消滅易錯生物技術(shù)與生物工程的科學前沿易錯

題組一發(fā)酵工程

1.酵母菌是一種單細胞真菌，與人類生活息息相關(guān)。轉(zhuǎn)基因啤酒酵母用于生產(chǎn)乙肝疫苗。耐

高糖的面包酵母（從自然界酵母種群篩選獲得）能利用面團中的糖類等營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生C02,

使面包松軟可口；止匕外，面包酵母含有豐富的氨基酸、維生素和微量元素等，能夠增加食品的

營養(yǎng)價值。下列相關(guān)說法錯誤的是（）

A.酵母菌細胞呼吸產(chǎn)生C02的場所有細胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體

B.通過選擇培養(yǎng)、基因工程育種可獲得優(yōu)良性狀的酵母菌種

C.做面包、饅頭，釀酒等，都是利用酵母菌的無氧呼吸原理

D.酵母菌細胞富含蛋白質(zhì)、維生素等，可以用作飼料添加劑

易錯分析：酵母菌是兼性厭氧單細胞真菌，在發(fā)酵工程中運用廣泛，做面包、饅頭等，是

利用酵母菌有氧呼吸產(chǎn)生大量二氧化碳，釀酒則是利用酵母菌的無氧呼吸原理。

2.我國具有悠久的釀酒文化和歷史?！短旃ら_物》中有“古來曲造酒，薨造醴”的記載，“曲”指

由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，“篥”指發(fā)芽的谷物，“醴”指甜酒。古人在冬季釀酒時，常

將谷物封存在陶器中并埋藏于地下進行保溫。下列敘述錯誤的是（）

A.釀酒過程中密封的主要目的是避免雜菌污染，從而提高酒的品質(zhì)

B.“曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長的重要因素

C.“造醴”時選擇“篥”的原因是發(fā)芽的谷物會釋放更多的淀粉酶

D.“篥造醴”時大部分糖的分解和代謝物的生成都在發(fā)酵階段完成

3.某研究小組采用濾膜法（如圖）對冰激凌中大腸桿菌數(shù)量是否超標進行檢測。已知飲用水標準

為1000mL自來水中大腸桿菌菌落數(shù)不能超過3個（37C培養(yǎng)48h）。下列敘述不合理的是（）

無菌保子

濾膜

37℃培養(yǎng)

伊紅-亞甲

藍瓊脂平板

注：大腸桿菌在含有伊紅-亞甲藍的瓊脂培養(yǎng)基上

生長，菌落呈深紫色并有金屬光澤

A.該實驗不需要對冰激凌原液進行梯度稀釋

B.實驗方案應(yīng)增設(shè)一組接種無菌水的組別作為對照

C.稀釋涂布平板法不可用于測定冰激凌中大腸桿菌數(shù)目

D.伊紅-亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基

4.農(nóng)桿菌是植物基因工程中常用到的一種細菌，下表為用來培養(yǎng)農(nóng)桿菌的LB培養(yǎng)基配方,

下圖是對培養(yǎng)的農(nóng)桿菌進行菌落計數(shù)的過程。下列敘述錯誤的是()

蛋白陳10.0g

酵母浸粉5.0g

NaCl10.0g

蒸儲水IL

配制完成后，將pH調(diào)至7.0

注：酵母浸粉以酵母為原料，經(jīng)自溶、酶解、濃縮、干燥等工藝制成。

A.上述LB培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，一般對細菌無選擇作用

B.圖中所用接種方法為稀釋涂布平板法

C.蛋白腺和酵母浸粉可以給農(nóng)桿菌提供碳源和氮源

D.若b、c、d中菌落數(shù)分別為48、57、60,則a中農(nóng)桿菌約為5.5xl()7個

5.西鳳酒是中國四大名酒之一，其歷史悠久，品質(zhì)上乘。據(jù)了解，西鳳酒是以土窖池為發(fā)酵

容器，而多年反復(fù)利用的窖池內(nèi)壁的窖泥中含有多種與釀酒有關(guān)的微生物。下列敘述錯誤的是

()

A.西鳳酒的釀造是以釀酒酵母為主的多種微生物共同作用下完成的

B.窖池中的各種微生物會形成相對穩(wěn)定的體系，從而不容易被雜菌污染

C.釀酒原料多以高粱、大麥等為主，經(jīng)發(fā)酵形成的酒糟中可分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物

D.若對分離出的釀酒酵母做擴大培養(yǎng)，則需在二氧化碳或氮氣環(huán)境中進行

易錯分析：擴大培養(yǎng)的目的是獲得更多酵母菌，與無氧呼吸相比，細胞有氧呼吸產(chǎn)生的能

量更多，更能滿足酵母菌大量繁殖時的需求，更需要有氧環(huán)境。

6.影印接種法是一種用于研究微生物抗藥性和篩選突變體的實驗技術(shù)。為檢測某種氨基酸缺

陷型菌株，實驗人員的實驗過程如圖所示，其中基本培養(yǎng)基中缺乏某種氨基酸，而完全培養(yǎng)基

中含有該種氨基酸。下列敘述正確的是（）

滅菌的絲絨布

經(jīng)誘變處待測絲絨布

理的菌液培養(yǎng)基吸附菌體

菌落完全培養(yǎng)基

A.影印接種法和稀釋涂布平板法相似，每個菌落都由單個菌體發(fā)育而來

B.過程②培養(yǎng)時絲絨布先轉(zhuǎn)印至完全培養(yǎng)基上再轉(zhuǎn)印到基本培養(yǎng)基上

C.應(yīng)從完全培養(yǎng)基上挑選出氨基酸缺陷型菌株用于后續(xù)的培養(yǎng)和研究

D.實驗結(jié)束后對培養(yǎng)皿進行消毒處理后即可再次使用或者廢棄

7.飲用被細菌污染的水后，細菌在消化道內(nèi)會繁殖并產(chǎn)生毒素，引起急性腸胃炎。某同學利

用圖1所示方法，檢測飲用水的細菌含量,圖2為不同稀釋度下得到的平板。下列相關(guān)敘述不

正確的是（）

1mL1mL1mL1mL

圖1圖2

A.配制圖1所示固體培養(yǎng)基時，需要先調(diào)整到適宜的pH,再分裝、滅菌

B.圖1中①?③三個培養(yǎng)皿菌落數(shù)的平均值乘稀釋倍數(shù)即為樣品中細菌數(shù)

