量水，用接種針將條銹菌夏孢子與水拌勻備用。

另外用潔凈的手指沾清水或0.05%吐溫20（Tween20）水溶液將麥苗的葉片摩擦數(shù)次，去掉葉片表面的

蠟質和茸毛，以利于菌液吸附于葉面上。用消毒過的接種針沾上調制好的孢子懸浮液，涂抹于麥葉正面，

插標簽，記錄接種日期及所用菌種。接種后把麥苗隨即放入保濕桶中，再用噴霧器噴霧，使麥苗和保濕

桶的內壁沾滿霧滴，噴霧不能過量。噴霧后，馬上蓋嚴塑料薄膜或玻璃，把保濕桶放置在9oC～13oC黑

暗條件下保濕18h～24h。

在接種不同生理小種時，接種用的一切用具都要先行消毒，防止可能發(fā)生的污染。

擴繁：可采用涂抹法、掃抹法、噴（撒）粉法或噴霧法接種。

掃抹法：先將一葉期的銘賢169置于接種桶內，用0.05%的Tween20水溶液葉面噴灑，然后將發(fā)

病幼苗倒置，使病葉片在接種桶內的無菌苗上掃抹3次～5次，再用0.05%的Tween20水溶液噴霧，使

葉片表面附著一層均勻的霧滴，密封，置于9oC～13oC黑暗條件下保濕18h～24h。

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噴（撒）粉法：小噴粉器（或用雙層紗布封口的玻璃試管）經(jīng)消毒、干燥后，按20:1～30:1的比