C.圖2是稀釋涂布平板法的結(jié)果，統(tǒng)計的菌落數(shù)比活菌的實際數(shù)目要少

D.圖2所示的平板中，a和c的計數(shù)結(jié)果不適合用于計算樣品中的細菌數(shù)

8.如圖表示從土壤中分離出能分解石油的微生物的實驗操作過程：在某地土壤中取樣后，經(jīng)

過多次稀釋，將稀釋液接種到培養(yǎng)基上，經(jīng)過一定條件培養(yǎng)后，在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)①②③④⑤五

個菌落及透明圈。下列敘述錯誤的是（）

99mL4,5mL4,5mL4.5mL

無而水無蔭永無談永無而永

A.實驗所用的土壤樣本應(yīng)選自常被石油污染的土壤

B.通過稀釋涂布平板法接種的微生物已被稀釋IO4倍

C.該實驗所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分中唯一碳源來自石油

D.圖示五個菌落中，菌落⑤產(chǎn)生的酶分解石油的能力最強

9.生物興趣小組設(shè)計了一個利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實驗。其主要步驟是：先將粉

碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤中，噴水浸潤、接種菌T,培養(yǎng)一段時間后（清水淋洗

時菌T不會流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進行乙醇發(fā)酵。下列說法正確的是（）

浸潤、接種菌T清水淋洗

淋洗液自里電喜女乙醇

A.菌T可產(chǎn)生分解纖維素的酶，其分解產(chǎn)物是酵母菌的碳源

B.為了不破壞淋洗液中的營養(yǎng)物質(zhì)，對淋洗液進行巴氏消毒

C.為提高發(fā)酵的乙醇產(chǎn)量，需始終保持發(fā)酵瓶處于密閉狀態(tài)

D.發(fā)酵后，產(chǎn)生的乙醇使澳麝香草酚藍溶液由藍變綠再變黃

10.某研究小組為研究“使用公筷對餐后菜品細菌數(shù)量的影響”，進行了如下實驗：①配制培養(yǎng)

基并進行滅菌處理；②設(shè)置對照組和實驗組進行相關(guān)操作；③適宜條件培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各

組平板上菌落的平均數(shù)。下列敘述正確的是（）

A.①過程所使用的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基

B.②過程中采用平板劃線法進行接種

C.在培養(yǎng)基上進行計數(shù)后所得菌落數(shù)少于實際活菌數(shù)

D.使用公筷可以防止傳染病的原理是切斷細菌的傳染源

11.谷氨酸是生產(chǎn)谷氨酸鈉（味精）的原料，運用發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸需要用到谷氨酸棒狀桿菌,

下圖1是利用玉米淀粉作為材料制備谷氨酸的流程圖。圖2是細菌的增長曲線圖，其中階段3

表示穩(wěn)定期，是代謝產(chǎn)物（如谷氨酸）大量積累的時期。下列敘述錯誤的是（）

無機鹽毯種

?JL,

點.發(fā)酵液H谷氨回

1

―維T生素B尿/素無x菌空氣

圖1

A.谷氨酸棒狀桿菌與醋酸菌的代謝類型相同

B.培養(yǎng)谷氨酸棒狀桿菌和其他所有微生物時均需要添加維生素B

C.發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是接種菌種之后的發(fā)酵過程

D.在穩(wěn)定期添加營養(yǎng)物質(zhì)、流出發(fā)酵液有助于提高谷氨酸產(chǎn)量

12.某科研團隊在熱帶雨林土壤中分離獲得了高效分解纖維素的細菌，為探究影響其纖維素酶

活性的條件，設(shè)計了如表所示的實驗。下列敘述錯誤的是（）

試管底物和試劑實驗條件

1纖維素+2mL纖維素酶溶液30℃水浴；pH=7

2纖維素+2mL纖維素酶溶液①_____;pH=3

3纖維素+2mL纖維素酶溶液0。。水??；pH=?______

A.若試管1和試管2形成對比實驗，則①為30℃水浴處理

B.實驗結(jié)束時，試管1中的纖維素含量可能最低

C.試管3中纖維素酶的空間結(jié)構(gòu)在低溫條件下遭到破壞

D.可增加設(shè)置其他溫度和pH的試管以完善該實驗

13.谷氨酰胺酶（PG酶）是一種催化L-B-谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨的酶，能增大蛋白質(zhì)的

溶解性，提高食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的利用率。研究人員利用谷氨酰胺-甘氨酸（谷氨酰胺-甘氨酸遇

熱易分解）為唯一氮源從土壤中篩選產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，實驗過程如圖所示。下列敘述錯誤的

是（）

稀釋培養(yǎng)基1培養(yǎng)基II培養(yǎng)基山

A.該實驗不僅篩選出了產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，并且還對其進行了計數(shù)

B.金黃桿菌在培養(yǎng)基I和ni中的生長速度高于在培養(yǎng)基n的生長速度

c.培養(yǎng)基i~in中的氮源相同，三種培養(yǎng)基都是選擇培養(yǎng)基

D.PG酶的活性可以用單位時間內(nèi)催化L-B-谷氨酰胺水解生成氨的數(shù)量來表示

14.柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘貯藏期常見的病害之一?？咕氖且环N抑菌活性強、無

環(huán)境污染的生物多肽，目前已用于多種農(nóng)業(yè)病菌的防治。研究人員研究了抗菌肽對白地霉的抑

菌效果，并且對其作用機制進行了探究?；卮鹣铝袉栴}：

利用基因工程合成抗菌肽時，基本流程為：克隆目的基因一導入枯草桿菌一篩選菌種一誘導抗

菌肽表達一分離純化一功能研究。

(1)白地霉從柑橘中獲得其生長繁殖所需的水、無機鹽、—和—等營養(yǎng)物質(zhì)。

(2)為研究抗菌肽對白地霉的抑菌效果，現(xiàn)用無菌打孔器在果實相同部位打孔，每個打孔

處接種相同體積的處理液，比較15天后的病斑直徑。各組處理及結(jié)果見表。

組別12345

接種一定體抗菌肽溶液與病先加入抗菌肽溶抗菌肽溶液與病原

接種處理

積的病原菌原菌抱子懸浮液液,2h后接種病原X菌抱子懸浮液混合，

方式

抱子懸浮液混合后直接接種菌抱子懸浮液培養(yǎng)2h后接種

15天后

病斑直徑41.313.929.328.711.2

/mm

表中數(shù)據(jù)表明抗菌肽對白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果與抗菌肽、病原菌抱子懸浮

液接種順序有關(guān)，表中X為。與第2組相比，第5組抑菌效果更好的可能原因

是。

(3)一般情況下，電導率和離子濃度呈正相關(guān)，通過測量溶液電導率可以反映出溶液中離

子濃度的大小。研究人員將白地霉抱子與抗菌肽在無菌水中混合，測定電導率，培養(yǎng)一段時間

后，再次測定電導率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電導率明顯升高，據(jù)此推測抗菌肽抑制白地霉抱子的作用機制

可能是。

15.為調(diào)查某地人工湖的水質(zhì)狀況，科研小組進行了該湖水樣中的細菌培養(yǎng)、分離及計數(shù)等工

作?；卮鹣铝袉栴}：

(1)在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白膝”“葡萄糖”或

“NaN03"）。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是0

（2）通常采用—法檢測水樣中細菌含量。在接種前應(yīng)隨機取若干滅菌后的空白平板先行培

養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是。

（3）在進行樣品稀釋時，取10g水樣，加稀釋得到101倍稀釋液，再從中吸取—（操

作過程）得到102倍稀釋液，依次類推獲得105倍稀釋液，在該稀釋液倍數(shù)下，取3個平板分別

接種樣品溶液0.1mL,培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的菌落數(shù)分別是156、178、191,則每克

樣品中的細菌數(shù)量為個。

（4）科研人員將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分

進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。主要原因可能是一

（寫出2點即可）

題組二基因工程

1.下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗敘述錯誤的是（）

A.PCR過程中模板DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變

B.PCR擴增時需通過離心將各組分集中在微量離心管的底部

C.制備瓊脂糖凝膠時，需待凝膠溶液稍冷卻后加入適量的核酸染料混勻

D.可通過在紫外燈下觀察DNA條帶的分布及粗細程度來評價擴增的結(jié)果

易錯分析：PCR的原理：利用DNA半保留復(fù)制原理，因此新合成的兩個DNA分子中，一條

鏈是舊的而另外一條鏈是新的。

2.據(jù)研究，W基因在植物發(fā)育和逆境應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。研究人員將W基因的啟動

子（PW）與GUS基因相連，構(gòu)建擬南芥PW-GUS融合植株（GUS為報告基因，其表達產(chǎn)物可催

化無色底物變藍），用無色底物處理擬南芥幼苗的根，探究W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達

水平，下列敘述第誤的是（）

A.擴增W基因啟動子需2種引物，并在引物3,端加入酶切位點

B.PW和GUS基因進行雙酶切后，可通過T4DNA連接酶連接

C.培養(yǎng)擬南芥無菌苗的MS固體培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌

D.通過觀察根藍色深淺確認W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達水平

3.數(shù)字PCR技術(shù)被稱為第三代PCR,在核酸定量檢測中具有突出優(yōu)勢。該技術(shù)通過將一個樣

本稀釋分成幾十至幾萬份，并分配到不同的反應(yīng)單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分

子（DNA模板），在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增，擴增結(jié)束后對各個反應(yīng)單

元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析，計算初始樣品中靶標分子的拷貝數(shù)。據(jù)此分析，下列說法正確

的是（）

A.數(shù)字PCR技術(shù)僅適用于樣本中目標分子含量較高的材料

B.數(shù)字PCR技術(shù)遵循的基本原理是DNA的邊解旋邊復(fù)制

C.每個單元中加入等量的4種核糖核昔酸溶液作為擴增原料

D.每個單元中目標分子的兩條子鏈合成都是從5,端向3,端延伸

4.“篩選”是生物技術(shù)與工程中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯誤的是（）

A.胚胎移植前，需對通過體外受精或其他方式得到的胚胎進行質(zhì)量篩選

B.制備單克隆抗體時，需從分子水平篩選能產(chǎn)生多種抗體的雜交瘤細胞

C.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時，需從分子水平及個體水平進行篩選

D.發(fā)酵生產(chǎn)中，性狀優(yōu)良的菌種可以從自然界中篩選

5.蝦青素可由供胡蘿卜素在供胡蘿卜素酮化酶（BKT）和供胡蘿卜素羥化酶（CRTR-B）的作用下

轉(zhuǎn)化而來，具有抗衰老、增強免疫等功能。杜氏鹽藻是單細胞浮游植物，生長快，易培養(yǎng)，能

大量合成供胡蘿卜素?？蒲腥藛T利用“無縫克隆技術(shù)”（如圖1）構(gòu)建含BKT基因和CRTR-B基因

的表達載體（如圖2,3）,導入杜氏鹽藻，以實現(xiàn)蝦青素的工廠化生產(chǎn)，回答下列問題。

①--???—⑦

01__⑧

上游同源序列2BKT基因CRTR-B基因下游同源序列2

⑴獲取目的基因：紅球藻是天然蝦青素的重要來源，提取紅球藻的總DNA為—，設(shè)計

特異性引物擴增BKT基因和CRTR-B基因，此過程需要—（至少寫兩種）。

⑵構(gòu)建轉(zhuǎn)化載體:

①PCR獲取抗除草劑基因過程中，為確保基因兩端具有所需同源序列，需在引物的一端

添加對應(yīng)的同源序列。若將來需要將抗除草劑基因能夠從重組質(zhì)粒中切除，還需要在基因兩側(cè)