例均勻混合干燥滑石粉與條銹菌夏孢子粉。接種前，用手沾清水將葉片拂擦數(shù)次，以去掉葉片蠟質，用

噴霧器在麥苗上均勻噴上霧滴，隨即用噴粉器（或用雙層紗布封口的玻璃試管）將上述稀釋的孢子粉均

勻地噴灑（或抖落）到葉片上，再用清水噴霧，隨即放入保濕桶中，蓋上塑料薄膜，置于9oC～13oC黑

暗條件下保濕18h～24h。

噴霧法。用小型噴霧器將新制備好的孢子懸浮液（在小燒杯內，加入要接種的條銹菌孢子，先用少

量清水濕潤，攪成糊狀，按照2g:1000mL比例加入水，轉移至噴霧器內；或按10mg夏孢子:1mL無毒

輕量礦物油－Soltrol?170的比例稀釋成夏孢子懸浮液）噴在葉片已去除蠟質的麥苗上，自然干燥15

min～30min，然后將麥苗放于保濕桶內置于9oC～13oC黑暗條件下保濕18h～24h。

噴（撒）粉法及噴霧法適于對大量材料的接種鑒定。

3.3.4潛育發(fā)病

取出接種苗，置于可控溫度的溫室內培養(yǎng)。保持晝溫15oC～19oC，夜溫10oC～14oC；光照強度：

6000Lux～10000Lux，光照時間：16h。待葉片顯斑時（接種后7d），剪去心葉，加玻璃罩隔離。接種

后約15d～17d，夏孢子即可成熟，待用。

3.3.5菌種收集

空氣凈化和器具消毒操作同3.3.2，輕取產(chǎn)孢麥苗小心橫放，用接種針輕輕抖動其葉片，使菌種散

落到玻璃罩內，移去麥苗，再輕敲玻璃罩，將菌種集中，裝入指形管。

3.3.6菌種保藏

根據(jù)待用時間的長短，菌種保藏可分短期保藏和長期保藏。

3.3.6.1短期保藏

當菌種在5d～6d內使用時，將裝菌種的指形管放入盛有變色硅膠的干燥器內，置于0℃～5℃冰箱

中備用。

3.3.6.2長期保藏

當菌種將在第二年或更長時間使用時則可采用長期保藏。首先將菌種置于盛有變色硅膠的干燥器

內，放在0℃～5℃冰箱中干燥5d，然后移至安瓿管中，抽真空，封管，置于液氮或-80℃冰箱中。

4田間抗性鑒定

田間抗性鑒定在鑒定圃內進行。

4.1鑒定圃選址

鑒定圃設置在小麥條銹病適發(fā)區(qū)，選擇具備良好自然發(fā)病環(huán)境和可控灌溉條件、地勢平坦、土壤肥

沃的地塊。

4.2感病對照品種和誘發(fā)行品種選擇

鑒定所用感病對照和誘發(fā)行品種均采用銘賢169。

4.3鑒定圃田間配置及大田播種

4.3.1田間配置

鑒定圃采用開畦條播、等行距配置方式。畦埂寬50cm，畦寬250cm，畦長視地形、地勢而定；距

畦埂125cm處順畦種1行誘發(fā)行，在誘發(fā)行兩側20cm橫向種植鑒定材料，行長100cm，行距33cm，

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重復1次～3次，順序排列，編號，鑒定圃四周設100cm寬的保護區(qū)。

說明：：矩形框表示畦埂；

：實線表示誘發(fā)行和對照品種；

：表示鑒定材料

圖1鑒定圃田間配置示意圖

4.3.2播種

4.3.2.1播種時間

播種時間與大田生產(chǎn)一致，或適當調整不同材料的播期以使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候

條件（濕度與溫度）相遇。冬性材料按當?shù)貧夂蛘Ｇ锊?，弱冬性材料晚秋播，春性材料頂凌春播?/p>

4.3.2.2播種方式及播種量

采用人工開溝，條播方式播種。每份材料播種1行，每隔20份鑒定材料播種1行感病對照品種銘

賢169，鑒定材料每行均勻播種100粒；誘發(fā)行按每100cm行長均勻播種100粒。

4.4接種

4.4.1接種期

小麥條銹病抗性鑒定接種期為小麥拔節(jié)初期。選擇晴朗無風天的傍晚進行。

4.4.2接種方法

采用夏孢子懸浮液噴霧法、噴（撒）粉法或注射法接種誘發(fā)行，利用誘發(fā)行發(fā)病后產(chǎn)生的夏孢子再

傳播侵染鑒定材料。根據(jù)鑒定需要選擇單小種或混合小種。具體操作是將所選生理小種的夏孢子粉用數(shù)

滴0.05%的Tween20水溶液調成糊狀，按2g孢子:1000mL水比例稀釋成夏孢子懸浮液。誘發(fā)行每隔500cm

設100cm長的接種段，用手持式噴霧器將夏孢子懸浮液均勻噴灑在接種段的小麥葉片上，之后速覆蓋

塑料薄膜，四周用土壓嚴，次日清晨揭去薄膜。

注射法。此法多用于麥苗有一定生長高度的拔節(jié)期。接種前，應配制好孢子懸浮液（配制方法同噴

霧法），一般在誘發(fā)行上每隔100cm左右選取10個～20個單莖分別注射接種。其方法是用注射器將孢

子懸浮液從小麥心葉與其下的展開葉葉鞘相接處以下約1cm處注射，針頭易向下傾斜刺入，但不要刺

穿，擠壓少量懸浮液，以見到心葉處冒出水珠為度。懸浮液必須隨用隨攪拌或震蕩。田間接種注射最好

在陰天的傍晚進行。如天氣干旱，接種后在接種點上澆水1次～2次，也可以在接種前或接種后適當灌

水。

再次接種時，間隔3d～5d，并選擇誘發(fā)行不同的接種段接種。

4.5接種前后田間管理

在接種前6d～7d應先進行田間灌溉，或在雨后接種；接種后若遇持續(xù)干旱，應及時進行田間澆灌，

不施用任何殺菌劑。

4.6病情調查及記載標準

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4.6.1調查時間

在小麥乳熟期進行病情調查。

4.6.2調查方法及項目

調查時每份材料隨機抽樣20個~50個葉片（主要為旗葉），逐葉進行調查記載嚴重度、侵染型，計

算普遍率、平均嚴重度和病情指數(shù)，調查2次，間隔10d。

4.6.3發(fā)病程度記載及標準

4.6.3.1侵染型記載及標準

病斑侵染型按0、0；、1、2、3、4六個類型劃分，其劃分標準見表1，各類型可附加“＋”或“－”