加入限制酶識別序列，則擴增抗除草劑基因時，設(shè)計的引物序列（5,-3,）為

A.抗除草劑基因部分序列+限制酶識別序列+同源序列

B.同源序列+抗除草劑基因部分序列+限制酶識別序列

C.同源序列+限制酶識別序列+抗除草劑基因部分序列

②科研人員利用“無縫克隆技術(shù)”同時將BKT基因和CRTR-B基因插入質(zhì)粒，形成的重組

質(zhì)粒對應(yīng)部位如圖2所示，推測此過程擴增CRTR-B基因所用的引物為—o

③最終形成的重組質(zhì)粒如圖3所示，其中atpA啟動子和psbA啟動子均為杜氏鹽藻葉綠體

啟動子，選用內(nèi)源性啟動子的目的是—o

(3)準備受體細胞：選取初始杜氏鹽藻涂布到杜氏鹽藻固體培養(yǎng)基進行第一次培養(yǎng)，一段

時間后，挑取生長良好的單藻落到杜氏鹽藻液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。期間可取藻液滴入血細胞

計數(shù)板，在顯微鏡下進行計數(shù)，第二次培養(yǎng)的目的是—。

(4)目的基因?qū)爰跋嚓P(guān)檢測：采用基因槍法將重組質(zhì)粒導入杜氏鹽藻葉綠體，一段時間

后，先用含—的培養(yǎng)基初篩已轉(zhuǎn)化的杜氏鹽藻，然后采用—技術(shù)檢測是否成功轉(zhuǎn)錄出隹胡

蘿卜素酮化酶和供胡蘿卜素羥化酶的mRNAo

(5)葉綠體轉(zhuǎn)化是植物基因工程的新熱點，葉綠體的諸多特點為葉綠體轉(zhuǎn)化提供優(yōu)勢，如

葉綠體基因組小，功能清晰，使基因操作方便；葉綠體具有自我復(fù)制功能，一個植物細胞可含

有多個葉綠體，每個葉綠體中含有多個基因組，可大大提高—；另外，葉綠體基因位于細胞

質(zhì)中，可有效避免—。

6.科研人員利用圖1所示材料構(gòu)建重組質(zhì)粒并導入大腸桿菌，以期獲得能監(jiān)測生物組織或環(huán)

境中四環(huán)素水平的“報警器”。限制酶識別序列及切割位點如下表。TetR基因是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基

因，GFp基因為綠色熒光蛋白基因，Ampr為氨葦青霉素抗性基因，ori為復(fù)制原點。請回答下

列問題：

DNA片段1

DNA片段2

限制酶EcoRIXbaISpeIBamHI

5'…GJAATTC...3，5'...T1CTAGA...3'5'...AICTAGT...3'5，...G|GATCC...3/

識別序列及切割位點

3'...CTTATG…5'3'...AGATCTT...5,3，…TGATCTA..53'...CCTAGTG…5'

（1）使用工具酶拼接DNA片段1和2,拼接后的片段連接處部分序列為5'—3,（寫出6

個堿基），TetR基因和GFP基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈—（“是”或“不是"）該拼接DNM的同一條鏈。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，選擇—對質(zhì)粒和拼接的DNA片段進行酶切，在DNA連接酶的作

用下恢復(fù)—鍵。再根據(jù)—的結(jié)果判斷重組質(zhì)粒的大小是否符合預(yù)期。

（3）將重組質(zhì)粒導入經(jīng)—理的大腸桿菌后，在含—的固體培養(yǎng)基中篩選出工程菌。

（4）工程菌監(jiān)測四環(huán)素的原理如圖2,當環(huán)境中含四環(huán)素時，該大腸桿菌工程菌—（能/不

能）發(fā)出熒光，其原因是

素

四

環(huán)

—

TetR蛋白

I

圖注：

-A促進

——I抑制

啟動子1TetR基因啟動子2GFP基因

圖2

7.細菌中的蛋白激酶Y感受外界刺激后，利用ATP將特異性底物A蛋白磷酸化，改變A蛋

白的活性從而應(yīng)答外界刺激，調(diào)控細菌的生長。研究者將Y基因（編碼蛋白激酶Y）與GFP基因

（編碼綠色熒光蛋白）拼接成Y-GFP融合基因（Y-GFP基因），導入載體,并表達出融合蛋白（Y-GFP

蛋白），以分析蛋白激酶Y的功能，實驗過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}。

注："?"?*5-IYYFP*白與AflE白等反應(yīng)，檢測培果

賽示無

(1)Y基因含有735個堿基對(bp),其編碼的肽鏈含有個氨基酸。通過PCR分別擴

增Y基因與GFP基因，配制的兩個反應(yīng)體系中不同的有(填標號)。

a.模板b.引物c.DNA聚合酶d.反應(yīng)緩沖液

(2)構(gòu)建Y基因與GFP基因的融合基因時，應(yīng)將Y基因中編碼終止密碼子的序列刪除，理

由是0

(3)據(jù)圖步驟一分析，為確保Y-GFP基因插入載體后完整表達，在構(gòu)建重組基因表達載體

時不能選擇EcoRI限制酶，理由是o

(4)為檢測Y-GFP蛋白的激酶活性，用Y-GFP蛋白、A蛋白和ATP組合實驗，四組實驗的

條件及電泳結(jié)果如圖步驟二所示。磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識別。若Y-GFP蛋

白有激酶活性，則后續(xù)實驗用磷酸化抗體檢測，能從電泳條帶檢測到信號的是泳道(從

泳道①-④中選填序號)，從Y-GFP蛋白功能角度分析，理由是,利用表達的具

有綠色熒光的Y-GFP蛋白還可開展的實驗有(答出1個即可)。

8.石油進入土壤后，會破壞土結(jié)構(gòu)，分散土粒，使土壤的透水性降低，而且石油中的有毒物

質(zhì)能通過農(nóng)作物進入食物鏈，最終危害人類。為解決石油污染問題，某科研小組從被石油污染

較嚴重的土壤中分離出了高效分解石油的細菌操作過程如圖1所示。欲將高效分解石油的目的

基因?qū)氪竽c桿菌中。目的基因(轉(zhuǎn)錄時以乙鏈為模板)和運載體質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)如圖2所示，LacZ

基因編碼產(chǎn)生的酶可以催化無色的X-gal分解產(chǎn)生藍色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落為白

色。不同限制酶的識別序列及切割位點如表所示?；卮鹣铝袉栴}:

取樣測

定石油

石油污染接種的含量

過的土壤

④無機固體

①制成細②擴大③無機液體培養(yǎng)基+石油

菌總液培養(yǎng)培養(yǎng)基+石油恒溫培養(yǎng)⑤無機液體培養(yǎng)基+

振蕩培養(yǎng)石油振蕩培養(yǎng)