號，以表示偏重或偏輕，用以表示小麥品種抗銹程度。每一鑒定材料隨機調查20片~50片葉，逐葉調

查記載侵染型，當發(fā)現(xiàn)同一葉片上出現(xiàn)不同侵染型時，主要侵染型記錄在前。

表1小麥條銹病侵染型級別及其癥狀描述

侵染型癥狀描述

0葉上不產(chǎn)生任何可見的癥狀

0；葉上產(chǎn)生小型枯死斑，不產(chǎn)生夏孢子堆

1葉上產(chǎn)生枯死條點或條斑，夏孢子堆很小，數(shù)目很少

2夏孢子堆小到中等大小，較少，其周圍葉組織枯死或顯著褪綠

3夏孢子堆較大、較多，其周圍葉組織有褪綠現(xiàn)象

4夏孢子堆大而多，周圍不褪綠

注：侵染型級別經(jīng)常用如下符號進行精細劃分，即“－”表示夏孢子堆較其相應正常侵染型的夏

孢子堆略?。弧埃保罕硎鞠逆咦佣演^其相應正常侵染型的夏孢子堆略大。

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圖小麥條銹病苗期和成株期分級標準圖（引自ChenXM.2020.FoodSecurity.）

4.6.3.2嚴重度記載及標準

嚴重度用分級法表示，設0、1%、5﹪、10﹪、20﹪、40﹪、60﹪、80﹪、100﹪九級。調查時每

份材料隨機抽樣20片~50片葉，逐葉記載嚴重度，計算平均嚴重度。

nn

×％

S(%)(XiSi)/Xi100

i1i1

其中，S為平均嚴重度，i為病級數(shù)（1~n），Xi為病情為i級的單元數(shù)，Si為病情為i級的嚴重度值

（如小麥條銹病各級的百分數(shù)）。

4.6.3.3普遍率記載及標準

每一鑒定材料隨機調查20片~50片葉，計數(shù)發(fā)病葉片數(shù)，計算普遍率。

普遍率（%）＝（發(fā)病葉片數(shù)/調查總葉片數(shù)）×100％

4.7抗性評價

4.7.1鑒定有效性判別

當鑒定圃中的感病或高感對照品種發(fā)病嚴重度達到60%以上，該批次抗條銹病鑒定視為有效。

4.7.2重復鑒定

初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、中抗的材料，次年需用相同的病原菌進行重復鑒定。

4.7.3抗性評價標準

依據(jù)鑒定材料發(fā)病程度（病情指數(shù)和侵染型）確定其對條銹病的抗性水平，其評價標準見表2。如

果兩年鑒定結果不一致，以抗性弱的發(fā)病程度為準。若一個鑒定群體中出現(xiàn)明顯的抗、感類型差異，應

在調查表中注明“抗性分離”，其比例以“/”隔開。

表2小麥對條銹病抗性評價標準

侵染型病情指數(shù)抗性評價

0－免疫Immune（I）

0；－近免疫Nearlyimmune（NIM）

1－高抗HighlyResistant（HR）

2－中抗Moderatelyresistant（MR）

3～4≤25慢銹Slowrusting（SR）

3＞25中感Moderatelysusceptible（MS）

4>25高感HighlySusceptible（HS）

5鑒定記載表格

小麥抗條銹病鑒定原始記錄及結果記載表格見附錄B。

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附錄A

（資料性附錄）

小麥條銹病病原菌和生理小種

A.1學名和形態(tài)描述

條形柄銹菌小麥?；蚉ucciniastriiformisWest.f.sp.triticiEriks&Henn.