圖1

BamHIEcoRIMfeIHindm

甲鏈5'

乙鏈3'

KpnIW基因

注%/為氨茉青霉素抗性基因、ZacZ為夕半乳糖甘酶基因。

圖2

限制酶BamHIEcoRIMfeIKpnIHindlll

識別序列和切割位點GJGATTCGJAATTCCJAATTGGGTACJCAJAGCTT

⑴圖1中過程②配制培養(yǎng)基時，向培養(yǎng)基中加入的唯一碳源是。

⑵將石油污染過的土壤樣品進行圖1中過程④的操作，目的是。

⑶根據(jù)題干提供的信息，在構(gòu)建重組質(zhì)粒前，應(yīng)選擇限制酶分別對質(zhì)粒和目的基因

進行切割，依據(jù)是o

(4)若用EcoRI和MfeI對按上述要求構(gòu)建好的一個重組質(zhì)粒進行完全酶切，會切成

個片段。

(5)將重組質(zhì)粒導入大腸桿菌后，接種到添加了等成分的培養(yǎng)基上，若呈現(xiàn)_____色的

菌落，即為含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落。

9.某自花傳粉植物的藥物P的合成依次受染色體上顯性基因A、B、D控制。研究人員通過

基因工程構(gòu)建含質(zhì)粒-A-B-D的大腸桿菌生產(chǎn)藥物P,下圖為基因表達載體的構(gòu)建過程，其中

AmpR代表氨葦青霉素抗性基因，TetR表示四環(huán)素抗性基因。引物1序列為5,-GGTCTAGACCTAGG-

3S引物2序列為5,-GGCCATGGGGTTCC-3,。限制酶的識別序列及切割位點(從左向右均為5—3，)

為KpnI(GGTAC」C)、XbaI(T’CTAGA)、BamHI(G’GATCC)、NeoI(C’CATGG)?；駼和D轉(zhuǎn)錄

的模板分別是a鏈和d鏈。根據(jù)所學知識回答下列問題：

引物1

(l)PCR擴增目的基因時，引物的作用是—。常采用—來鑒定PCR的產(chǎn)物。

(2)為保證A基因正確連接到質(zhì)粒上，需利用PCR1對A基因進行改造，所用引物1和引

物2上分別含有一酶的識別序列，則據(jù)圖判斷A基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈可能是一。一個A基

因經(jīng)過4輪循環(huán)后,得到的子代DNA分子中，只含有1種引物的DNA分子所占的比例為。

(3)為了實現(xiàn)圖中B基因和D基因的重疊延伸，PCR2和PCR3過程中需要分別在引物―

的5,端添加互補序列。過程②復(fù)性過程中會形成多種雜交雙鏈，其中能延伸得到B-D融合基因

的為圖中(填字母)雜交形成的DNAo

(4)為保證B-D融合基因與質(zhì)粒-A按圖中方式連接，需要在引物3和引物5中分別添加限

制酶—的識別序列。若篩選導入基因A-B-D的大腸桿菌，可將大腸桿菌依次放在含有氨茉

青霉素、四環(huán)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選的大腸桿菌即為目的菌。

題組三細胞工程與胚胎工程

1.細胞培養(yǎng)人造肉是指在特定的培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)基中利用動物干細胞培養(yǎng)出來的動物肉。

這種肉和真正的肉類有很多相似之處，目前尚處于研究階段?？蒲腥藛T使用豬肌肉干細胞，成

功研發(fā)出了我國第一塊細胞培養(yǎng)人造肉。有關(guān)敘述錯誤的是()

A.培養(yǎng)豬肌肉干細胞時使用液體培養(yǎng)基，通常需加入血清等天然成分

B.在培養(yǎng)豬肌肉干細胞時需要在95%空氣和5%CO2的混合氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

C.用于傳代培養(yǎng)的細胞都需要用胰蛋白酶等處理后再用離心法收集

D.幼齡動物的肌肉干細胞增殖能力強，可用于培養(yǎng)人造肉

易錯分析：傳代培養(yǎng)指的是將分瓶后的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進行傳代培養(yǎng)時，懸浮

培養(yǎng)的細胞直接用離心法收集；貼壁細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，

然后再用離心法收集。之后，將收集的細胞制成細胞懸液，分瓶培養(yǎng)。

2.動物體細胞融合后染色體核型不穩(wěn)定，來自某一方的染色體往往隨機丟失一至多條這種現(xiàn)

象常應(yīng)用于基因的定位。在甲型流感單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞在克隆化培養(yǎng)過程

中來自B淋巴細胞的染色體往往出現(xiàn)隨機丟失現(xiàn)象。下列敘述正確的是（）

A.注射甲型流感疫苗后，應(yīng)立即從相關(guān)動物的脾臟中獲得B淋巴細胞

B.雜交瘤細胞在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時可使用胰蛋白酶處理

C.若雜交瘤細胞丟失某染色體后不能分泌單克隆抗體，則該基因位于該染色體上

D.利用抗體檢測篩選的雜交瘤細胞克隆化培養(yǎng)將具有持續(xù)產(chǎn)生甲型流感抗體的能力

3.天山雪蓮是我國特有瀕危物種，含有黃酮類等多種次生代謝物，具有多種醫(yī)療功效。研究

人員通過植物細胞工程技術(shù)對天山雪蓮進行了開發(fā)、利用。下列敘述錯誤的是（）

A.可取雪蓮的愈傷組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導其長出芽和根，進而發(fā)育成完整植株

B.植物組織培養(yǎng)不同階段的培養(yǎng)基中植物激素的濃度及比例有所不同

C.利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖雪蓮不受季節(jié)、氣候等自然因素的限制

D.利用雪蓮任何部位的細胞進行植物細胞培養(yǎng)均可持續(xù)獲得黃酮類物質(zhì)

4.下列有關(guān)細胞工程技術(shù)的敘述正確的是（）

A.動物細胞培養(yǎng)過程中加入血清的培養(yǎng)基需要進行高壓蒸汽滅菌

B.大量制備一種單克隆抗體需要大量的B細胞和骨髓瘤細胞

C.核移植中的“去核”是指去除卵母細胞中的紡錘體-染色體復(fù)合物

D.受體母畜對移入子宮的外來胚胎會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

5.我國科學家利用體細胞核移植技術(shù)成功克隆了瀕臨滅絕的某地方牛種。下列敘述錯誤的是

（）

A.從該牛種耳上取的體細胞培養(yǎng)室需在合成培養(yǎng)基中加入血清

B.從牛卵巢中采集的卵母細胞需要在體外培養(yǎng)至Mil期

C.代孕母牛為重構(gòu)胚發(fā)育提供空間和營養(yǎng)，不會影響犢牛的遺傳物質(zhì)

D.胚胎移植前需要對供體牛與受體牛進行同期發(fā)情處理

易錯分析：體細胞核移植技術(shù)中，通常不需要對供體進行同期發(fā)處理。

6.科學家用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，兩種原生質(zhì)體經(jīng)PEG處理后

篩選出雜種細胞，其分裂產(chǎn)生的愈傷組織經(jīng)誘導形成再生植株。經(jīng)鑒定，再生植株同時表現(xiàn)出

煙草和擬南芥的部分性狀。下列敘述錯誤的是（）

A.蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細胞壁獲得原生質(zhì)體

B.利用PEG處理可提高細胞膜的流動性，從而促進兩種原生質(zhì)體的融合

C.用較高濃度的細胞分裂素處理雜種細胞產(chǎn)生的愈傷組織，有利于根的分化

D.雜種細胞誘導形成具有雙親部分性狀的再生植株是基因選擇性表達的結(jié)果

7.我國已將利妥昔單抗、重組人凝血因子VM、重組人生長激素等多款生物藥納入藥品集中大

量采購。利妥昔單抗主要用于治療多種淋巴癌，下列有關(guān)單克隆抗體制備的敘述，正確的是（）

A.制備單克隆抗體時要用到骨髓瘤細胞，是因為其能無限增殖

B.細胞融合結(jié)束后，兩兩融合的細胞都能在選擇培養(yǎng)基上存活

C.利妥昔單抗能準確識別抗原，只能用于淋巴癌的治療，不能用于淋巴癌的診斷

D.給小鼠反復(fù)注射淋巴癌細胞，從小鼠血清中分離出的抗體為利妥昔單抗

8.科研人員研究了不同濃度的聚乙二醇（PEG）對沙打旺和紫花苜蓿原生質(zhì)體融合率的影響，實

驗結(jié)果如圖，虛線代表最高融合率，異源融合率是指不同種的原生質(zhì)體發(fā)生融合的概率，已知

PEG濃度較高時對細胞有毒害作用。下列敘述錯誤的是（）

記七異源融合率/%

PEG濃度/%

A.PEG融合法還可用于誘導骨髓瘤細胞與B細胞融合

B.不同種的原生質(zhì)體的融合依賴于細胞膜具有一定的流動性

C.據(jù)圖可知，不同PEG濃度下同源融合率均大于異源融合率

D.PEG濃度為35%時誘導紫花苜蓿與沙打旺原生質(zhì)體融合的效果最好

9.成體組織細胞能夠被用于兩種不同意義的“克隆”，具體流程如圖所示。下列有關(guān)克隆的敘

述正確的是（）

■生殖性克隆

■0----牛犢

胚胎春入代孕

成體組織細胞

母體（子宮中）

細胞細胞

來自早期胚胎的細胞

分裂題

轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中

胚胎

成年母體的去核細胞

卵母細胞I囂?）

治療性克隆

A.圖中含“紡錘體”的細胞為Mil期卵母細胞，圖中代孕母體不需要處理即可植入胚胎

B.經(jīng)“細胞融合”形成的重組細胞中，細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)僅來自成年母體的卵母細胞

C.圖中“早期胚胎”內(nèi)部的空腔為囊胚腔，圖中兩種“克隆”均需要胚胎移植過程

D.圖中成體組織細胞需要培養(yǎng)，在培養(yǎng)前可用機械方法或用胰蛋白酶處理一段時間

10.隨著動物細胞工程和胚胎工程的迅猛發(fā)展，用引進的良種奶牛大量、快速繁殖滿足了我國

對奶類的大量需求。下圖表示畜牧業(yè)生產(chǎn)上培育某種優(yōu)良種牛的兩種方法，相關(guān)分析錯誤的是

（）

方法I

公牛（A牛）-------?精子\

V-受精卵----?胚胎一［I-E牛

激素「卵子/1

處理丹it?自

良種奶牛（B牛）三母牛子呂

芳濟￡..........匚苑每個'細遛稼.............

細胞,去核卵母細胞’

，―重構(gòu)胚」牛

良種奶牛（C牛）一＞乳腺細胞一細胞核/

A.通過方法I、n培育優(yōu)良種牛E和F的本質(zhì)都是有性生殖

B.方法I中B牛的卵子需培育到MH期才具備與精子受精的能力

C.在卵細胞膜和透明帶的間隙觀察到兩個極體可作為受精的標志

D.方法I、II獲得的胚胎通常需培養(yǎng)至囊胚階段再移植入D牛的子宮內(nèi)