屬真菌界（Fungi）、擔子菌門（Basidiomycota）、柄銹菌亞門Pucciniomycotina、柄銹菌

綱Pucciniomycetes、柄銹菌目Pucciniales、柄銹菌科（Puccinaceae）、柄銹菌屬（Puccinia）。

菌絲絲狀，有分隔，生長在寄主細胞間，用吸器進入小麥細胞吸取養(yǎng)料，在病部產(chǎn)生孢子堆。

夏孢子單胞球形，鮮黃色，表面有細刺，大?。?2～40）μm×（22～29）μm，有發(fā)芽孔6～

12個。冬孢子雙胞，棍棒形，頂部扁平或斜切，分隔處略縊縮，大?。?6～68）μm×（12～

20）μm，柄短。該菌致病性有生理分化現(xiàn)象，我國已定名34個生理小種，分別為條中1號～

34號，條銹菌生理小種很易發(fā)生變異，1950年以后已出現(xiàn)過多次優(yōu)勢小種的改變。

A.2生理小種鑒定方法

A.2.1采用的鑒別寄主

生理小種鑒別寄主采用TrigoEureka.，F(xiàn)ulhard，保春128（Lutescens128），南大2419

（Mentana），維爾（Virgilio），阿勃（Abbondanza），早洋（EarlyPremium），阿夫（Funo），

丹麥1號（Danish1），尤皮2號（Jubilejina2），豐產(chǎn)3號（Fengchan3），洛夫林13（Lovrin13），

抗引655（Kangyin655），水源11（Shuiyuan11），中四（Zhong4），洛夫林10（Lovrin10），

Hybrid46，Triticumspeltaalbum和貴農(nóng)22（Guinong22）共19個小麥品種。

A.2.2條銹菌生理小種編碼規(guī)則與命名

中國小麥條銹菌生理小種和致病類型及其在鑒別寄主上的反應見表A.1。

表A.1中國小麥條銹菌生理小種和致病類型及其在鑒別寄主上的反應

洛10類群洛13類群Hybrid46類群水源11類群貴農(nóng)22類群

條條條條條條條條

條洛洛條洛洛洛條條條HHHHHH水水水水水水條貴貴貴

中中中中中中中中

鑒別寄主中1010中131313中中中YYYYYY111111111111中222222

1718212223242526

282930313234-1-1-2

號號號號號號號號

號26號238號號號45678945671314號40845

1.T.E.HLLHLHHHLHLHLHHHHHHHHHHHLHHLLHLHLHHHHHLHSSSS

2.FulhardHLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

3.保春128LHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

4.南大2419HLLHHLHHHHLHLHLHHHHHHHHHHHHHHHLHHHSSSS

5.維爾LLLLLLHLHLLHLHHHHHHHLHHLHLHLLHLLHLLHLSSSS

6.阿勃HLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

7.早洋HLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

8.阿夫LLHHLHHHHLHHHHHHHHHHHHHHLHHHHHHHHHSSSS

9.丹麥1號LHHLHLHLHLHHHHHHHHHHHHHHLHHHHHHHHHSSSS

10.尤皮Ⅱ號LLHHLLLLLLHLLHHLLHHHLHHHHLHLHLHHSSSS

11.豐產(chǎn)3號LHLHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHSSSS

12.洛夫林13LLLLLLLLLLLHHHHHHHLLLHHLLLLHLHSSSS

13.抗引655LLLHLLLLLLLLLHLLLHHHLHLHHLLLLHSSSS

14.水源11LLLLLLLLLLLLLLLLHHHHHHHHHHHHHHSSSR

15.中四LLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRRRR

16.洛夫林10LLLLLLLLHHHHHHHHHHHHLHHLHHLHLHSSRS

17.Hybrid46LLLLLLLLLLLLLLLHHHHHHHHHLLLLLLSRSS

18.T.speltaalbumLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRRRR

19.貴農(nóng)22LLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLSSRS

注：“L”表示抗病侵染型（0～2）；“H”表示感病侵染型（3～4）；表中僅列出部分主要生理小種在鑒別寄主上的反應

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

表B年小麥品種（系）抗條銹病鑒定原始記錄及結果記載表

病情級別

鑒定結果

嚴重度（%）普遍率（%）

編號品種名稱來源