11.胚胎工程技術(shù)的應(yīng)用為優(yōu)良牲畜的大量繁殖提供了有效的解決辦法，如奶牛活體采卵一體

外胚胎生產(chǎn)（OPU-IVP）技術(shù)，該技術(shù)流程如圖。已知雄性奶牛Y染色體上有一段雄性特異的高

度重復(fù)序列，依據(jù)該重復(fù)序列設(shè)計弓I物，建立了用于奶牛胚胎性別鑒定的PCR體系（SRY-PCR）。

下列敘述錯誤的是（）

A.體外受精后，在透明帶和卵細胞膜間觀察到兩個極體說明受精成功

B.活體采卵前誘導母牛超數(shù)排卵所注射的激素只能作用于特定細胞

C.取滋養(yǎng)層細胞進行SRY-PCR,應(yīng)選擇結(jié)果為陽性的胚胎進行移植

D.受體母牛不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，所以移植前不需要進行免疫檢查

12.生物技術(shù)的進步在給人類帶來福祉的同時，也引起人們對它安全性及倫理問題的關(guān)注。下

列敘述正確的是（）

A.證明轉(zhuǎn)基因食品安全比證明其不安全更容易

B.可用口味、顏色指標判斷是否是轉(zhuǎn)基因作物

C.不允許、不接受進行任何生殖性克隆人實驗

D.在特殊情況下可利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造致病菌

13.［多選］駱駝蓬分布在干旱和半干旱地區(qū)，能防風固沙。駱駝蓬合成的多種生物堿具有抗腫

瘤作用。科研人員利用駱駝蓬下胚軸進行育苗和生物堿提取，過程如下圖。下列說法錯誤的是

（）

工簿胞一國1gg

__________

舞著髓旦回朝更嘉空繇望金遁

A.下胚軸切段需依次用酒精和次氯酸鈉進行消毒處理

B.除培養(yǎng)基中植物激素比例不同外，進行過程①③的其他條件相同

C.由無毒下胚軸經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的駱駝蓬無毒幼苗可抵抗病毒的侵染

D.在①②③過程中利用PEG處理培養(yǎng)物，可以獲得染色體數(shù)加倍的駱駝蓬

14.［多選］華西牛是我國育種專家培育的具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的專門化肉牛新品種，打破了

我國肉牛種源嚴重依賴進口的局面?？蒲腥藛T在生產(chǎn)中采取胚胎工程的手段實現(xiàn)了華西牛的快

速繁育。下列敘述正確的是（）

A.采集的華西牛精子需要進行獲能處理后在適當?shù)呐囵B(yǎng)液中完成受精

B.可以采用孕激素對華西牛母牛進行超數(shù)排卵處理，以發(fā)揮其繁殖潛力

C.受體母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要對其進行同期發(fā)情處理

D.犢牛的遺傳性狀由華西牛公牛及母牛決定，不受受體母牛的影響

15.“人造精子”是一種可替代精子使卵細胞“受精”的單倍體胚胎干細胞?？茖W家將某種動物單

倍體胚胎干細胞注射到卵細胞中成功培育出健康的該種動物。該技術(shù)不僅為動物模型的獲得提

供了新手段，同時也為動物生殖、遺傳與發(fā)育調(diào)控機理研究提供了新思路。右圖是科研人員利

用胚胎操作技術(shù)，通過兩種方式獲得重組細胞，進而培育出該種動物“人造精子”的流程。請回

答下列問題:

減數(shù)分裂n中期0

卵母細胞單倍體擴增總單倍體胚胎

細胞分選0干細胞系

⑴方式一成功獲得“人造精子”的關(guān)鍵操作是及時去除—的細胞核。

(2)方式二中選擇卵母細胞作為受體細胞的原因是卵母細胞具有(答兩點)的優(yōu)點，操

作中注入完整的精子而非精子的細胞核，原因是—。

(3)目前，構(gòu)建成功的該動物單倍體胚胎干細胞系，均為性染色為X染色體的細胞系，無

法獲得性染色體為Y的單倍體胚胎干細胞系，這與該生物Y染色體比X染色體短小有關(guān)。據(jù)

此推測可能的原因是。若將成功構(gòu)建的“人造精子”與卵細胞結(jié)合繁殖正常的二倍

體動物，該動物的性別是。

16.生命孕育的過程是神奇和復(fù)雜的，包括受精卵的形成和胚胎發(fā)育?；卮鹣铝袉栴}：

(1)在受精過程中，為保證1個卵母細胞只結(jié)合1個精子，卵細胞會發(fā)生相關(guān)生理反應(yīng)，

發(fā)生這些生理反應(yīng)的結(jié)構(gòu)依次為、o

(2)受精卵形成后即在(填“卵巢”“輸卵管”或“子宮”)內(nèi)進行有絲分裂，這一階段在透

明帶內(nèi)進行，細胞只分裂不生長，胚胎體積,以確保胚胎順利從受精場所適時輸出。

隨后，透明帶破裂、胚胎從中伸展出來繼續(xù)發(fā)育，這一過程稱為o

⑶胚胎發(fā)育時，母體通過形成透明纖維層，防止胚胎細胞植入過深而損傷子宮內(nèi)膜；胚

胎的胎盤細胞則分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG),抑制母體淋巴細胞的活動；此后胎兒為了獲

得更多的養(yǎng)料，還會導致母體的血壓升高，促進更多血液流入子宮，以獲得更多的營養(yǎng)。

①胎盤是由囊胚的發(fā)育而成的。

②母體對胎兒不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，由題分析，其原因可能是e

③HCG可通過腎小球從尿液中排出。用抗HCG單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”,

在妊娠第8天就可以通過檢查尿液作出診斷。請簡述利用從經(jīng)HCG免疫的小鼠體內(nèi)采集的B

淋巴細胞(簡稱B淋巴細胞)、小鼠骨髓瘤細胞制備抗HCG單克隆抗體的主要流程：(用

箭頭和文字表示)。

題組四生物與技術(shù)與工程綜合

1.(2024.北京?高考真題)啤酒經(jīng)酵母菌發(fā)酵釀制而成。生產(chǎn)中，需從密閉的發(fā)酵罐中采集酵母

菌用于再發(fā)酵，而直接開罐采集的傳統(tǒng)方式會損失一些占比很低的獨特菌種。研究者探究了不

同氧氣含量下酵母菌的生長繁殖及相關(guān)調(diào)控，以優(yōu)化采集條件。

(1)酵母菌是兼性厭氧微生物，在密閉發(fā)酵罐中會產(chǎn)生________和CO2。有氧培養(yǎng)時，酵母

菌增殖速度明顯快于無氧培養(yǎng)，原因是酵母菌進行有氧呼吸，產(chǎn)生大量_______。

(2)本實驗中，采集是指取樣并培養(yǎng)4天。在不同的氣體條件下從發(fā)酵罐中采集酵母菌，

統(tǒng)計菌落數(shù)(圖甲)。由結(jié)果可知，有利于保留占比很低菌種的采集條件是—o

700

有氧：18%02

500低氧:6%。2

300

3

0

有氧/有氧有氧/低氧無氧/低氧無氧/無氧

氣體條件(取樣培養(yǎng))

甲

(3)根據(jù)上述實驗結(jié)果可知，米集酵母菌時02濃度的陡然變化會導致部分菌體死亡。研究

者推測，酵母菌接觸02的最初階段，細胞產(chǎn)生的過氧化氫(H2O2)濃度會持續(xù)上升，使酵母菌

受損。已知H2O2能擴散進出細胞。研究者在無氧條件下從發(fā)酵罐中取出酵母菌，分別接種至

含不同濃度H2O2的培養(yǎng)基上，無氧培養(yǎng)后得到如圖乙所示結(jié)果。請判斷該實驗?zāi)芊裢耆C實

上述推測，并說明理由。

0mmol?L_,3.75mmol?L-15.00mmol?L達。?濃度

乙

（4）上述推測經(jīng)證實后，研究者在有氧條件下從發(fā)酵罐中取樣并分為兩組，A組菌液直接

滴加到H2O2溶液中，無氣泡產(chǎn)生；B組菌液有氧培養(yǎng)4天后，取與A組活菌數(shù)相同的菌液,

滴加到H2O2溶液中，出現(xiàn)明顯氣泡。結(jié)果說明，酵母菌可通過產(chǎn)生______以抵抗H2O2的傷

害。

2.嵌合抗原受體-T細胞（CAR-T細胞）療法在人類腫瘤治療中取得了重要突破。CAR-T細胞療

法是將CAR基因?qū)隩細胞成為CAR-T細胞，通過CAR蛋白上的scFv肽鏈（小肽不足以發(fā)

揮抗原作用，但能發(fā)揮抗體識別作用）特異性識別腫瘤細胞膜上的抗原，并通過CAR蛋白上的

其它肽鏈結(jié)構(gòu)激活CAR-T細胞繼而殺傷腫瘤細胞?；卮鹣铝袉栴}：

⑴獲得含有scFv肽鏈的單克隆抗體，流程如圖。

驅(qū)動細胞（人正常乳腺細胞）測試細胞

抽取腹水

反復(fù)免疫

第一組小鼠/取睥細胞，制

作雜交瘤細胞寸*

------------,丫4類

第二組小鼠

第一組小鼠反復(fù)免疫

第二組小鼠

抽取腹水

Y1類、丫2類、丫3類+

測試細胞

（人乳腺癌細胞）

①圖中通過驅(qū)動細胞和測試細胞反復(fù)免疫小鼠產(chǎn)生抗體的過程屬于.（填“細胞”或

“體液”）免疫，參與該過程的免疫細胞來源于小鼠骨髓O實驗小鼠機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的

過程中，輔助性T細胞的主要作用是o該實驗最適用于篩選_____（填標號）。

A.大鼠肝細胞區(qū)別于兔肝細胞特殊抗原的抗體

B.正常細胞區(qū)別于感染HIV細胞內(nèi)特殊抗原的抗體

C.衰老神經(jīng)細胞區(qū)別于正常神經(jīng)細胞抗原的抗體

②取第二組小鼠分離脾細胞，加入誘導脾細胞和骨髓瘤細胞的融合。

(2)CAR基因的構(gòu)建，流程如下圖。

scFv基因片段多步操作________技術(shù)

----------,?|-P--C-R------1

雜交瘤細胞高特異性特異性高、結(jié)合激活T細胞激活T細胞

抗體DNA能力盅的scFv基因片段1基因片段2

基因片段

完整CAR基因

在設(shè)計添加CAR基因兩端限制酶識別序列并與表達載體正確連接的過程中，必須考慮的

有(填標號)。

A.PCR使用的上、下游引物需含限制酶識別序列

B.CAR基因內(nèi)可以含有引物所含限制酶識別序列

C.限制酶識別序列需位于載體啟動子、復(fù)制原點和標記基因內(nèi)

D.上、下游引物所含限制酶識別序列不同

E.CAR基因插入載體位點需位于啟動子下游

(3)從免疫學角度分析，如果用高特異性抗體DNA直接構(gòu)建CAR基因，再通過載體導入

T細胞并穩(wěn)定表達，不但會使治療效果大幅降低，同時還會______o

3.研究人員利用基因編輯技術(shù)和體細胞克隆技術(shù)成功獲得了載脂蛋白E(ApoE)基因和低密度

脂蛋白受體(LDLR)基因雙敲除(即兩個基因都失活)的五指山小型豬，該小型豬在飼喂普通飼料

的情況下會出現(xiàn)高血脂，并能自發(fā)產(chǎn)生明顯的動脈粥樣硬化(AS),為后繼研究提供了重要的

AS動物模型。

回答下列問題：

(1)基因編輯載體構(gòu)建。從中獲取豬的ApoE和LDLR基因序列，設(shè)計相應(yīng)引物，人

工合成。將pX458質(zhì)粒酶切后電泳，加樣孔在極一端，上樣緩沖液中需要加入少許,

它遷移速度較快，在其遷移出凝膠前停止電泳。膠回收產(chǎn)物與引物連接，轉(zhuǎn)化處于—的大腸

桿菌，經(jīng)過篩選、DNA測序確認目標大腸桿菌，將菌液擴增培養(yǎng)，提取質(zhì)粒備用。

(2)體細胞電轉(zhuǎn)和鑒定。用—擦拭30日齡雌性和雄性豬耳朵消毒，剪取耳組織，眼科剪

剪碎，用胰蛋白酶或—等分散耳組織，篩選分散細胞中的成纖維細胞作為初始材料進行—

培養(yǎng)。貼壁細胞達到生長基質(zhì)80%表面面積后，37.5℃,用0.1%胰蛋白酶處理2分鐘，加入5

倍體積的細胞培養(yǎng)液以—，制成細胞懸液。將質(zhì)粒和成纖維細胞置于離心管中，用電擊法處

理，分選、鑒定、得到目標成纖維細胞株。

(3)細胞核移植。從屠宰場收集卵巢，人工抽取卵母細胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)42~44小時至

其，去除細胞核，將目標成纖維細胞與去核卵細胞進行電融合，電融合可以促進細胞融合，

同時還起到的作用。

(4)胚胎移植。由于—，胚胎移植成為胚胎工程中獲得后代的唯一方法。選擇手術(shù)移植

前一天開始—的母豬作為代孕母體，將發(fā)育良好的囊胚植入輸卵管，共